植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药残留检测技术研究

张 云 陈俊玉 陈泽宇 张信仁

(三明出入境检验检疫局1，三明 365000)(东山出入境检验检疫局2，漳州 363401)

植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药残留检测技术研究

张 云1陈俊玉2陈泽宇1张信仁1

(三明出入境检验检疫局1，三明 365000)
(东山出入境检验检疫局2，漳州 363401)

建立了同时测定植物油中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺3种邻氨基苯甲二酰胺类农药残留的凝胶渗透色谱(GPC)-液相色谱检测方法。植物油中残留的邻氨基苯甲二酰胺类农药，经环已烷-乙酸乙酯混合溶液提取后，用凝胶渗透色谱系统净化，以乙腈∶0.1mol/L的乙酸铵水溶液(58∶42)作为流动相，DAD检测器测定，外标法定量。测定结果表明：采用本方法检测植物油中3种邻氨基苯甲二酰胺类农药，方法检出限均能达到0.1mg/kg，在标准曲线质量浓度0.1～2 mg/L之间线性相关系数均大于0.999 8，在0.1、0.2、1mg/kg水平添加回收，回收率在70.1%～99.1%范围之间，准确度较高；相对标准偏差范围在3.0%～9.7%之间，精密度较好。

植物油 邻氨基苯甲二酰胺 凝胶渗透色谱 液相色谱

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

Agilent1200高效液相色谱仪(配DAD检测器)、Autoclean凝胶渗透色谱仪：美国LabTech公司。

菜籽油：市售。乙腈、甲醇、乙酸胺为色谱纯，环已烷、乙酸乙酯为分析纯。水：符合GB/T 6682—2008中一级水的规定。 溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺标准品，纯度均≥97%：Dr.Ehrenstorfer公司。分别称取适量标准品用甲醇配制成100 mg/L的标准储备液，该溶液在2～8 ℃环境中可保存3个月。使用时根据需要以流动相配成标准工作液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品前处理

称取食用油样品2 g(精确至0.1 g)于10mL容量瓶中，加入环已烷-乙酸乙酯(1∶1，体积比)混合溶液定容至刻度，取样液2mL进样，用凝胶渗透色谱仪进行分离净化，收集9～15 min的组分，于氮吹仪中50 ℃条件下氮吹至干，用1 mL流动相漩涡混匀溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜后，高效液相色谱测定。

1.2.2 凝胶渗透色谱条件

净化柱：S-X3 Bio-Beads(粒径38～75 μm，填料22 g)；流动相：环已烷-乙酸乙酯(1∶1，体积比)；等度洗脱；流速：5 mL/min；净化程序：0～9 min弃去洗脱液，9～16 min收集洗脱液。

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1.2.3 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-P柱，150 mm×4.6 mm(i.d.)，5 μm，或其它等效色谱柱；柱温：40 ℃；进样量：50 μL；流速：1.0 mL/min；检测器：DAD 检测器，波长：240 nm；流动相：乙腈∶0.1mol/L的乙酸铵水溶液=58∶42。

1.2.4 定量测定

用混合标准工作溶液对样品溶液进行外标法定量，样品溶液中待测物的响应值应与相应浓度的对照标准物质响应值相当。

2 结果与讨论

2.1 净化条件的选择与优化

在植物油中检测农药残留，高含量的油脂成分是最大的基体干扰要素，必须采用有效的前处理方法，否则不但回收率不高，而且会对分析仪器造成严重污染，降低使用寿命[16]。常见的针对植物油中农药残留检测方法主要有浸泡振荡、液-液分配、超声提取等传统方法[17]，但该方法存在回收率低，净化不彻底等问题；也有报道采用固相萃取法[18]进行净化，固相萃取柱可以去除植物油基质，有机酸等杂质，但存在选择性不高，处理过程较为繁琐等缺点。凝胶渗透色谱能将分子量较大的甘油三酯基质与目标农药组分有效分离开来，净化效果良好，且省去了大量的人工操作，近年来得到广泛推广使用[19]。植物油中农药残留检测不同净化方法对比见表1。

表1 植物油中农药残留检测不同净化方法对比

利用凝胶渗透色谱法对植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药进行净化。为确定最佳的样品收集时间，从6 min起，以1 min为步长，每分钟收集1管洗脱液，共收集15管，收集液于氮吹仪中50 ℃条件下氮吹至干，流动相溶解后过滤，液相色谱测定。结果表明，前3管未检出，后5管也均未检出，检测结果见图1。因此，确定收集时间为9～15 min。

