狗舌草的化学成分研究

唐雨，刘艳霞，张宏伟

（中国人民解放军第三军医大学药学院生药学与天然药物化学教研室，重庆400038）

狗舌草的化学成分研究

唐雨，刘艳霞，张宏伟

（中国人民解放军第三军医大学药学院生药学与天然药物化学教研室，重庆400038）

目的探讨狗舌草的化学成分。方法采用硅胶，RP－C18，Sephadex LH－20和高效液相色谱法等色谱方法对狗舌草进行分离、纯化，根据化合物的理化性质和波谱学方法对狗舌草化学成分进行结构鉴定。结果从狗舌草中分离得到6个化合物，分别鉴定为白杨素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合欢素(acacetin，4)，异鼠李素－3－O－ －D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－ －D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)。结论6个化合物均为首次从狗舌草属中分离得到。

狗舌草；化学成分；成分分离；结构鉴定

狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.为菊科狗舌草属植物，具有清热、解毒、活血消肿等功效[1]，临床用于治疗发热、贫血、出血、肝脾和淋巴结肿大[2]。国内外关于狗舌草化学成分的报道主要集中于生物碱，尤其是吡咯里西啶类生物碱（PAs）[3－4]。目前，对狗舌草黄酮类成分的研究仅局限于其所含黄酮的类型、总黄酮的提取工艺以及药理作用等[5－8]。笔者对狗舌草的黄酮类化合物进行了系统的研究，从乙酸乙酯部位中分离得到了5个黄酮类化合物，另外还分离到1个酯类化合物，依据理化性质与谱学数据，分别鉴定为白杨素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合欢素(acacetin，4)，异鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)，所有化合物均为首次从狗舌草属中分离得到。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1100型半制备高效液相色谱仪；SQ Detecter电喷雾电离质谱（美国Waters公司）；AgilentAV－600MHz核磁共振光谱仪(Agilent公司)；ZX98－1旋转蒸发仪（上海鲁伊工贸有限公司）；ZF－7 TLC紫外检测仪（上海嘉鹏科技有限公司）；CPA225D电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；酶标仪（Bio－Rad）。

1.2 试药

甲醇（色谱纯，上海），石油醚，乙酸乙酯，二氯甲烷，甲醇等(分析纯，成都科龙化工有限公司），氘代试剂；薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工厂，德国默克公司），薄层色谱硅胶H，GF254和柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；十八烷基硅胶键合相柱色谱材料（RP－C18，北京京京科技公司，50μm，70μm）；羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH－20，瑞士Pharmacia公司）。狗舌草药材购于河南药材市场，由重庆医科大学中药学院何先元副教授鉴定为狗舌草属植物狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.的干燥地上部分。

2 方法与结果

2.1 提取分离

取干燥、粉碎的狗舌草药材10 kg，用体积分数为95%的乙醇回流提取3次，每次3 h。合并提取液并在60℃减压浓缩，得粗提物浸膏1 545.6 g。

粗提物浸膏混悬于适量水中，依次用石油醚（30～60℃）、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇各萃取3次。合并萃取液并分别回收溶剂后，得到石油醚萃取部分346.8 g，氯仿萃取部位105.2 g，乙酸乙酯萃取部位152.5 g，正丁醇萃取部位404.2 g。

取乙酸乙酯部位（60 g）经大孔树脂柱色谱，以不同体积分数的乙醇进行梯度洗脱，所得组分根据薄层色谱检测得Fr.1～Fr.6共6个组分。其中Fr.3经反复硅胶柱色谱（石油醚－乙酸乙醋）分离及半制备HPLC(甲醇－水)纯化得到化合物3（15 mg）、化合物5（21 mg）。Fr.4经反复硅胶柱色谱（石油醚－乙酸乙醋）分离及半制备HPLC(甲醇－水)纯化得到化合物1（30mg）、化合物2（12 mg）、化合物4（22mg）、化合物6（25 mg）。化合物化学结构见图1。

2.2 结构鉴定

2.2.1 化合物1

黄色针晶（甲醇）。盐酸－镁粉反应阳性。

图1 化合物1－6化学结构

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.93(1H，s，H－3)，6.18(1H，d，J＝1.8 Hz，H－6)，6.49(1H，d，J＝1.8 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝7.3 Hz，H－2′，6′)，7.54(2H，m，H－3′，5′)，7.56(1H，m，H－4′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.5(C－2)，105.6(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.6(C－6)，165.3(C－7)，94.6(C－8)，157.9(C－9)，104.3 (C－10)，131.2(C－1′)，126.8(C－2′)，129.6(C－3′)，132.4(C－4′)，129.6(C－5′)，126.8(C－6′)。

