耐力训练C57BL/6J小鼠工作肌ATGL的变化及信号分子cAMP和PPAR-γ的影响

宋刚，雷小灿，李莉，彭莉

耐力训练C57BL/6J小鼠工作肌ATGL的变化及信号分子cAMP和PPAR-γ的影响

宋刚1，2，雷小灿3，李莉4，彭莉1，2

目的：1）了解耐力训练不同时间点C57BL/6J小鼠ATGL基因和蛋白表达的变化；2）腹腔注射cAMP的激活剂Forskolin、PPAR-γ的抑制剂T0070907、观察耐力训练后ATGL的表达，探究ATGL变化可能的信号分子机制。方法：实验1， C57BL/6J小鼠跑台耐力训练训练4周，使用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定腓肠肌和比目鱼肌ATGL基因和蛋白表达的变化；实验2，采用跑台耐力训练小鼠4周，分别每天腹腔注射forskolin、T0070907和DMSO，测定腓肠肌和比目鱼肌ATGL基因和蛋白表达的变化。结果：1）耐力运动引起比目鱼肌ATGL基因和蛋白表达量出现上升（P＜0.05），并且在第4周运动组的ATGL基因表达量显著高于对照组（ P＜0.05）；第3、第4周ATGL蛋白表达都显著高于对照组（P＜0.05）；2）耐力运动时腓肠肌ATGL基因和蛋白表达出现上升（P＜0.05），耐力训练第3周和4周ATGL基因和蛋白表达量运动组显著高于对照组（ P＜0.05）；3）4周的耐力运动训练后，forskolin组的ATGL基因和蛋白表达无论是比目鱼肌还是腓肠肌都出现显著高于对照组（P＜0.05），T0070907组的腓肠肌中ATGL基因和蛋白表达显著低于对照组（P＜0.05）；4）在4周的耐力运动训练后，forskolin组的ATGL基因表达腓肠肌显著高于比目鱼肌（P＜0.05）。结论：耐力训练会引起C57BL/6J小鼠比目鱼肌和腓肠肌中的ATGL基因和蛋白表达上升，信号分子cAMP和PPAR-γ参与了这一过程。

小鼠；脂肪甘油三酯脂肪酶；信号分子；耐力训练

甘油三酯（脂肪）通过氧化作用为机体活动供能，其途径是水解为游离脂肪酸（free fatty acid ，FFA），FFA在肉毒碱的帮助下进入线粒体，再通过β-氧化途径为机体活动提供能量，甘油三酯是耐力运动训练过程中重要的能源物质［15］。运动中骨骼肌（工作肌）脂肪分解及脂肪氧化调控的机制非常复杂，涉及多个蛋白质和酶（系）的参与。近年来，对脂肪代谢上游即脂肪水解调控机制的研究，尤其是通过基因敲除小鼠的研究证实，脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triglyceride lipase， ATGL）亦是一种关键的脂肪水解酶，工作肌内甘油三酯水解的研究逐渐受到运动人体科学科研人员的关注［6，18］。ATGL在生物体内广泛存在，其作用主要是降解细胞内的脂肪，使其成为自由脂肪酸，也是调节脂肪水解的一种关键酶。ATGL和激素敏感性脂肪酶（hormone-sensitive triglyceride lipase，HSL）都是脂肪组织和骨骼肌进行高效的脂肪分解必不可少的酶，其活性和表达在细胞内受到转录水平和翻译后水平的调控。ATGL介导的脂解过程可能与肥胖、糖尿病、脂肪肝等代谢疾病存在关联［2，17］。

不同运动（训练）方式会引发机体对能量代谢方式的选择及底物消耗速率出现差异，耐力运动需要持续能量供给，肌内甘油三酯（Intramuscular fat，IMTG）为收缩肌的ATP产生提供了底物，为运动供能［2，17］。已有文献表明，耐力运动后，人体实验工作肌ATGL出现基因和蛋白上升的变化趋势。对10名健康男子进行8周的耐力运动训练，骨骼肌活检液进行蛋白印迹测定，结果表明，运动训练引起骨骼肌ATGL蛋白表达上升2倍，同时IMTG明显下降，而HSL变化却不显著［4］。在转基因小鼠中也发现相似的实验结果，ATGL（-/-）小鼠的最大跑台速度和耐力运动能力分别减少42%和46%［8］。我们前期实验发现，耐力大鼠工作肌ATGL基因表达显著性上升［3］，提示ATGL在运动时脂肪水解氧化供能中起了重要的作用，是运动时水解脂肪供能的限速因素，但其变化的机制并不为人所知，有待继续研究。这让人思考，是哪些因素诱发耐力运动训练ATGL基因表达上升，同时对ATGL蛋白分泌产生正向影响？有哪些信号分子参与耐力运动训练ATGL上升过程，也就是通过的分子信号途径是什么？

