干燥方法对金银花多糖含量的影响△

陈燕文，王玲娜，梁从莲，刘谦，李佳，胡晶红，张永清

(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)

·中药农业·

干燥方法对金银花多糖含量的影响△

陈燕文，王玲娜，梁从莲，刘谦，李佳，胡晶红，张永清*

(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)

比较五种不同干燥方法对金银花多糖含量的影响。方法：把同一地区的同一金银花品种，分别采用硅胶阴干法、烘房烘干法、杀青干燥法、自然晒干法和冷冻干燥方法进行干燥，得到硅胶阴干品、烘房烘干品、杀青干燥品、自然晒干品和真空冷冻干燥品。用20倍量的95%乙醇在60 ℃条件下预处理2次(每次1小时)，弃滤液，残渣用超声辅助热水提取法提取，提取液经过sevage法除蛋白精制，苯酚-硫酸法测定金银花多糖的含量。结果：杀青干燥品金银花多糖含量最高，为14.57%，冷冻干燥品金银花多糖含量次之，为13.31%，硅胶阴干品金银花多糖含量最低，仅为11.29%。结论：结合对金银花的已有研究，从金银花多糖含量方面考察，得出杀青干燥法为金银花的最佳干燥方式。

金银花，多糖含量，干燥方法

金银花是中医临床最常应用的中药材之一，系忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花[1]，含有绿原酸、三萜皂苷、黄酮和多糖等多种成分，具有清热解毒、凉风散热、抗菌、抗炎解热、抗氧化和利胆保肝等药理活性，用于治疗外感风热、温病初起、红肿热痛、疮疡和便脓血等病症[2]。多糖作为维持动植物机体正常生命活动的基础物质之一，具有增强机体免疫力、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗菌、抗氧化和抗病毒等活性[3]，在金银花中有着较高含量。在进行金银花药材质量评价时，常以绿原酸、木犀草苷等成分含量作为指标。为全面衡量药材质量，考察的成分种类越多越好。虽然多糖属于重要的活性成分，但至今为止未见将多糖含量作为评价金银花药材质量指标的报道[4-5]。本文研究了干燥方法对金银花多糖含量的影响。

1 材料、试剂与仪器

1.1材料

金银花药材：采自山东省平邑县郑城镇山东双花制药有限公司金银花GAP基地，花期采摘植株上的二白期花蕾，混匀后，分成5份，分别采用硅胶阴干、晒干、烘箱烘干、真空冷冻干燥和杀青干燥等方法进行干燥[6-9]。①晒干，将鲜金银花均匀撒铺在干燥洁净的晒筐内，厚度为1～2cm，在阳光直射的地方晾晒至干。②硅胶干燥，将鲜金银花放进盛有干燥硅胶的保鲜盒内，加盖密封，至干燥。③烘箱烘干，把鲜金银花均匀铺放在不锈钢托盘内，厚度为2～3cm，置于50℃烘箱内烘干。④真空冷冻干燥，将鲜金银花铺放在不锈钢托盘内，厚度为3～5cm，放于真空冷冻干燥机内，打开冻干仓约4h至温度降至-45.0℃，关闭冻干仓，打开真空泵，当压强降至200pa以下时，打开循环泵、电加热，约8h，至干燥后关闭冻干机，出料。⑤杀青干燥，将鲜金银花放入到杀青干燥机内，用高温蒸汽灭活3～5min，使酶完全灭活，然后再平铺到不锈钢托盘内，厚度2～3cm，晾干表面水分，再置入70℃烘箱内烘干。将干燥的金银花密封，置于阴凉干燥处备用。

药材经山东中医药大学张永清教授鉴定，确认为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾。

1.2试剂

葡萄糖标准品，无水乙醇，丙酮，氯仿，正丁醇，浓硫酸，苯酚等。均为分析纯。

1.3仪器

HH6数显恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公司)，LE204E/02电子天平(梅特勒-托利多公司)，KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，GLF-500型恒温干燥箱(天津市莱博特瑞仪器设备有限公司)，TDZ4-WS台式提速离心机(长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)循环水真空泵(巩义市英峪高科仪器厂)，UV5100B型紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司)，真空冷冻干燥机(日照市凯良食品设备有限公司)。

2 金银花多糖含量测定方法

2.1标准溶液制备

精确称取在105℃条件下干燥至恒重的葡萄糖标准品500mg，溶解到盛有一定量的蒸馏水的小烧杯中，然后转移到100mL的容量瓶中定容至刻度，配成5.0mg·mL-1的葡萄糖溶液，随后吸取1.0mL转移至另一100mL的容量瓶中加蒸馏水定容，配制成0.05mg·mL-1的葡萄糖标准溶液，备用。