以上数据与文献[9]报道的白杨素谱学数据对照基本一致，鉴定化合物1为白杨素(chrysin)。

2.2.2 化合物2

黄色粉末（甲醇）。盐酸－镁粉反应阳性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.74(1H，s，H－3)，6.15(1H，d，J＝1.6 Hz，H－6)，6.44(1H，d，J＝1.6 Hz，H－8)，7.89(2H，d，J＝8.5 Hz，H－2′，6′)，6.90(2H，d，J＝8.5 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ164.1(C－2)，103.2(C－3)，182.1(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.5(C－7)，94.4(C－8)，157.8(C－9)，104.0 (C－10)，121.6(C－1′)，128.9(C－2′)，116.4(C－3′)，161.7(C－4′)，116.4(C－5′)，128.9(C－6′)。

以上数据与文献[10]报道的芹菜素谱学数据对照基本一致，鉴定化合物2为芹菜素(apigenin)。

2.2.3 化合物3

黄色粉末（甲醇）。盐酸－镁粉反应阳性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，d，J＝1.7 Hz，H－6)，6.40(1H，d，J＝1.7 Hz，H－8)，8.01 (2H，d，J＝8.8 Hz，H－2′，6′)，6.89(2H，d，J＝8.8 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ147.2(C－2)，136.1(C－3)，176.3(C－4)，161.1(C－5)，98.6(C－6)，164.3(C－7)，93.9(C－8)，156.6(C－9)，103.5(C－10)，122.1(C－1′)，129.9(C－2′)，115.9(C－3′)，159.6(C－4′)，115.9(C－5′)，129.9(C－6′)。

以上数据与文献[11]报道的山柰酚谱学数据对照基本一致，鉴定化合物3为山柰酚(kaempferol)。

2.2.4 化合物4

黄色粉末（甲醇）。盐酸－镁粉反应阳性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.84(1H，s，H－3)，6.17(1H，d，J＝1.5 Hz，H－6)，6.48(1H，d，J＝1.5 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝8.7 Hz，H－2′，6′)，7.08(2H，d，J＝8.7 Hz，H－3′，5′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.7(C－2)，104.0(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.9(C－7)，94.5(C－8)，157.8(C－9)，104.1 (C－10)，123.3(C－1′)，128.8(C－2′)，115.0(C－3′)，162.7(C－4′)，115.0(C－5′)，128.8(C－6′)，56.0 (4′－OMe)。

以上数据与文献[11]报道的金合欢素谱学数据对照基本一致，鉴定化合物4为金合欢素(acacetin)。

2.2.5 化合物5

黄色粉末（甲醇）。盐酸－镁粉反应及Molish反应均为阳性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，s，H－6)，6.44(1H，s，H－8)，7.72(1H，s，H－2′)，6.90 (1H，d，J＝7.6 Hz，H－5′)，7.65(1H，d，J＝7.6 Hz，H－6′)，12.43(1H，s，5－OH)，5.54(1H，d，J＝7.2 Hz，H－1′′)，3.81(3H，s，3′－OMe)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ156.9(C－2)，133.3(C－3)，177.8(C－4)，161.6(C－5)，99.2(C－6)，164.7(C－7)，94.1(C－8)，156.7(C－9)，103.3 (C－10)，122.4(C－1′)，113.9(C－2′)，147.3(C－3′)，149.8(C－4′)，115.6(C－5′)，121.5(C－6′)，101.0(C－1′′)，74.7(C－2′′)，76.8(C－3′′)，70.2(C－4′′)，77.9 (C－5′′)，61.0(C－6′′)，56.1(3′－OMe)。

以上数据与文献[12]报道的异鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷谱学数据对照基本一致，鉴定化合物5为异鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside)。

