高效液相色谱法测定感冒疏风片中升麻素苷及5-O-基维斯阿米醇苷含量

姜雪敏，杨立志

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西158100）

·检验检测·

高效液相色谱法测定感冒疏风片中升麻素苷及5-O-基维斯阿米醇苷含量

姜雪敏，杨立志

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西158100）

目的建立测定感冒疏风片中升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱采用Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇－水(37∶63)，流速1.0 m L／min，检测波长254 nm。结果升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷进样量线性范围分别为0.064 6～1.292 0 g和0.061 4～1.227 4 g，r均为1.000 0；平均回收率分别为97.56%和97.57%，RSD分别为0.40%和0.48%（n＝6)。结论该方法操作简便、重复性好、结果准确，可作为感冒疏风片质量的控制方法。

感冒疏风片；升麻素苷；5－O－甲基维斯阿米醇苷；高效液相色谱法

感冒疏风片由麻黄绒、苦杏仁、桂枝、白芍、紫苏叶、防风、桔梗、独活、甘草、大枣、生姜、谷芽组方[1]，具有辛温解表、宣肺和中功效，用于风寒感冒、发热咳嗽、头痛怕冷、鼻流清涕、骨节酸痛、四肢疲倦。目前，其质量标准中未对方中无定性或定量测定项，无法有效控制产品的质量和疗效。本研究中参考文献[2－13]，建立了测定感冒疏风片中升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷含量的高效液相色谱（HPLC）法，并进行了方法学验证。现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；AG285型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。升麻素苷对照品(批号为111522－201008，纯度为93.9%），5－O－甲基维斯阿米醇苷对照品（批号为111523－101007，纯度为96.5%），均购于中国食品药品检定研究院；感冒疏风片（昆明中药厂有限公司，批号为540557；云南腾药制药股份有限公司，批号为150602，150801）；水为屈臣氏蒸馏水，乙腈（色谱纯，Merck公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－水（37∶63）；流速：1.0m L／min；柱温：30℃；进样量：5μL；检测波长：254 nm。理论板数按升麻素苷峰计算均不低于4 000。

2.2 溶液制备

称取升麻素苷对照品12.92mg，精密称定，5－O－甲基维斯阿米醇苷对照品12.28mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制成质量浓度分别为1.292 g／L和1.228 g／L的对照品贮备液。再分别量取对照品贮备液各1m L，置20mL容量瓶里，制成每1mL含升麻素苷64.6μg和5－O－甲基维斯阿米醇苷61.374μg的混合对照品溶液。

取样品适量，研细，称取1.337 3 g（平均片重为0.444 1 g），精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇10m L，密塞，称定质量，超声处理30 min（功率400 W，频率40 Hz），放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

按照感冒疏风片处方工艺制成不含防风的空白样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，依法测定，记录色谱图，见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷对照品混合溶液1，2，5，10，15，20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品进样量为横坐标（X，μg）、峰面积积分值为纵坐标（Y）进行回归分析。回归方程为升麻素苷Y＝2.1000×106X－2.728 7×103，r＝1.000 0(n＝6)；5－O－甲基维斯阿米醇苷Y＝2.300 0×106X－3.034×103，r＝1.000 0(n＝6)。结果表明，升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷进样量分别在0.064 6～1.292 0μg和0.061 4～1.227 4μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取混合对照品溶液5μL，连续进样6次。结果升麻素苷和5－O－甲基维斯阿米醇苷的平均峰面积值分别为692 518和707 398，RSD分别为0.92%和0.87%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，在室温下放置0，2，4，8，12，24 h后，分别进样5μL，记录峰面积。结果升麻素苷和5－O－甲基维斯阿米醇苷峰面积的平均值分别为694 537和710 119，RSD分别为0.96%和0.76%（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验：称取同一批（批号为540557）样品6份，按供试品溶液制备方法制备，测定含量和每片样品升麻素苷和5－O－甲基维斯阿米醇苷平均含量为0.150 mg和0.145 mg，RSD分别为0.79%和0.96%（n＝6）。表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的同批（批号为540557，每片含升麻素苷0.150mg，5－O－甲基维斯阿米醇苷0.145mg）样品约0.65 g共6份，精密称定，分别置锥形瓶中，分别精密加入升麻素苷对照品溶液(220.0μg／mL)和5－O－甲基维斯阿米醇苷对照品溶液(210.0μg／mL)各0.8，1.0，1.2m L，甲醇稀释按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n＝6)

2.4 样品含量测定

取市售感冒疏风片3批，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件测定样品中升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（mg，n＝6）

3 讨论

经检测，升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷最大紫外吸收波长均在（254±2）nm处，比较发现，254 nm时两种被测成分均有较大的吸收。

参照2015年版《中国药典（一部）》对流动相比例进行调整，发现甲醇－水（37∶63）时分离度更好。

方中防风为主药，升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷是其主要成分，含量高，易于测定，故采用测定处方中防风的成分含量以控制该制剂的质量。

分别考察以50%甲醇、甲醇、乙酸乙酯作为溶剂，结果表明，甲醇提取效果较好，故以甲醇为提取溶剂。

用甲醇分别提取20，30，60 min，结果表明，20 min提取含量低于提取30 min和60 min，且提取30 min和60min含量基本相同，故确定提取时间为30min。

[1]WS3－B－2251－96，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十一册)[S].

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Content Determ inating of Prim－O－G lucasylcim ifogin and 5－O－M ethylvisamm iosode in Ganm aoshufeng Tab lets by HPLC

Jiang Xuemin,Yang Lizhi

(Jixi Inspection and Testing Center for Food and Drug,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Objective To establish an HPLC method for content determination of prim－O－glucasylcimifoginand 5－O－methylvisammiosodein in Ganmaoshufeng Tablets.M ethods The separation was performed on a Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm,5μm) with methanol－water solution(37∶63),the flow rate was 1.0 mL／min,the detection wave length was 254 nm.Resu lts The linear ranges of prim－O－glucasylcimifogin and 5－O－methylvisammiosode were 0.064 6－1.292 0μg(r＝1.000 0)and 0.061 4－1.227 4μg (r＝1.000 0),respectively,the average recoveries were 97.56%and 97.57%,respectively,the RSDs were 0.40%and 0.48%,respectively(n＝6).Conclusion The method is simple,reproducidle and accurate,which can be used for the quality contorl of Ganmaoshufeng Tablets.

Ganmaoshufeng Tablets;prim－O－glucasylcimifogin;5－O－methylvisammiosode;HPLC

R284.1

A

1006－4931(2017)11－0022－03

2017－03－15)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.007

姜雪敏（1979－），女，大学本科，副主任药师，主要从事食品药品检验检测工作，（电子信箱）jiangxuemin88＠163.com。