2.2多糖提取与精制

采用超声辅助热水提取法提取金银花多糖。具体步骤为[10-12]：取上述5种方法干燥的金银花，粉碎，过40目筛，分别准确称取1.0g，装入圆底烧瓶中，加入20倍量95%乙醇，60℃水浴提取1h，抽滤，滤渣按上述方法再提取1次[13]，最后用无水乙醇和丙酮分别洗涤3次，所得预处理后的金银花粉中加入50倍量蒸馏水，50℃超声振荡20min，后在90℃水浴加热浸提3h，趁热用真空泵抽滤除去不溶性杂质，然后在滤液中加入1/5体积氯仿和氯仿1/5体积的正丁醇，充分震荡3～5min，在4000r·min-1转速下离心，除去有机层，上清液加入上述体积的氯仿和正丁醇重复5次操作。然后把上清液转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，然后分别吸取1.0mL加入50mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，放置备用。

2.3方法学考察

2.3.1 线性关系考察 用移液枪精确吸取葡萄糖标准液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL分别加入5只干燥洁净的试管中，再用移液枪移取1.6、1.2、0.8、0.4、0mL的蒸馏水加入对应的试管中，摇匀。准确移取1.0mL5.0%的苯酚溶液加入每只试管中，摇匀后迅速加入5.0mL浓硫酸，摇匀，在50℃的水浴锅中保温反应10～15min。另取一只洁净干燥的试管加入2.0mL的蒸馏水，按上述步骤分别加入1.0mL1.0%的苯酚和5.0mL浓硫酸做空白组。在490nm波长的紫外分光光度计下测吸光度，作标准曲线[14-15]，得出回归方程：y=65.4x+0.057 7，R2=0.998 89，r=0.999 44说明在0.002 5～0.012 5 mg·mL-1的浓度范围内葡萄糖标液的标准曲线线性关系良好。标准曲线图如图1。

2.3.2 重复性检验 精确量取2.3项中提取所得烘干品溶液2.0 mL分别置于6只具塞试管中，余下操作按2.4.1项下进行，最后于490 nm波长的紫外分光光度计下分别测定其吸光度。结果分别为0.463，0.459，0.446，0.453，0.471，0.461，求得RSD=1.87%，说明该方法重复性良好。

2.3.3 精密度检验 精确量取2.3项中提取所得烘干品溶液2.0 mL置于具塞试管中，余下操作按2.3.1项下进行，最后于490 nm波长的紫外分光光度计下连续测定6次吸光度。结果分别为0.472，0.467，0.469，0.471，0.469，0.473，求得RSD=0.47%，说明该方法精密度良好。

图1 葡萄糖标准曲线

2.3.4 稳定性试验 精确量取2.3项下提取所得烘干法干燥品溶液2.0 mL置于一具塞试管中，余下操作按2.3.1项下进行。于60 min内每10 min测1次吸光度，测定过程中待测溶液始终置于50 ℃的水浴锅内保温。结果分别为：0.462，0.467，0.461，0.465，0.463，0.464，求得RSD=0.46%，说明该方法稳定性良好。

2.3.5 加样回收试验 精确吸取已知含量的2.3项中所得烘干法的干燥品溶液1.0 mL分别置于6只具塞试管中，再精确量取浓度为0.05 mg·mL-1的葡萄糖标准溶液1.0 mL依次加入上述6只试管中，余下操作按2.3.1项下进行，最后于490 nm波长的紫外分光光度计下测定吸光度，结果如表1。

2.5多糖含量测定

取2.3项中提取的各干燥品的金银花多糖溶液2.0mL，按照2.4.1项中制备标准曲线的方法依次加入1.0mL5.0%的苯酚和5.0mL浓硫酸在490nm波长的紫外灯下测吸光度，把测得的吸光度代入回

表1 回收率试验结果

归方程中，求出各样品的浓度，再根据浓度计算各样品中多糖的百分含量，结果如表2。有实验结果可以看出，杀青干燥法所得的金银花多糖含量最高，为14.57%，冷冻干燥法所得金银花含糖量次之，为13.31%，晒干品和烘干品含量较低分别为12.52%和12.30%，而硅胶阴干法所得金银花多糖含量最低，为11.29%。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