已知的是，cAMP（激动剂Forskolin）和PPAR-γ（抑制剂T0070907）两个信号分子对ATGL的表达具有影响［13］。为了保持实验的延续性，本研究小鼠重复了（前期大鼠）耐力训练工作肌ATGL变化的试验，然后再通过信号分子的干扰剂（Forskolin和T0070907）作用于cAMP和PPAR-γ，来探究耐力训练ATGL的变化是否通过cAMP和PPAR-γ信号分子途径，寻找其中的因果性关系。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

1.1.1 耐力运动训练（试验1）

6周龄雄性健康SPF级C57BL/6J小鼠，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，80只作为实验动物，随机均分为运动组（n=40）和对照组（n=40），运动组（E组）和对照组（C组）再分别随机平均为5组，体重203～229 g。常规分笼，用国家标准啮齿动物饲料，自由饮食，动物房室温20～23℃，相对湿度50%～70%，每日光照时间为12 h。

训练模型按《科学》杂志2006年报道小鼠跑台运动的运动负荷结合实际略加调整［6］，其运动方案为采用C57BL/6J小鼠，进行耐力测定，具体负荷为以5%坡度、16 m/min的跑速运动，直至疲劳。本研究利用其运动方式即5%坡度、16 m/min跑速的耐力跑台（跑台型号：正华ZHPT 型）运动，进行训练。

训练安排：训练期共达5周，第1周为适应性训练（习惯动物跑台，5 min为宜），正式训练4周，每周训练6天，训练时间在早上8：00～12：00。正式训练为以16 m/min （5%度坡度） 进行40 min跑台运动。

处死方式及取材：断头处死，处死后即刻取腓肠肌取其表层中段，比目鱼肌全部，取材操作在冰上操作完成。

1.1.2 耐力训练信号分子干预试验（试验2）

6周龄C57BL/6J小鼠30只，随机分为3组（Forskolin组、T0070907组和对照组），每组10只，训练方案按试验1所述方案开展。Forskolin组适应运动4周，腹腔注射Forskolin（Sigma）溶液，每只每天注射剂量为5 mg/kg； T0070907组适应运动4周，每只小鼠每天注射T0070907（Sigma），剂量为1.5 mg/kg［1］；对照组进行适应运动4周，每只腹腔注射DMSO（Sigma），每只每天注射剂量为5 mg/kg。

Forskolin溶液的使用方案为5 mg/kg，DMSO作为溶剂。T0070907（1.5 mg/kg）制作溶解于DMSO并用正常的生理盐水稀释到DMSO的浓度达到0.5%。

1.2 RNA的提取和QRT-PCR

4周耐力训练结束后次日，3组小鼠用断头处死分别速取左下肢腓肠肌，比目鱼肌，采用Trizol法提取的总RNA（OMEGA公司）。RNA提取后，通过分光光度计及电泳检测其纯度和完整性，并置于－80℃下保存备用。按照一步快速反转录试剂盒［宝生物工程（大连）有限公司］进行反转录反应，反转得到的cDNA通过分光光度计检测后将其浓度调至100 ng/uL。

qRT-PCR的反应体系为20 μL：100 ng cDNA、10 μL 2×FastStart Universal SYBR GreenMaster（ROX）、0.6 μL Primer F/R（10 μmol/L）、8.4 μL RNase Free water。反应条件为：95℃，10 min；95℃，15 s，60℃ （或55℃）1 min，40个循环。试验对每个样品进行3次重复，运用2-△△Ct的方法计算目的基因的相对表达量。用内参beta-actin对其进行标准化。

1.3 引物设计和抗体

根据NCBI数据库中上已知的小鼠ATGL基因和β -actin基因的序列，利用Oligo 6.0软件分别设计荧光定量引物，引物序列见表1。引物由上海生工生物公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列及相关条件Table 1Primers for quantitative PCR

