乙型肝炎病毒对辅助生殖患者胚胎发育的影响

丁钰，刘霞*，李金金，刘海宁

(1.青岛大学附属医院生殖医学科，青岛 266021；2.青岛市传染病医院，青岛 266033)

乙型肝炎病毒对辅助生殖患者胚胎发育的影响

丁钰1，刘霞1*，李金金2，刘海宁1

(1.青岛大学附属医院生殖医学科，青岛 266021；2.青岛市传染病医院，青岛 266033)

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染对胚胎发育的影响，为HBV阳性患者改善周期结局，提供更多理论依据。 方法 收集从2012年1月至2016年9月来我院就诊的4 301个ART周期病理资料，按是否HBV感染分为三组，A组：男方和女方均HBV阴性(n=3 940)；B组：女方HBV阳性而男方阴性(n=195)；C组：女方HBV阴性而男方阳性(n=166)，比较三组的胚胎受精率、卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率及妊娠率。 结果 (1)ART患者B组妊娠率明显低于A组(39.8% vs 52.6%)，且差异具有统计学意义(P<0.05)；(2)IVF周期中B和C组的受精率、卵裂率、可移植胚胎率及优质胚胎率与A组相比，差异无统计学意义；(3)ICSI周期中C组受精率明显低于A组(75.1% vs 83.5%)，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 HBV可能通过影响胚胎着床或者子宫内膜而影响周期结局。

乙型肝炎病毒； 辅助生殖； 胚胎发育

(JReprodMed2017，26(7)：666-669)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV) 是一种嗜肝性病毒，HBV感染是严重危害人类健康和生命安全的公共卫生问题。近年的研究表明HBV DNA 可与生殖细胞染色体整合[1-2]，，通过垂直传播感染胚胎，影响胎儿发育[3-5]，然而具体机制尚不明确。随着乙肝患者发病率的上升，明确实施辅助生殖技术(ART)患者 HBV对胚胎发育的具体作用机制越来越具有必要性[6-7]。

本研究选取2012年1月份到2016年9月份来我院生殖中心就诊的患者，共4 301个周期，统计分析HBV感染对胚胎受精率、卵裂率、可移植胚胎率及优质胚胎率的影响，推测妊娠结局，为HBV阳性ART患者进行早期干预提供实验基础和理论依据。

资料和方法

一、研究对象

收集2012年1月份至2016年9月份在我院生殖医学科接受人工助孕的4 301个治疗周期，根据是否HBV感染进行分组，其中男方和女方均HBV阴性的治疗周期为3 940(IVF治疗周期2 981，ICSI 治疗周期728)，为对照组(A组)；女方HBV阳性男方阴性的治疗周期为195(IVF治疗周期154，ICSI治疗周期30)，为女方阳性组(B组)；女方HBV阴性而男方阳性的治疗周期166(IVF治疗周期115，ICSI治疗周期40)，为男方阳性组(C组)。其中IVF和ICSI的分组中排除了补救ICSI周期。入组标准：(1)夫妻双方仅一方HBsAg检测为阳性；(2)女方输卵管因素、子宫内膜异位症及卵巢功能导致的不孕；(3)夫妻双方HBsAg检测均为阴性。排除标准：(1)夫妻双方检测HBsAg均为阳性；(2)男方为供精；(3)不明原因的不育。

二、方法

1.HBV阳性感染患者判定标准：HBV血5项标志物检测：(1)乙肝表面抗原HBsAg，(2)乙肝表面抗原抗体HBsAb，(3)乙肝e抗原HBeAg，(4)乙肝e抗体HBeAb，(5)乙肝核心抗原抗体HBc-IgG Ab。其中HBsAg阳性为HBV感染，而HBsAg阴性则为未感染HBV[8]。

2.胚胎评分：按Peter卵裂期胚胎评分系统评估D3 胚胎质量。Ⅰ级：卵裂球大小均匀，形状规则，透亮，碎片<10%；Ⅱ级：卵裂球稍不均匀或形状稍不规则，胞浆有颗粒现象，碎片在10%～20%之间；Ⅲ级：卵裂球明显不均匀或形状明显不规则，胞浆有颗粒现象，碎片在20%～50%之间；Ⅳ级：卵裂球严重不均匀或形状严重不规则，胞浆有颗粒现象，碎片>50%。将第3天发育到6～10个卵裂球的Ⅰ、Ⅱ级胚胎定义为优质胚胎，其余为低评分胚胎。将第3天发育到4个卵裂球以上的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级胚胎定义为可移植胚胎。

三、统计学分析

采用SPSS 21.0 软件进行统计学分析，用χ2检验比较各组间率，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、各组患者的基本资料

统计学分析三组ART患者基本资料，不育类型、年龄、不育年限及不育原因方差别均无统计学意义(表1)。

表1 各组患者的基本临床资料比较[(x-±s)，n(%)]

二、三组ART患者的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率的比较

统计学分析三组ART患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率，结果表明：三组患者受精率、卵裂率和可移植胚胎率差别无统计学意义，而B组妊娠率明显低于对照组(A组)，差异有统计学意义(P<0.05)；C组优质胚胎率明显高于A组和B组，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

三、三组ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率比较

统计学分析三组ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率，结果表明，三组患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率的差异均无统计学意义(表3)。

四、三组ART患者ICSI周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率比较

比较ART患者ICSI周期中的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率，结果表明，三组患者受精率和可移植胚胎率差异无统计学意义，而C组(男方阳性组)受精率明显低于A组和B组，优质胚胎率明显高于A、B两组，差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。

表2 三组ART患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率的比较[n(%)]

