高效液相色谱法同时测定胆胃平颗粒中柚皮苷和新橙皮苷含量

魏晓锐，徐金玲，刘艳霞

（河南省许昌市食品药品检验检测中心，河南许昌461000）

高效液相色谱法同时测定胆胃平颗粒中柚皮苷和新橙皮苷含量

魏晓锐，徐金玲，刘艳霞

（河南省许昌市食品药品检验检测中心，河南许昌461000）

目的建立测定胆胃平颗粒中柚皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱采用WondaSil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈－水（用磷酸调pH至3，20∶80），检测波长为283 nm，流速为1.0mL／min，柱温为30℃。结果柚皮苷、新橙皮苷进样量在0.081 3～1.625 7 g和0.081 7～1.633 4 g范围内与峰面积线性关系良好(r＝0.999 9，0.999 9)；平均回收率分别为100.46%和99.59%，RSD为1.71%和1.43%（n＝6）。结论该方法操作简便，结果准确，重复性好，可作为胆胃平颗粒中枳壳的质量控制方法。

胆胃平颗粒；柚皮苷；新橙皮苷；高效液相色谱法

胆胃平颗粒为许昌市中医院制剂室的中药制剂，由枳壳、香附、砂仁、黄芩、莱菔子、山药、木香等11味中药材组方，具有疏肝理气、健脾和胃、利胆祛湿、活血止痛之功效，用于治疗两胁胀满、食欲不振、胃脘疼痛、黄疸尿赤、胆汁反流性胃炎[1－2]。原标准中只有薄层色谱鉴别，不能有效地控制该制剂的质量。枳壳是胆胃平颗粒的主药，主要成分为黄酮类化合物[3－4]、挥发油和生物碱，黄酮提取物中又以柚皮苷、新橙皮苷含量较高。为全面、客观地评价该制剂质量，保证临床用药安全有效，本研究中对枳壳中具有药理作用的黄酮类化合物进行了含量测定[5－6]，建立了同时测定胆胃平颗粒中柚皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色谱(HPLC)法[7－8]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC－2010CHT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；MSA225S－000－DU型电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

柚皮苷对照品（批号为110722－201111），新橙皮苷对照品（批号为111857－201102），均购于中国食品药品检定研究院；胆胃平颗粒（批号为16041102，16071803，16101002），枳壳阴性样品均由许昌市中医院制剂室制备；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：WondaSil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（用磷酸调pH值至3，20∶80）；流速：1.0 m L／min；柱温：30℃；检测波长：283 nm；进样量：10μL。理论板数按柚皮苷峰计算不低于3 000。在此色谱条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

对照品溶液：取柚皮苷对照品8.62 mg，新橙皮苷对照品8.20mg，精密称定，加甲醇制成每1m L含柚皮苷81.286 6μg、新橙皮苷81.672 0μg的溶液，即得。

供试品溶液：取胆胃平颗粒细粉0.5 g，精密称定，置150m L具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50m L，称定质量，超声处理（功率250W，频率40 kHz）45min，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：取阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：取2.2项下3种溶液，进样测定，结果阴性对照品溶液色谱图中，在与供试品溶液相同保留时间位置上无柚皮苷、新橙皮苷色谱峰，阴性无干扰，详见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取对照品溶液1，4，7，10，13，17，20μL，注入液相色谱仪，测定。分别以柚皮苷、新橙皮苷峰面积(Y)为纵坐标，以进样量(X，μg)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程，柚皮苷Y＝1.816 3×106X＋1.637 7×104（r＝0.999 9），新橙皮苷Y＝1.927 3× 106X＋1.837 0×104（r＝0.999 9）。结果表明，柚皮苷与新橙皮苷进样量在0.081 3～1.625 7μg和0.081 7～1.633 4μg范围内与峰面积线性关系良好。详见图2。

图2 标准曲线

精密度试验：取对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，计算柚皮苷、新橙皮苷的色谱峰面积RSD分别为0.86%和0.61%（n＝6），详见表1，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取胆胃平颗粒细粉（批号为16071803），精密称取5份，制备供试品溶液，平行测定，计算柚皮苷、新橙皮苷的色谱峰面积。结果的RSD分别为1.15%和1.39%（n＝5），表明方法重复性好。

稳定性试验：取同批（批号为16071803）样品，依法制备供试品溶液室温放置，于0，2，4，6，8，10 h时进样测定，记录峰面积，计算供试品溶液中柚皮苷、新橙皮苷的峰面积。结果的RSD分别为1.09%，1.22%（n＝6），表明10 h内供试品溶液稳定性良好。

加样回收试验：取同一批（批号为16071803）胆胃平颗粒细粉6份，每份约0.25 g，精密称定，分别精密加入已知浓度的对照品溶液，依法进样测定。结果见表2。

2.4 样品含量测定

取3批胆胃平颗粒，依法制备供试品溶液，进样测定，每份样品测定3次，取平均值。结果见表3。

3 讨论

3.1 波长选择

采用紫外－可见分光光度计对柚皮苷、新橙皮苷对照品溶液于200～400 nm波长内进行扫描，结果于283 nm波长处柚皮苷、新橙皮苷有最大吸收，且溶剂和其他成分对柚皮苷、新橙皮苷在该波长处无干扰，故选用283 nm为测定波长。

表1 精密度试验结果（n＝6）

表2 柚皮苷、新橙皮苷加样回收试验结果（n＝6）

3.2 提取溶剂选择[9－10]