1.4 Western Blotting

WB测试方法所采集的肌肉组织，加入RIPA裂解液裂解组织，用并添加PMSF蛋白酶抑制剂，终浓度为100 μg/ mL，防止蛋白降解。在冰上裂解30 min后，12 000 r/min离心10 min，离心后取上清，按体积比加入4×缓冲液，沸水煮沸变性10 min。将变性后的蛋白进行SDS-PAGE（10%分离胶）分离。经过电泳，使用伯乐半干转印系统，将蛋白转移到硝酸纤维素膜上，等以上工作结束后， 放置于5%脱脂牛奶室温封闭45 min。TBST冲洗3次，每次10 min，抗ATGL蛋白抗体（Proteintech公司，货号：55190-1-AP）用一抗稀释液（1：500）稀释后，4 ℃冰箱孵育过夜。第2天，用TBST彻底洗膜3次，每次10 min，山羊抗兔Ig-HRP二抗室温孵育1 h，然后TBST彻底洗膜3次，伯乐成像系统对NC膜，加ECL化学发光液进行成像，用Imagelab软件进行分析试验结果。

1.5 统计方法

用平均数±标准差（±SD）表示数据，试验1和试验2统计学方法采用双因素方法分析，事后比较使用LSD法。统计软件SPSS 17.0软件进行处理，显著性水平为0.05，非显著性水平为0.01。

2 研究结果

2.1 耐力运动过程中比目鱼肌肉ATGL基因和蛋白表达

结果显示（表2），ATGL基因在比目鱼肌中的表达量逐渐升高，且与运动时长成正相关，在运动4周时，ATGL基因的表达量最高。ATGL基因表达存在运动组与对照组之间差异，运动第4周，运动组显著高于对照组（P＜0.05）。

表2 耐力运动过程不同时刻比目鱼肌肉中ATGL mRNA/β- actin mRNA的比率Table 2 The Ratio of ATGL/β- actin mRNA in Soleus Muscle at Different Times during Endurance Exercise

如图1所示，耐力运动引起运动组比目鱼肌ATGL蛋白表达出现显著性的升高变化（P＜0.05）。第3周比目鱼肌ATGL蛋白表达运动组低于对照组，但两组之间不具有显著性意义（P＞0.05）。第3周和第4周，运动组ATGL蛋白表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。对照组比目鱼肌ATGL蛋白表达出现下降的趋势，但差异不具有显著性（P＞0.05）。

图1 耐力运动过程不同时刻比目鱼肌ATGL蛋白相对表达量柱状图Figure 1.Relative Expression of ATGL Protein in Soleus Muscle at Different Times during Endurance Exercise

2.2 耐力运动过程中腓肠肌ATGL基因和蛋白表达

研究结果表明，耐力运动引起运动组的腓肠肌ATGL基因表达出现上升，差异且具有显著性意义（P＜0.05）。耐力运动第3周、第4周基因表达运动组显著高于对照组（P＜0.05）。

如图2所示，在本研究中，耐力运动引起腓肠肌中ATGL蛋白表达量呈现上升的变化趋势，差异具有显著性意义（P＜0.05）。运动第3周、第4周ATGL蛋白表达量运动组显著高于对照组 （P＜0.05）；在耐力运动第3周和第4周末ATGL蛋白表达量运动组显著高于控制组（P＜0.05）。

图2 耐力运动过程不同时刻腓肠肌ATGL蛋白相对表达量柱状图Figure 2.Relative Expression of ATGL Protein in Gastrocnemius Muscle at Different Times during Endurance Exercise

表3 耐力运动过程不同时刻腓肠肌 ATGL/β-actin mRNA的比率Table 3The Ratio of ATGL/β-actin mRNA in Gastrocnemius Muscle at Different Times during Endurance Exercise

2.3 耐力运动训练后信号分子T0070907与forskolin交互作用下ATGL的变化

研究结果表明，4周的耐力运动训练后，Forskolin组的ATGL基因表达无论是比目鱼肌还是腓肠肌都出现显著高于对照组（P＜0.05），T0070907组的腓肠肌中ATGL基因表达显著低于对照组（P＜0.05）。在4周的耐力运动训练后，Forskolin组的ATGL基因表达腓肠肌显著高于比目鱼肌（P＜0.05）。