研究表明，金银花多糖具有抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖血脂等药理活性。文献报道不同干燥方法获得的金银花中的绿原酸、黄酮类和皂苷类化合物的含量差异较大[4-5]，然而很少有研究者考察从多糖方面来考察金银花的质量控制。本文基于对金银花多糖的已有研究，通过考察不同干燥方法对金银花多糖含量的影响，本实验根据金银花多糖的强极性，利用相似相容性原理采用超声辅助热水提取法提取金银花多糖，实验过程中为了提高多糖的提取率，采取增加溶剂水的倍数和延长提取时间的方法提取多糖成份，利用Sevage法除去多糖中的蛋白质，苯酚-硫酸法测定多糖含量。实验结果得出杀青干燥法所得金银花多糖含量最高，达到了14.57%，冷冻干燥法所得金银花多糖含量次之，为13.31%，而硅胶阴干法多糖含量最低仅为11.29%。2015版国家药典规定，金银花的质量控制主要考察黄酮和绿原酸的含量，为增强本论文结论的说服力，参考已有研究宋健等[9]以绿原酸、木犀草苷的含量为指标，考察了金银花最佳产地加工方法，得出杀青干燥法金银花干燥品中二者的含量分别比鲜品晒干高12.8%、24.9%，比鲜品阴干高7.8%、54.3%；熊艳等[16]通过HPLC指纹图谱比较同一采收期同一品种不同干燥技术对金银花品质的影响，结果杀青干燥法金银花绿原酸含量最高，达6.90%；汪冶等[17]以绿原酸含量和金银花药材外观综合考察湘蕾金银花的最佳干燥方式，结果显示杀青干燥法为金银花的最佳干燥方法；本实验通过考察干燥方式对金银花多糖含量的影响也得出杀青干燥法为金银花最佳干燥方式。得出这样实验结果的可能原因为，杀青干燥法经过快速升温阶段达到高温，高温对金银花中多种酶进行灭活，使在以后干燥过程中减少酶解对多糖、绿原酸和木犀草苷等的降解。真空冷冻干燥法整个干燥过程大多数时间都是较低的温度下进行的，而低温条件不利于酶的降解活动，所以真空冷冻干燥法所得金银花多糖含量较高。阴干法是在较温和的条件下干燥，此条件有利于酶降解多糖，所以多糖含量最低。结合对金银花的已有研究，从金银花多糖含量考察金银花质量，结果得出杀青干燥法为金银花最佳干燥方式。

金银花多糖的开发研究尚处于起步阶段，本研究仅考察不同干燥方式对金银花多糖的含量的影响，今后的课题方向将重点研究金银花多糖的纯化及药理活性，阐明其活性机理，为金银花的深入研究和综合开发利用提供理论依据。

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Effect of Different Drying Methods on Content of Polysaccharide fromFlosLonicerae

CHEN Yanwen，WANG Lingna，LIANG Conglian，LIU Qian，LI Jia，HU Jinghong，ZHANG Yongqing*

(Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)

Objective：To compare the influence of five different drying methods on Flos Lonicerae polysaccharide content.Methods：The Flos Lonicerae collected from the same area of the same species，using different drying methods for drying including silica drying，room drying，fixing dry，natural sun drying and vacuum freeze-drying.With 20 times the amount of 95% ethanol preteatment 2 times at 60 ℃(1 hour each)，the filtrate was discard，the residue was extracted with ultrasonic assisted hot water method，the polysaccharide was purified through sevage method to eliminate the protein，Flos Lonicerae polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method.Result：The fixing dry product Flos Lonicerae polysaccharide content was the highest，reaching 14.57%，freezing dry goods Flos Lonicerae polysaccharide content followed with the content of 13.31%，silicone dry goods Flos Lonicerae polysaccharide was minimum with the content of 11.29%.Conclusion：Combined with the existing research on Flos Lonicerae from the aspect of Flos Lonicerae polysaccharide content，fixing dry method is the best way to dry Flos Lonicerae.

Flos Lonicerae；content of polysaccharide；drying methods

国家科技支撑计划“金银花规范化种植基地优化升级及系列产品综合开发研究”(2011BAI06B01)课题；山东省科技发展计划项目“山东道地药材资源质量控制科技平台建设”课题(2008GG2NS02022)；山东省现代农业产业技术体系中草药产业创新团队建设项目(2015)

] 张永清，教授，研究方向：中药资源及其质量控制；E-mail：zyq622003@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.018

2016-04-10)

*[