HPLC法测定颠茄磺苄啶片中的SMZ和TMP的含量

韩丹丹

哈药集团制药六厂 150000

HPLC法测定颠茄磺苄啶片中的SMZ和TMP的含量

韩丹丹

哈药集团制药六厂 150000

目的：探讨高效液相色谱法在对颠茄磺苄啶片中两种成分的含量测定中所起到的作用及可行性。方法：采用ZorbaxSB-C.色谱柱(150mmx4.6mm，5μm)，以pH为2.5的0.025μg·mL-1磷酸盐缓冲液一乙腈(75：25)为流动相，流速为1.0μg·mL-1，检测波长为230nm，进样量20，用外标法测定。结果：SMZ在16—160μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为99.75%，RSD为0.35%，TMP在3.2—32μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为100.7%，RSD为0.51%.结论：采用HPLC法来对颠茄磺苄啶片中的SMZ和TMP进行含量测定具有很好的简便性，且测定结果准确可靠，值得推广。

HPLC；颠茄磺苄啶片；TMP；SMZ

所谓颠茄磺苄啶片，俗称泻利停，常常被用来治疗腹泻、痢疾杆菌引起的慢性菌痢和其他敏感致病菌引起的肠炎。作为一种止泻药物，颠

噁茄磺苄啶片是一种复方制剂，其主要的药物成分是磺胺甲 唑(SMZ)，甲氧苄啶(TMP)及颠茄流浸膏，是磺胺类广谱抗菌药。其药理作用是磺胺甲噁唑（SMZ）与甲氧苄啶（TMP）有协同抑菌和杀菌作用。对非产酶金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙门菌属、变形杆菌属、摩根菌属、志贺菌属等肠杆菌科细菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌均具有良好抗菌作用，尤其对大肠埃希菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的抗菌作用较SMZ单药明显增强。此外在体外对沙眼衣原体、星形奴卡菌、原虫、弓形虫等亦具良好抗微生物活性。

由此可见，在颠茄磺苄啶片中，SMZ和TMP是最主要的成分，其含量是否达标决定了颠茄磺苄啶片的质量好坏。为此需要对其含量进行有效测定。在此本文就探讨了HPLC法在其测定中的具体使用过程，报道如下：

1.实验材料与仪器

1.1 药品与试剂

颠茄磺苄啶片(哈药集团制药六厂)，TMP和 SMZ对照品(中国药品生物制品检定所)，乙腈为色谱纯(CaledonLaborato—riesLTD.)，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

Agilent 1100 LC系统：四元泵、在线真空脱气机，可变波长紫外检测器(VWD)，Agilent ChemStation工作站；TU-1221紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；电子天平(Sartorious.BP211D)。所用仪器和量具均经检定和校正。

2、实验方法

2.1 色谱条件及系统适应性试验色谱柱：ZorbaxSB—Cl8柱(150mmx4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液(0.025 mol·L-1磷酸二氢钾用磷酸调pH为2.50±0.05)-乙腈(75：25)；检测波长：230nm；柱温30℃；流速：1.0mL?min一；进样体积：20tLL.716一药物分析杂志ChinJPharmAnal2005，25(6)TMP与SMZ的理论塔板数分别为6800和10300，与各杂质峰和辅料峰的分离度均大于1.5。见图1。

图1 SMZ和TMP液相色谱图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的对照品TMP与SMZ各16mg和80mg，置 100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液.精取对照品储备溶液2mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取颠茄磺苄啶片相当于TMP和SMZ各16mg和80mg的量，置100mL量瓶中，加甲醇适量，经超声处理15min后，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，经0.45m滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.4 标准曲线

分别吸取上述对照品储备溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进样，结果表明，TMP在3.2-32μg·mL-1范围内，SMZ在16-160μg·mL-1范围内线性关系良好，分别以二组分的浓度(μg·mL-1)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)作图，回归方程TMP，SMZ分别为

