三种鸡菌属真菌核苷及嘌呤碱基类成分含量测定△

高艳云，张园娇，张倩，陈建伟*

(1.南京中医药大学 附属医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学 药学院，江苏 南京 210023)

·基础研究·

高艳云1,2，张园娇2，张倩2，陈建伟2*

(1.南京中医药大学 附属医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学 药学院，江苏 南京 210023)

1 仪器与试药

1.1仪器

Waters2695高效液相色谱仪(Waters2489型PDA检测器，Empower工作站)；BT1250电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；KH-500DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；SAGA-10TQ易普易达超纯水仪(南京易普易达科技发展有限公司)。

1.2试药

中医药大学中药资源学教研室陈建伟教授鉴定。

对照品：黄嘌呤(批号：1001279304)、腺苷(批号：101183448)、肌苷(批号：1001271021)、次黄嘌呤(批号：1001392976)、鸟苷(批号：1001662525)、尿苷(批号：1001290893)、胞苷(批号：101069370)购于SIGMA公司。

甲醇(Fisher chemical，批号：155175)；磷酸(南京化学试剂有限公司，批号：13112612030)；水为去离子水。

2 方法与结果

2.1色谱条件

采用WatersXbridgeC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱为0～10min，2%～5%甲醇；10～18min，5%～10%甲醇；18～25min，10%～25%甲醇；25～35min，25%～80%甲醇；流速为0.8mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为260nm，进样量为10μL。

2.2对照品和供试品溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液制备 精密称取次黄嘌呤、黄嘌呤、胞苷、腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷的对照品适量，用15%甲醇水溶液配制成质量浓度分别为79.84、402.00、120.12、201.80、80.48、80.00、160.00μg·mL-1的混合对照品溶液。

2.3方法学考察

2.3.2 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0置10mL容量瓶中，加15%甲醇定容至刻度，离心后取10μL注入高效液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进行分析，以峰面积Y对进样量X进行回归计算，回归方程见表1。

注：1.胞苷；2.次黄嘌呤；3.黄嘌呤；4.尿苷；5.腺苷；6.鸟苷；7.肌苷。图1 混合对照品和鸡供试品溶液的HPLC图

对照品回归方程线性范围/μg·mL-1r次黄嘌呤Y=32807X-98354.99～79.840.9999黄嘌呤Y=5166X+5881025.13～402.000.9999胞苷Y=20825X-151137.51～120.120.9997尿苷Y=31414X-2631312.61～201.800.9998腺苷Y=40974X-153965.03～80.480.9998鸟苷Y=28428X-117055.00～80.000.9996肌苷Y=19616X-1586910.00～160.000.9997

2.3.3精密度试验 取2.2.1项下混合对照品溶液按2.1项下色谱条件分别连续进样测定6次，测定2种嘌呤碱基及5种核苷类化合物的峰面积并计算其RSD。结果显示次黄嘌呤、黄嘌呤、胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷、肌苷的RSD分别为0.6%、0.7%、0.5%、0.6%、0.6%、0.6%、0.6%，符合精密度要求。

并计算RSD。结果显示次黄嘌呤、黄嘌呤、胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷、肌苷的RSD分别为0.7%、2.1%、1.8%、1.3%、1.4%、2.1%、2.0%。表明供试品溶液在20 h内稳定性良好。

2.4样品含量测定

表2 黄鸡中2种嘌呤碱基及5种核苷的加样回收率试验结果(n=6)

表3 3种鸡中2种嘌呤碱基及5种核苷成分的含量 /mg·g-1

3 讨论

[1] 王鹏飞，何隽，周文，等.蚁巢伞属真菌研究进展[J].微生物通报，2012，39(10)：1487-1498.

[2] 王一心，狄勇，杨桂芝.鸡枞菌在大鼠高胆固醇血症中的抗氧化作用[J].中国预防医学杂志，2005，6(1)：10-12.

[3] 周继平，许泓瑜.鸡枞菌粉不同组分的体外抗氧化活性研究[J].中国野生植物资源，2008，27(5)：46-49.

[4] 赵云霞，陶眀煊，陆文娟，等.鸡枞菌多糖对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J].食品科学，2014，35(19)：260-265.

[5] 邢佳，陶明煊，郭宇星，等.鸡枞菌精多糖对酒精性损伤小鼠肾及免疫器官的抗氧化作用[J].食品科学，2014，35(9)：246-249.

[6] 陆奕宇，敖宗华，成成，等.鸡枞菌粉提取物镇痛抗炎作用的研究[J].中成药，2007，19(12)：1742-1745.

[7] 张雪梅，杨丰庆，夏之宁.食品中核苷类成分的药理作用研究进展[J].食品科学，2012，33(9)：277-282.

[8] 陈东东，陈亚运，周萍，等.HPLC同时测定延胡索6个核苷成分含量[J].天然产物研究与开发，2015，27(9)：1571-1575.

[9] Ranogajec A，Beluhan S，Smit Z.Analysis of nucleosides and monophosphate nucleotides from mushrooms with reversed-phase HPLC[J].J Sep Sci，2010，33(8)：1024-1033.

[10] 夏文娟，曾晓英，袁海龙，等.不同产地冬虫夏草腺苷含量的测定[J].中国中药杂志，2001，26(8)：540-542.

[11] Bekar L，Libionka W，Tian G，et al.Maiken Nedergaard.Adenosine is crucial for deep brain stimulation-mediated attenuation of tremor[J].Nat Med，2008，14(1)：75-80.

Determination of Nucleoside and Purine Bases in Three Kinds of Fruiting Body ofTermitomyces

GAO Yanyun1,2，Zhang Yuanjiao2，Zhang Qian2，CHEN Jianwei2*

(1.Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，210029；2.School of Pharmacy，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，210023)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of nucleoside components in the fruiting body ofTermitomycesalbuminosus，T.eurrhizusandT.aurantiacus.Methods：The assay was performed on a Waters Xbridge C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column，mobile phase consisted of methanol-0.1% orthophosphoric acid water with gradient elution at the flow rate of 0.8 mL·min-1，column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 260 nm.Results: The three kinds of fruiting body ofTermitomycesall checked out 2 kinds of purine base and 5 kinds of nucleoside，including hypoxanthine，xanthine，cytidine，adenosine，guanosine，uridine，inosine，and they showed good linearity(r≥0.999 6)in the range of 7.51-120.12，4.99-79.84，25.13-402.00，12.61-201.80，5.03-80.48，5.00-80.00，10.00-160.00 μg·mL-1，respectively.The average recoveries(n=6)were within 95.83%-103.01% with RSD≤3.98%.The contents of 2 kinds of purine base and 5 kinds of nucleoside components in the fruiting body ofT.albuminosuswere 0.36,3.13,2.20,3.63,1.11,1.87,1.50 mg·g-1，respectively，they in the fruiting body ofT.eurrhizuswere 0.10,0.78,1.86,3.07,1.48,1.70,0.62 mg·g-1respectively，and they in the fruiting body ofT.aurantiacuswere 0.22,2.53,1.86,2.35,0.78,0.84,0.83 mg·g-1，respectively.Conclusion: This HPLC method was simple，accurate and reducible，and can be used for quality evaluation and quality control ofTermitomyces.The three kinds of fruiting body ofTermitomyceswould have higher study value for medicine，nutrition and health food.

Termitomyces；nucleoside；purine base；HPLC；content determination

江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)；我国水生、耐盐中药资源的合理利用研究行业专项(201407002)

] 陈建伟，教授，研究方向：中药品质评价研究；Tel：(025)85811280，E-mail：chenjw695@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.014

2016-04-14)

*[