蜂胶对宫颈癌Hela细胞作用的探索

李少丛 周杰 王玉桂 焦盈盈

·实验研究·

蜂胶对宫颈癌Hela细胞作用的探索

李少丛 周杰 王玉桂 焦盈盈

目的 探讨蜂胶成分咖啡酸苯乙酯(CAPE)对宫颈癌Hela细胞的作用。方法 选取对数生长期的Hela细胞, ①经0、6、10、20、30、40 μl/ml(0 μl/ml组、6 μl/ml组、10 μl/ml组、20 μl/ml组、30 μl/ml组、40 μl/ml组)的CAPE培养液作用24 h, 其中0 μl/ml组为参照对象；②细胞培养24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培养液。培养液与Hela细胞作用时间分别为0、12、24、48、72 h(0 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组), 其中0 h组为参照对象。采用唑盐比色法(MTT法)检测不同浓度和作用时间的CAPE对Hela细胞的抑制率。结果 经各浓度的CAPE培养液作用24 h, 不同CAPE浓度下Hela细胞的抑制率分别为0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela细胞的抑制率随CAPE培养液浓度的增大而增大, 差异具有统计学意义 (P＜0.05)。经20 μl/ml 的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela细胞抑制率分别为0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela细胞抑制率随CAPE培养液作用时间的延长而增大, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 CAPE对宫颈癌Hela细胞具有抑制作用, 值得进一步研究。

蜂胶；咖啡酸苯乙酯；宫颈癌；Hela细胞

宫颈癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤, 为女性第二大致死癌症［1］, 其中发展中国家约占80%［2］。近年来, 我国宫颈癌的发病率明显增高, 且发病年龄有减小趋势［3,4］。蜂胶在我国是传统的药品和保健品。目前, 蜂胶中已分离出多种有效化学成分［5］, 其中, CAPE为蜂胶的主要有效成分,已被证明具有抗炎、抗氧化、免疫调节以及抗肿瘤等功能［6,7］。CAPE对多种肿瘤细胞有较强的诱导凋亡作用, 如胰腺癌、肝癌、胆管癌等［7,8］, 同时值得关注的是, 其对正常细胞几乎没有抑制作用。目前, 关于蜂胶对宫颈癌作用的报道较少见, 因此, 本文拟探讨不同浓度和作用时间的蜂胶对宫颈癌Hela细胞的抑制作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1细胞培养 将宫颈癌Hela细胞置于37℃, 5 % CO2孵箱内, 使用含10% 胎牛血清的的DMEM培养基(内含100 U/ml青霉素和链霉素)培养。根据细胞生长情况, 每1～2天换液。于细胞进入对数生长期时, 进行传代, 传代数<20。

1.2MTT法细胞检测

1.2.1CAPE浓度对Hela细胞的抑制效应 将对数生长期的Hela细胞消化, 取200 μl浓度为3×104/ml Hela细胞接种于96孔板, 培养24 h后, 分别加入0、6、10、20、30、40 μl/ml的CAPE(sigma公司, 美国)培养液, 作为0 μl/ml组、6 μl/ml组、10 μl/ml组、20 μl/ml组、30 μl/ml组、40 μl/ml组,其中0 μl/ml组为参照对象, 各组设4个平行样。20 h后每孔加入20 μl浓度为5 mg/ml 的MTT, 再孵育4 h后, 弃去上清液,每孔加入150 μl 二甲基亚砜(DMSO), 振荡5 min后, 使用酶标仪(参考波长630 nm、背景波长570 nm)测量各组吸光度(A)值。按以下公式计算细胞抑制率：抑制率(%)=(1-各组平均吸光度值/0 μl/ml组平均吸光度值)×100%。

1.2.2CAPE作用时间对Hela细胞的抑制效应 方法同上,细胞培养24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培养液。培养液与Hela细胞作用时间分别为0、12、24、48、72 h, 作为0 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组, 其中0 h组为参照对象,各组设4个平行样, 检测吸光度(A)值和细胞抑制率。

1.3统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1CAPE浓度对Hela细胞的抑制效应 经各浓度的CAPE培养液作用24 h, 不同CAPE浓度下Hela细胞的抑制率分别为0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela细胞的抑制率随CAPE培养液浓度的增大而增大, 差异具有统计学意义 (P＜0.05)。见表1。

表1 MTT法检测CAPE浓度对Hela细胞的抑制效应

表1 MTT法检测CAPE浓度对Hela细胞的抑制效应

注：与0 μl/ml组比较,aP＜0.05

?

2.2CAPE作用时间对Hela细胞的抑制效应 经20 μl/ml的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela细胞抑制率分别为0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela细胞抑制率随CAPE培养液作用时间的延长而增大, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 MTT法检测CAPE作用时间对Hela细胞的抑制效应

表2 MTT法检测CAPE作用时间对Hela细胞的抑制效应

注：与0 h组比较,aP＜0.05

?

3 讨论

宫颈癌是女性仅次于乳腺癌的恶性肿瘤, 为女性第二大致死癌症［1］, 发病率和死亡率都较高。早期宫颈癌患者无特异性症状和体征, 大部分患者确诊时已为中晚期, 错失了手术时机, 多以放、化疗延缓病情进展。但放、化疗均存在副作用, 在杀灭肿瘤细胞的同时可能对正常细胞产生损害。因此探求无毒副作用治疗宫颈癌的药物, 是影响妇女健康和生活质量的重大课题。

本研究表明, 在研究所处的范围内, Hela细胞的抑制率随CAPE培养液浓度的增大而增大, Hela细胞抑制率随CAPE培养液作用时间的延长而增大, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 可见CAPE对宫颈癌Hela细胞的增殖有明显的抑制作用。

综上所述, 蜂胶对宫颈癌具有潜在治疗功能, 值得进一步研究。

［1］ 马亚琪, 刘爱军.宫颈癌及癌前病变病理诊断及研究进展.实用妇产科杂志, 2015, 31(11):803-805.

［2］ 丛晓凤, 杨雷, 刘子玲.宫颈癌的三级预防策略.中国妇幼保健, 2014, 29(15):2462-2464.

［3］ 王爱丽.扶正固本汤联合化疗用于宫颈癌患者临床疗效及安全性分析.中国现代医学杂志, 2014, 24(22):51-53.

［4］ Zhao YB, Wang JH, Chen XX, et al.Values of three different preoperative regimens in comprehensive treatment for young patients with stage Ib2 cervical cancer.Asian Pac J Cancer Prev, 2012, 13(4):1487-1489.

［5］ Zhang JL, Wang K, Hu FL.Advance in studies on antioxidant activity of propolis and its molecular mechanism.China Journal of Chinese Materia Medica, 2013, 38(16):2645-2652.

［6］ 玄红专, 李振, 付崇罗, 等.咖啡酸苯乙酯抗肿瘤活性的分子机制研究进展.食品研究与开发, 2013(11):97-100.

［7］ 王秀芳, 翟嵩, 党双锁.咖啡酸苯乙酯的药理作用及机制研究进展.国外医学医学地理分册, 2010, 31(3):187-190.

［8］ 王紫燕, 王莹莹, 曾晓雄, 等.蜂胶中CAPE对HGF诱导的HepG2细胞侵袭和迁移能力的抑制作用.食品科学, 2017, 38(1):203-209.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.17.114

2017-07-05］

252000 山东省聊城市人民医院妇产科(李少丛王玉桂 焦盈盈)；聊城职业技术学院护理学院(周杰)