2.5 精密度试验

取上述对照品溶液2.0mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，连续进样10次，每次20L，测定峰面积.TMP的RSD为0.41%，SMZ的RSD为0.50%。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别于0，2，4，8h进样，每次20L，测定峰面积.TMP的RSD为1.15%，SMZ的RSD为0.67%。

2.7 回收率试验

按处方比例的 80%，100%，120%分别精密称取一定量的TMP，SMZ对照品及颠茄流浸膏，淀粉，羧甲基淀粉，硬脂酸镁等辅料，每个浓度配制3份，置100mL量瓶中，用甲醇溶解，并经超声处理15min后，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45m滤膜过滤，精密量取2mL置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样 20ILL.TMP的平均回收率(RSD)为100.7%(0.51%)，SMZ的平均回收率(RSD)为99.75%(0.35%)。

2.8 样品测定

取TMP和SMZ对照品及颠茄磺苄啶片3批，按含量测定方法按外标法计算各批中二组分的含量，结果批号为170301的TMP含量为100.7%，SMZ为99.8%；批号为170302的TMP含量为100.5%，SMZ为99.5%；批号为170303的TMP含量为100.2%，SMZ为100.0%。

3 讨论

3.1 生产厂家在执行《国家药品标准》2015版），厂家按处方100%投料，在检测中间体颗粒时TMP含量偏高，SMZ含量较为正常，且除2个组分的峰外，无其他明显辅料和杂质峰。按本文色谱条件检测，发现TMP色谱峰前有一个明显的杂质峰，见图1。按处方配制的颠茄流浸膏按本法色谱条件，检出在TMP色谱峰前的杂质峰，见图2。

图2 颠茄流浸膏色谱图

3.2 pH值的选择选择pH值为2.50能在较短的时间内使各组分均能达到很好的分离，特别使杂质峰和辅料峰的分离，从而不影响分析结果的准确性。

3.3 流动相的组成比随着乙腈浓度的增加，各组分的保留时间明显提前，分离效果不佳。考虑各组分的分离状态与分析时间，将流动相组成比例定为磷酸盐缓冲液-乙腈(75：25)。

总之，作为一种消炎抗菌的止泻药物，其作用机制为：SMZ作用于二氢叶酸合成酶，干扰合成叶酸的第一步，TMP作用于叶酸合成代谢的第二步，选择性抑制二氢叶酸还原酶的作用，二者合用可使细菌的叶酸代谢受到双重阻断。本品的协同抗菌作用较单药增强，对其呈现耐药菌株减少。然而近年来细菌对本品的耐药性亦呈增高趋势。颠茄为M胆碱受体阻断药，能抑制乙酰胆碱的毒蕈碱样作用，主要系抑制节后胆碱能神经支配的自主性效应器部位乙酰胆碱的活动，受乙酰胆碱的平滑肌的活动也被抑制。抑制平滑肌、心肌、窦房结和房室结，以及外分泌腺等的兴奋。较大量的颠茄也能减少胃肠的蠕动和分泌，降低输尿管和膀胱的张力，对胆总管和胆囊仅略为松弛。

颠茄磺苄啶片中的SMZ和TMP是最主要的药用成分。在生产药品的过程中，必须要合理控制两者的含量和比例，采取有效检测方法进行含量测定，确保药品质量。

[1]郝立芳.RP-HPLC法测定颠茄磺苄啶片中磺胺甲基异噁唑与甲氧苄啶含量[J].药学与临床研究,2004,12(3):23-25.

[2]丁建,朱斌清,王玲娜.RP—HPLC法同时测定颠茄磺苄啶片中SMZ和TMP的含量[J].药物分析杂志,2005(6):715-716.

[3]赵明,隋译,孙菲,等.颠茄磺苄啶片溶出度测定方法研究[J].中国医药导报,2009,6(21):50-51.

R473.5

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1672-5018（2017）03-219-01