提取溶剂曾采用甲醇、乙醇、稀乙醇，结果甲醇为提取溶剂时，样品中柚皮苷、新橙皮苷含量较高，而且高效液相色谱峰中柚皮苷、新橙皮苷峰形较好，杂质几乎无干扰，故选用甲醇为提取溶剂。

3.3 提取方法选择

曾考察加热回流、超声提取2种方法，结果加热回流方法和超声处理方法测得的含量相当，但超声处理方法简便快捷，易于操作，故采用甲醇超声提取。分别对提取30，45，60 min进行含量测定，结果超声处理30 min的含量略低于超声45 min和60 min，且后两者含量相当，故以超声处理45min为宜。

3.4 流动相选择

采用不同比例的乙腈－水（用磷酸调pH至3）为流动相[11－12]，测定胆胃平颗粒中柚皮苷、新橙皮苷的含量。增大乙腈比例时，出峰时间提前，但柚皮苷与相邻色谱峰分离度低；增大水的比例时，出峰时间推迟且峰形不好。故以乙腈－水（用磷酸调pH至3）20∶80的比例为流动相，分离效果为最好，时间适中，柚皮苷、新橙皮苷与相邻色谱峰的分离度大于1.5。

3.5 指标成分选择

文献[13－16]中对枳壳中的橙皮苷进行了含量研究，但在本研究中，橙皮苷含量较低，且橙皮苷峰相同保留时间位置上有干扰峰出现，因此未将橙皮苷作为研究对象，而对含量较高的柚皮苷、新橙皮苷进行了含量研究。本试验结果表明，高效液相色谱法同时测定胆胃平颗粒中柚皮苷、新橙皮苷的含量，方法操作简便、结果准确、重复性好等优点，可对胆胃平颗粒中枳壳的含量进行质量控制。

表3 3批样品中柚皮苷、新橙皮苷含量（mg／g，n＝3）

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2015：246.

[2]徐欢，陈海芳，介磊，等.枳实枳壳的化学成分及胃肠动力研究概述[J].江西中医学院学报，2009，21（1）：42－44.

[3]魏惠珍，谢菲，饶毅，等.内标多控法测定枳实、枳壳青皮和陈皮中黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（14）：74－76.

[4]季忆，陈建真，陈建明.枳壳黄酮类成分的研究进展[J].中国中医药信息杂志，2010，17（11）：105－107.

[5]袁丹，王青，王启隆，等.枳实及其提取物质量评价法的研究[J].中国药学杂志，2005，40（15）：1178－1179.

[6]顾雪竹，毛淑杰，程立平.辅料麦麸炮制对枳壳成分的影响[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（10）：26－28.

[7]金艺，许海燕，赵怀清，等.高效液相色谱法测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷的含量[J].中南药学，2008，6（3）：317－319.

[8]康四和，周锐，聂晶.HPLC测定小儿消积止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中成药，2010，32(12)：2088－2090.

[9]杨武亮，杨世林，黄加龙，等.高效液相色谱法测定不同产地枳壳中柚皮苷和新橙皮苷[J].中草药，2006，37（12）：1888－1889.

[10]杨华，邓义德，胡高云.高效液相色谱法测定不同产地枳壳药材中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、异柚皮苷的含量[J].中国药业，2012，21（22）：33－35.

[11]张金莲，何敏，谢一辉，等.高效液相色谱法测定枳壳饮片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（6）：68－70.

[12]曹君，符玲，杨武亮，等.不同炮制方法对枳壳中柚皮苷和新橙皮苷含量的影响[J].江西中医药大学学报，2005，17（1）：41－42.

[13]刘玉春，张静.HPLC同时测定橘红枇杷胶囊中橙皮苷、柚皮苷的含量[J].安徽医药，2013，17（12）：2044－2045.

[14]李志勇，程帆，刘地发，等.HPLC测定奥兰替胃康片中柚皮苷、橙皮苷的含量[J].中国药师，2012，15（1）：53－55.

[15]马辉.HPLC法测定枳实中柚皮苷和新橙皮苷的含量[J].安徽医药，2011，15（11）：1354－1355.

[16]唐德智.通宣理肺胶囊中柚皮苷、橙皮苷和黄芩苷的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（15）：93－95.

Content Determ ination of Naringin and Neohesperidin in Danweiping G rains by HPLC

Wei Xiaorui,Xu Jinling,Liu Yanxia

(Xuchang Institute for Food and Drugs Control,Xuchang,Henan,China 461000)

Objective To establish an HPLC method for content determination of the naringin and neohesperidin in Danweiping Grains.M ethods The chromatographic system consisted of WondaSil C18column(250 mm×4.6 mm,5μm)with mobile phase of acetonitrilewater(adjusted pH to 3 with phosphoric acid,20∶80),the detection wavelength was 283 nm,the flow rate was 1.0 m L／min and the column temperature was 30℃.Resu lts The linear range of naringin and neohesperidin was 0.081 3－1.625 7μg(r＝0.999 9),0.081 7－1.633 4μg(r＝0.999 9),respectively.The average recoveries were 100.46%(RSD＝1.71%,n＝6)and 99.59%(RSD＝1.43%,n＝6).Conclusion The method is simple,accurate and reproducible,which is suitable to control the quality of Citrus Aurantium in Danweiping Grains.

Danweiping Grains;naringin;neohesperidin;HPLC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)11－0028－03

2017－01－05；

2017－02－06)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.009

魏晓锐（1980－），女，主管药师，主要从事中药质量检测和药物分析工作，（电子信箱）11188129＠qq.com。