如图3所示，4周的耐力运动训练后，Forskolin组的ATGL蛋白表达无论是比目鱼肌还是腓肠肌都出现显著高于对照组（P＜0.05），比目鱼肌组和腓肠肌组内差异不具有显著性（P＞0.05），T0070907组的腓肠肌中ATGL蛋白表达显著低于对照组（P＜0.05）。在四周的耐力运动训练后，Forskolin组的ATGL蛋白表达腓肠肌组显著高于比目鱼肌组（P＜0.05）。

表4 四周耐力运动训练后比目鱼肌 ATGL/β-actin mRNA的比率Table 4The Ratio of ATGL/β-actin mRNA in Soleus Muscle after Endurance Exercise Training

3 讨论与分析

3.1 耐力运动过程中工作肌ATGL表达

在认识ATGL是一种脂肪水解酶之前，人们只知道HSL是脂肪水解的关键酶，2004年，Zimmermann发现还存在第2个水解脂肪的限速酶——ATGL。ATGL是安静和运动时甘油三酯水解的关键酶，已有报道表明，耐力运动与ATGL表达影响存在正向相关性，即耐力运动会诱导工作肌ATGL的含量提高。ATGL对运动和长期运动训练敏感，最信服的报道来源于基因敲除小鼠的研究。在运动时，ATGL和HSL的变化具有显著性；ATGL 基因敲除［ATGL（-/-）］小鼠会改变全身性能量代谢并削弱运动能力。通过对ATGL（-/-）小鼠和HSL（-/-）小鼠的定量跑台耐力运动发现，ATGL（-/-）小鼠的最大跑台速度和耐力运动能力分别减少42%和46%，而其在HSL（-/-）小鼠却不见减少［8］。这些结果表明，在安静和运动中，ATGL和HSL都起到了维持正常能量代谢的作用，但ATGL还起到维持运动能力的作用。动物试验表明，耐力训练不会改变工作肌HSL活性和蛋白含量，前期研究表明，定量运动具有提高大鼠HSL基因表达的作用，而蛋白含量没有增加，猜测可能的原因是转录水平的因素［10］。人体实验也发现，在运动训练时，ATGL蛋白出现相似的上升变化。Helge等［7］通过训练者和不训练者对照试验，对运动前和运动后3 h进行肌肉活检，结果表明，整个运动中训练者IMTG氧化水平要高于不训练者。但肌肉中HSL活性在运动前和运动后不存在组间差异，通过免疫组化法测定，运动后I、II型肌纤维HSL活性下降，但运动前、后训练者和不训练者的HSL活性不存在组间差异。这提示，运动中HSL活性或其他酶活性在常训练和不训练组之间存在调节机制上的差异。2008年，Jocken等［9］首次在人类I型肌肉中证实存在ATGL的表达。同年，有研究者通过10名健康男子进行8周耐力运动训练，对骨骼肌活检液进行蛋白印迹测定，结果表明，运动训练引起骨骼肌ATGL蛋白表达上升2倍，同时IMTG水平明显下降，而HSL变化却不显著［4］。

图 3耐力运动过程腓肠肌 ATGL蛋白相对表达量柱状图Figure 3.Relative Expression of ATGL Protein in Gastrocnemius Muscle during Endurance Exercise

以上的研究结果表明，耐力运动时ATGL会出现显著性上升的变化规律。其背后的ATGL激活机制仍不为人所知，探究其变化的上游信号分子调控途径正是本研究的目的。所涉及实验动物选择C57BL/6J小鼠，正是ATGL基因敲除小鼠的研制背景小鼠，目的是为了随后的模式基因ATGL敲除（ATGL-/-）小鼠与运动关系实验的开展，保持该研究的连续性和前后可对比性。