图1 添加1 mg/kg目标物各时间段检出结果

2.2 色谱条件的优化

乙腈和甲醇是检测农药残留最常用的2种有机系流动相。亢晓冬等[13]曾采用(甲醇+水)作为氯虫苯甲酰胺的流动相，也有报道采用(乙腈+水+磷酸)作为流动相[20]。为了获取目标物较好的保留、分离和响应效果，本试验对比了(甲醇+水)、(乙腈+水+磷酸)以及(乙腈+水)作为流动相的效果，发现采用乙腈为有机系流动相时分离效果较好，灵敏度较高，且柱压较低。对比了乙腈为有机系流动相时，加酸与不加酸条件下的信号大小，结果基本一致，但添加一定浓度的乙酸铵，峰型较好，标准样品谱图见图2。

注:a为溴氰虫酰胺；b为氯虫苯甲酰胺；c为氟虫双酰胺图2 0.1 mg/L双酰胺类标准品色谱图

2.3 方法的线性相关性和测定低限

准确配制邻氨基苯甲二酰胺类系列标准溶液，质量浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、2 mg/L。按照1.2中的仪器条件进样分析后，以峰面积y对质量浓度x绘制工作曲线。线性相关系数R均大于等于0.999 8，在0.1～2mg/L范围内呈良好的线性关系，结果见表2。根据信噪比S/N≥10为定量限(limit of quantitation, LOQ)和S/N≥3为检出限(limit of detection, LOD)的参考规定，结合样品处理过程中的稀释倍数，计算各组分的方法检出限分别为0.008、0.027、0.016 mg/kg，定量限分别为0.03、0.09和0.06 mg/kg。

表2 邻氨基苯甲二酰胺类农药的线性回归方程、 相关系数、检出限和定量限

2.4 方法的准确度和精密度试验

以不含溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺的植物油样品为本底，分别添加系列浓度的待测药物标准溶液，进行回收率试验，重复测定6次，计算平均回收率和相对标准偏差。结果见表3。方法回收率在70.1%～99.1%之间，同一目标物的平均回收率随着添加浓度的增加而逐渐提高；相对标准偏差在3.0～9.7之间，在高的添加水平上，相对标准偏差更小，结果重复性更好。

表3 植物油样品中邻氨基苯甲二酰胺类农药 的回收率和精密度(n=6)

2.5 实际样品测定

应用本研究所建立的方法对市场上购买的10批菜籽油样品进行检测，结果在一批样品中检出氯虫苯甲酰胺，检出值为0.41 mg/kg，超过GB 2763中规定的最大残留限量0.3 mg/kg。由图3可见，在目标物质出峰前后没有杂质峰干扰。

图3 实际样品色谱图

3 结论

本研究将GPC净化技术和液相色谱检测技术相结合测定植物油中溴氰虫酰胺、氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺等3种邻氨基苯甲二酰胺类农药残留。各化合物测定低限均可达到0.1mg/kg；在质量浓度0.1～2mg/L之间线性关系良好，相关系数R均大于0.999 8；对于0.1、0.2、1 mg/kg 3个水平添加回收，回收率在70.1%～99.1%之间，相对标准偏差在3.0%～9.7%之间。该方法快速简便、灵敏度高、净化效果好，显著地缩短了检测时间，可应用于植物油中邻氨基苯甲二酰胺类农药的快速分析。

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Detection Technology of O-Amino Benzoic Diamide Pesticide Residues in Vegetable Oil

Zhang Yun1Chen Junyu2Chen Zeyu1Zhang Xinren1

(Sanming Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau1, Sanming 365000) (Dongshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau2, Zhangzhou 363401)

A gel permeation chromatography (GPC)-liquid chromatography method was developed for the simultaneous determination of 3 kinds of o-amino benzoic diamide pesticide residues (cyantraniliprole, flubendiamide and chlorantraniliprole) in vegetable oil. O-amino benzoic diamide pesticide residues in vegetable oil extracted with cyclohexane and ethyl acetate mixture solution was purified by gel permeation chromatography system; acetonitrile and 0.1 mol/L ammonium acetate aqueous solution (58∶42) was taken as mobile phase to determine by the DAD detector and quantify by external standard method. The results showed that by using this method to determine 3 kinds of o-amino benzoic diamide pesticides, the limit of detection could achieved 0.1 mg/kg; the relative modular were better than 0.9998 for the standard curve concentration between 0.1～2 mg/L; the recoveries were between 70.1%～99.1% for 0.1, 0.2, 1 mg/kg add level; the relatively standard deviations (RSDs) were between 3.0%～9.7% with a good degree of precision.

vegetable oil，O-amino benzoic diamide，GPC，HPLC

O657.7

：A

：1003-0174(2017)08-0118-05