2.2.6 化合物6

白色针晶（甲醇）。三氯化铁显蓝色。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ7.01(1H，d，J＝1.6 Hz，H－2)，6.73(1H，d，J＝8.2 Hz，H－5)，6.97 (1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H－6)，7.44(1H，d，J＝15.9Hz，H－7)，6.22(1H，d，J＝15.9 Hz，H－8)，4.12(2H，q， J＝7.1 Hz，CH2)，1.20(3H，t，J＝7.1 Hz，CH3)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ125.9(C－1)，114.5(C－2)，146.0(C－3)，148.8(C－4)，116.5(C－5)，121.8(C－6)，145.4(C－7)，116.1(C－8)，167.0 (C－9)，60.1(CH2)，14.7(CH3)。

以上数据与文献[13]报道的咖啡酸乙酯谱学数据对照基本一致，鉴定化合物6为咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester)。

3 讨论

有关狗舌草化学成分的研究已有不少报道，但多集中在生物碱类化学成分，且多为PAs生物碱，对黄酮类化合物的研究却很少。本研究中就狗舌草黄酮类化合物的提取、分离及鉴定进行了系统研究，初步得到了6个化合物，均为首次从狗舌草属植物中发现。本研究结果可为进一步阐明狗舌草化学成分与药理活性的相关性研究提供参考。

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，1973：557.

[2]李扬汉.中国杂草志[M].北京：中国农业出版社，1998：359.

[3]Buckmaster GW.Pyrrolizidine alkaloid posioning in rats:protective effect of dietary cysteine[J].JAniSci，1976，3(2)：464－473.

[4]王建华，王跃虎，司红丽.狗舌草生物碱成分分析[J].西北农林科技大学学报：自然科学版，2004，32（1）：93－95.

[5]司红丽，王建华，王跃虎.狗舌草总黄酮的提取及其毒性试验[J].畜牧与兽医，2003，35(7)：9－10.

[6]邱燕燕，牛泱平.狗舌草中总黄酮的提取工艺研究[J].浙江化工，2009，40(10)：5－7.

[7]王建娜，司红丽.狗舌草总黄酮对L1210细胞的体外作用研究[J].辽宁中医杂志，2010，37(9)：1788－1790.

[8]司红丽，王建娜，王跃虎，等.狗舌草黄酮类化合物对3种肿瘤细胞的药物敏感试验[J].药物生物技术，2003，10(4)：229－231.

[9]侯蕾，吕秀香，谢彬彬，等.中药益智的化学成分研究[J].天然产物研究与开发，2013，25(7):878－881.

[10]Mitsuo Miyazawa，Masayoshi Hisama.Antimutagenic Activity of Flavonoids from Chrysanthemum morifolium[J].Biosci Biotechnol Biochem，2003，67(10)：2091－2099.

[11]雷军，陈屏，许旭东，等.短梗五加茎的化学成分研究[J].中国药学杂志，2014，49(18)：1595－1598.

[12]Petler A，Ward R，Lansgray T.The carbon－13 nuclearmagnetic resonance spectra of flavonoids and related compounds[J].J Chem Soc，Perkin Trans，1976，23：2475－2483.

[13]成军，白焱晶，程铁明，等.杜仲叶苯丙素类化学成分的研究[J].中国中药杂志，2002，27(1)：38－40.

Study on Chem ical Constituents of Tephroseris Kirilowii

Tang Yu,Liu Yanxia,Zhang Hongwei

(Teaching and Research Section of Pharmacognosy and Natural Pharmaceutical Chemistry in College of Pharmacy,3rd Military Medical University, Chongqing,China 400038)

Ob jective To study the chemical constituents of Tephroseris Kirilowii.M ethods The silica gel,RP－C18,Sephadex LH－20 and HPLC methods were adopted to isolate and purify the Tephroseris Kirilowii,and thechemical constituents were elucidated by the physicochemical properties and spectral analysis.Results 6 kinds of compounds were obtained and identified aschrysin(1),apigenin(2), kaempferol(3),acacetin(4),isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside(5),caffeic acid ethyl ester(6).Conclusion The 6 kinds of compounds are isolated from Tephroseris Kirilowii for the first time.

Tephroseris Kirilowii;chemical constituents;constituent isolation;structural identification

R284.2；R282.6

A

1006－4931(2017)11－0016－03

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.005

国家青年自然科学基金项目[81202869]。

唐雨（1986－），女，硕士研究生，助教，主要从事天然药物化学及其药理作用研究，（电子信箱）tangyuflower＠163.com。

张宏伟（1977－），男，硕士研究生，副教授，主要从事天然药物化学及其药理作用研究，（电子信箱）zhwqz＠hotmail.com。