注：与A组比较，*P<0.05；#P<0.01

表3 三组ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率比较[n(%)]

表4 三组ART患者ICSI周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率比较[n(%)]

注：与C组比较，*P<0.05

讨 论

HBV引起的乙型肝炎，是一种严重危害人类健康的世界性传染病，也是世界卫生组织重点监控的卫生问题。乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝炎、肝硬化以及肝癌严重危害人类健康、削弱劳动力、增加家庭社会负担。中国是乙型肝炎高发区，在1～60岁人群中HBsAg阳性率为7.2%，其中处在婚育年龄人群乙肝病毒携带率近10%[1]。每10对育龄夫妇中就有一对需要借助ART才能有后代，HBV对辅助生殖患者胚胎发育具体影响机制的研究尤为重要。本研究结果显示ART患者女方阳性组(B组)生化妊娠率明显低于其它各组，且差别具有统计学意义，提示在ART患者中HBV可能通过母系途径影响胚胎发育，进而影响周期结局。Ye等[9]发现在卵巢组织的间质细胞、颗粒细胞及卵细胞中有HBsAg表达，在不同阶段的卵母细胞、颗粒细胞、卵巢间质细胞核内检测出HBV DNA，表明在无外界干扰的条件下，HBV可以感染生殖器官及卵母细胞，提示卵母细胞可能是亲代将HBV传给子代的载体。Zhao等[10]的动物实验也发现，HBV DNA序列能够通过卵母细胞的透明带和细胞膜进入卵母细胞内并整合到基因组染色体上。这样感染有HBV的卵母细胞在受精过程将病毒带入胚胎中[11]。由此，综合以上各实验结果与本实验结果推测HBV可能通过女性生殖细胞感染胚胎，从而影响胚胎分裂。

精子DNA 碎片化指数 (DNA fragmentation index，DFI) 是评价精子DNA 完整性的常用指标，与辅助生殖周期结局密切相关。DFI≤30% 认为具有更低的自然妊娠率，导致优胚率下降和流产率上升，并降低IVF 和ICSI的妊娠率[12]。最近的研究发现HBV患者DFI 是正常男性的2倍水平，结果具有显著性差异[13]。HBV感染可能是影响HBV阳性ART患者周期结局的重要因素。Zhou等[14]的研究发现男性HBV 患者(实验组) 较男性HBV 阴性(对照组) 表现更差的ICSI-ET 结局(包括受精率、优质胚胎率、着床率和临床妊娠率)。而其它研究表明男方阳性患者精液中可检测出HBV DNA，HBV 男方阳性并不影响 IVF/ICSI-ET 治疗的结局[15-18]。本研究结果表明男方阳性组(C组)ART患者ICSI周期的优质胚胎率明显高于其它两组，在IVF周期中优质胚胎率与其它两组相比，无明显差别，但是ICSI周期的优质胚胎率明显高于其它两组，由此推测精子的选择与胚胎质量有关。与阴性对照组(A组)相比，虽然男方阳性组(C组)优质胚胎率明显升高，但是妊娠率却无明显差别，这与先前的研究并不矛盾，在移植胚胎选择上，原则上选择优质胚胎，虽然男方阳性影响优质胚胎率，但是移植时尽量选择优质胚胎，所以最终并不会影响妊娠结局。男方阳性组(C组)ICSI周期卵裂率明显低于其它三组，表明HBV可以通过精子影响胚胎发育，具体机制还需继续研究。

本研究通过比较分析HBV阴性和阳性ART患者卵裂率、受精率、可移植胚胎率和优质胚胎率，发现ART患者女方阳性组妊娠率明显低于对照组，而卵裂率、受精率、可移植胚胎率和优质胚胎率无明显差别，表明HBV可能通过影响胚胎着床或者子宫内膜而影响周期结局。而ICSI患者HBV主要通过精子影响胚胎发育，为明确HBV在胚胎发育中的后续研究提供了实验基础。

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[编辑：辛玲]

Effect of hepatitis B virus infection on embryo development of patients with assisted reproductive technique

DINGYu1，LIUXia1*，LIJin-jin2，LIUHai-ning1

1.DepartmentofReproductivemedicine，theAffiliatedHospitalofQingdaoUniversity，Qingdao2660212.QingdaoInfectiousDiseasesHospital，Qingdao266033

Objective：To investigate the effect of Hepatitis B virus (HBV) infection on embryo development，and provide more theoretical basis for improving the outcome in assisted reproductive technique (ART) in HBV positive patients.

Methods：The ART 4 301 cycles in ART patients with pathological data in our hospital from January 2012 to September 2016 were collected.The ART cycles were divided into three groups according to whether HBV infection：Both of husband and wife were negative for HBV in group A(n=3 940)；The wife was HBV positive while husband was negative in group B(n=195)；The woman HBV negative while husband was positive in group C(n=166).The fertilization rate，cleavage rate，transplantable embryo rate，high quality embryo rate and pregnancy rate were compared among the three groups.

Results：The pregnancy rate of group B was significantly lower than that of group A((39.8% vs 52.6%)(P<0.05).The fertilization rate，cleavage rate，transferred embryo rate and high quality embryos rate in group B or group C were not different with group A.The fertilization rate of ICSI cycle in group C with was significantly lower than that in the group A(P<0.01).

Conclusions：HBV infection has a negative effect on the clinical outcome of assisted reproductive technology.

Hepatitis B virus； Assisted reproduction technique； Embryonic development

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.07.009

2016-12-27；

2017-02-10

丁钰，女，山东青岛人，硕士，主管技师，生殖医学专业.(*

，Email：qdliuxia@yeah.net)