本研究所开展的C57BL/6J小鼠耐力训练引发ATGL基因和蛋白表达差异的试验（试验1），为随后开展信号分子干预试验（试验2）提供数据支持。试验1对C57BL/6J小鼠开展4周的耐力训练，测定工作肌（比目鱼肌和腓肠肌）ATGL的变化。研究结果表明，耐力运动引起ATGL基因表达腓肠肌和比目鱼肌中随时间持续出现显著上升，但ATGL基因表达在腓肠肌和比目鱼肌之间的差异并没有出现显著性意义；耐力运动引起运动组腓肠肌和比目鱼肌ATGL蛋白表达与基因表达变化趋势相似，只是第3周出现ATGL蛋白表达运动组低于对照组，但两组之间不具有显著性意义。本研究发现了一个有趣的现象，在比目鱼肌中，ATGL基因表达显著变化早于蛋白显著变化，腓肠肌ATGL却出现蛋白显著变化晚于基因表达的变化，即工作肌ATGL在快肌（腓肠肌）、慢肌（比目鱼肌）基因表达和蛋白变化具有不同步性。该发现也许可以用最近发表在《科学》杂志上的报告来解释，该研究发现，个体之间大多数的RNA表达差异与对应蛋白质的丰度毫无关系［5］。

耐力运动引起ATGL蛋白表达腓肠肌和比目鱼肌中都出现随时间上升的变化趋势，并且与运动前相比，差异具有统计学意义，ATGL蛋白表达在腓肠肌和比目鱼肌之间并不存在差异。这与以前在大鼠身上的开展研究的ATGL基因表达结果类似，但大鼠试验没有测定ATGL蛋白水平的变化，无法进行基因与蛋白变化时间的分析［3］。在本研究中，耐力训练引发的比目鱼肌和腓肠肌ATGL基因和蛋白表达的上升，并没有发现出现差异，这与在大鼠中的研究存在差异，猜测可能是物种差异的因素。

本研究结果显示，ATGL具有对耐力训练时间依赖性出现上升的变化规律，这可能为脂代谢研究开辟了一条新的道路，并进一步完善了对脂肪分解过程的认识。而更多内容，如ATGL mRNA 表达水平受禁食／进食、糖皮质激素、胰岛素和肿瘤坏死因子等多种因素影响的机制，上调和下调ATGL 的信号转导机制，ATGL 是否能成为治疗脂代谢紊乱的一个靶基因，ATGL 和CGI-58 发挥作用的具体机制，HSL 和ATGL 之间的关系，激活ATGL 水解脂肪的信号转导通路，不同运动形式对ATGL 的影响等尚待进一步研究［1］。

3.2 耐力运动训练时信号干预实验

在体研究中采用信号分子干扰剂是一种常用的动物实验研究手段，有助于探究影响变量之间的因果关系。

在白色脂肪组织HSL受到抑制时，机体仍旧会出现激素引发的脂肪水解现象，这表明，ATGL活性也是通过信号途径调控的。ATGL的干扰剂有哪些？ 免疫沉淀实验研究报道表明，在中等强度运动中混和型的骨骼肌 forskolin下游的PKA参与ATGL磷酸化，却与AMPK无关［12］。小鼠的研究证实，禁食和中等强度运动ATGL Ser（406）磷酸化的增加，伴随的脂肪水解率的增加。β-肾上腺能激活会引起PKA调节的ATGL的磷酸化，并温和地增加ATGL调节的脂肪水解［14］。本试验采用佛司可林（Forskolin）和T0070907作为信号分子干扰剂。

佛司可林（Forskolin）分子式为 C22H34O7，提取自毛喉鞘蕊花 （Coleus forskohlii），白色粉末，是一种强大的腺苷酸环化酶激活剂，通过升高cAMP的水平，参与生物学的调节作用。作为本实验采用的另外一种干扰剂，T0070907是一种强有效和选择性的PPARγ抑制剂，比作用于PPAR-α和PPAR-δ选择性高800倍以上，具有明显的亲和性。T0070907也可以使PPARγ磷酸化水平及DNA结合能力下降并且可能直接影响促分裂原活化蛋白激酶的信号通路［11，16］。

研究结果发现，在四周的耐力运动训练后， Forskolin组的ATGL基因表达腓肠肌显著高于比目鱼肌，表明，耐力训练后 Forskolin刺激下，ATGL基因表达存在快、慢肌的差异。4周的耐力运动训练后， Forskolin组的ATGL蛋白表达无论是比目鱼肌还是腓肠肌都显著高于对照组，提示，Forskolin与耐力训练的叠加作用有助于增加ATGL蛋白的表达。这表明， Forskolin激活的cAMP信号途径可能参与了耐力运动训练ATGL上升的调控。然而，T0070907组的腓肠肌ATGL蛋白表达显著低于对照组，这提示，T0070907通过抑制PPARγ达到降低ATGL蛋白和基因表达的作用。

在比目鱼肌和腓肠肌两种组织中，Forskolin通过cAMP信号途径增强ATGL蛋白的表达起了的影响存在正向的调节作用，T0070907通过PPAR-γ信号途径降低了ATGL蛋白的表达的影响。这表明，cAMP和PPAR-γ信号途径都参与了耐力训练工作肌ATGL表达的调控。

4 结论

耐力训练会引起C57BL/6J小鼠比目鱼肌和腓肠肌中的ATGL基因和蛋白表达上升，表明，耐力训练调节ATGL变化的一个外在的诱导因素。通过在体的信号分子干预实验，发现Forskolin上调工作肌ATGL基因蛋白表达，T0070907下调ATGL基因蛋白表达，证实了信号分子cAMP和PPAR-γ参与了耐力训练引发工作肌ATGL基因和蛋白表达的上升。

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The Effect of Signal Molecule cAMP and PPAR-γ on ATGL of Working Muscular in C57BL/6J Mouse in Exercise Training

Song Gang1，2，Lei Xiao-can3，Li li4，Peng li1

Objective：1） The purpose of this study was to observe the changes of ATGL gene and protein expression in C57BL/6J mice at different time points in endurance training；2） To explore the possible molecular mechanism of ATGL changes after intraperitoneal injection of cAMP activator Forskolin，PPAR- inhibitor T0070907. Methods：Experiment 1，Endurance training last for four weeks of training C57BL / 6J mice，the gastrocnemius and soleus muscle of ATGL gene and protein expression was determined by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting；Experiment 2，ATGL gene and protein expression in gastrocnemius and soleus muscle are determined respectively daily intraperitoneal injection of forskolin，T0070907 and DMSO after 4 weeks treadmill endurance trained mice. Results：1） ATGL gene and protein of the soleus muscle expression increased in endurance exercise（ P＜0.05），and the ATGL mRNA expression in exercise group was signi fi cantly higher than the control group in fourth week（ P＜0.05），the expression of ATGL protein was signi fi cantly higher than that of control group in the third，and in the fourth weeks（ P＜0.05）；2） ATGL mRNA and protein expression in the gastrocnemius muscle increased during endurance exercise（ P＜0.05），ATGL mRNA and protein expression in exercise group was signi fi cantly higher than those in the control group in the third week and the fourth week of endurance training（ P＜0.05）；3） ATGL gene and protein expression of soleus and gastrocnemius muscle in forskolin group for 4 weeks endurance training were signi fi cantly higher than those of the control group（ P＜0.05），ATGLmRNA and protein of T0070907 group in the gastrocnemius muscle was signi fi cantly lower than those of the control group（ P＜0.05）；ATGL gene expression in forskolin group was signi fi cantly higher than that of gastrocnemius muscle after 4 weeks endurance training （ P＜0.05）. Conclusion：Endurance training can lead to the increasement of ATGL gene and protein expression soleus and gastrocnemius muscle in the C57BL/6J mouse，which the cAMP and PPAR-γ，signal molecule are involved in.

G804.7

A

2016-07-20；

2017-07-01

国家自然科学基金资助项目（31360254）；中央高校基本科研业务费专项资金（SWU1609025）。

宋刚，男，教授，博士，主要研究方向为运动内分泌；Tel：（023）68252345，E-mail：songgang@aliyun.com；雷小灿，男，讲师，博士，主要研究方向为分子生物学；彭莉，女，教授，博士，主要研究方向为体育保健与健康；E-mail：804455169@qq.com。

1.西南大学 体育学院，重庆 400715；2.国家体育总局体质评价与运动机能监控重点实验室，重庆 400715；3.遵义医学院 基础医学院，贵州 遵义 563003；4.广西大学 体育学院，广西 南宁 530004

1. Southwest University ，Chongqing 400715，China；2. State Sports General Administration Key Laboratory of physical fitness evaluation and sports function monitoring，Chongqing 400715，China；3.Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China；4. Guangxi University，Nanning 530004，China.

Keyword： mouse；adipose triglyceride lipase；signal molecule；endurance training