血管紧张素Ⅱ1型受体多态性与替米沙坦降压疗效关系的研究

龚洪涛，杜凤和，陈步星

·论著·

血管紧张素Ⅱ1型受体多态性与替米沙坦降压疗效关系的研究

龚洪涛，杜凤和，陈步星*

目的 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)多态性与替米沙坦降压疗效之间的关系。方法 选取2005年6月—2007年1月北京天坛医院门诊轻中度高血压患者148例，其均服用替米沙坦单药治疗8周，1～2次/周测量血压。应用聚合酶链式反应(PCR)对患者AT1R基因1166A/C、-810A/T和-521C/T多态性进行分析，同时测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血钠、血钾、血氯、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)等生物化学指标。结果 患者治疗前后体质指数(BMI)、心率(HR)、ALT、AST、Cr、BUN、UA、FPG、TC、TG、LDL-C、HDL-C、血钠、血钾、血氯水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；患者治疗前后AngⅡ水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。AT1R基因1166A/C AA基因型和AC基因型、-810A/T AA基因型和AT基因型以及TT基因型治疗前收缩压、治疗后收缩压、收缩压降幅、治疗前舒张压、治疗后舒张压、舒张压降幅比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。AT1R基因-521C/T CC基因型、CT+TT基因型治疗前收缩压、治疗后收缩压、收缩压降幅、治疗前舒张压、治疗后舒张压比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；舒张压降幅比较，差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示，UA、-521C/T、治疗前AngⅡ、治疗前舒张压是影响舒张压降幅的因素(P<0.05)。结论 AT1R基因-521C/T多态性能独立预测患者对替米沙坦反应的个体差异。

高血压；受体，血管紧张素，1型；多态性，单核苷酸；血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂

龚洪涛，杜凤和，陈步星.血管紧张素Ⅱ1型受体多态性与替米沙坦降压疗效关系的研究[J].中国全科医学，2017，20(20)：2455-2458.[www.chinagp.net]

GONG H T，DU F H，CHEN B X.Relationship between polymorphisms of angiotensin Ⅱ type 1 receptor and antihypertensive responses of telmisartan[J].Chinese General Practice，2017，20(20)：2455-2458.

高血压是一种多基因疾病，发病率逐年增高，降压药物治疗是临床控制高血压最主要的途径。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)是目前应用较为广泛的一种降压药物，而患者对于该类药物的疗效存在个体差异，近年来有关降压药的疗效与突变位点的相关性成为研究热点[1]。本研究对高血压患者采用ARB(替米沙坦)单药治疗，在观察降压疗效的同时对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因1166A/C、-810A/T和-521C/T多态性进行分析，探讨AT1R基因多态性与替米沙坦降压疗效的关系，为临床降压药物的选择提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2005年6月—2007年1月北京天坛医院门诊高血压患者148例，其中男67例，女81例；年龄35～77岁，平均年龄(53.7±10.6)岁；汉族。患者均符合2003年WHO/国际高血压协会(ISH)高血压诊断标准[2]，诊断为原发性高血压病Ⅰ～Ⅱ级，坐位舒张压95～109 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)，收缩压140～180 mm Hg，均未用或停用降压药物，并服用安慰剂2周。排除继发性高血压，严重心功能不全，严重肝肾功能障碍，3个月内有心肌梗死及脑卒中，妊娠或哺乳期妇女。

1.2 给药方法及人体基本参数测定 患者均给予替米沙坦(德国勃林格殷格翰公司生产，药品批号：B040050B)80 mg/d，7：00～10：00顿服，共治疗8周，1～2次/周测量血压，均在上午由同一测量者测量；血压测量时静坐10 min，标准台式血压计坐位连续测量3次，间隔10 min/次，取均值。同时测定身高、体质量、心率(HR)等，计算体质指数(BMI)。

1.3 生物化学指标测定 抽取患者空腹静脉血4 ml，以3 000 r/min离心10 min，离心半径7 cm，取血清，采用生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血钠、血钾、血氯等指标。采用放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。

1.4 DNA提取 取冷冻乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血，水浴解冻，E.Z.N.ATM Blood DNA Kit(OMEGA)试剂盒提取DNA，-20 ℃保存。

1.5 聚合酶链式反应(PCR)扩增和限制性片段长度多态性(RFLP)法进行基因分型 采用Oligo 6.0软件设计引物，引物序列见表1。PCR扩增条件：总反应体系为10.0 μl，包括20 ng基因组DNA 2.0 μl，PCR引物(5 pmol/μl)各0.6 μl，2×Taq PCR Master Mix 5.0 μl，用灭菌蒸馏水补充至10.0 μl。PCR反应参数：首先95 ℃预变性10 min，然后进行35个循环，每一循环包括94 ℃变性30 s，相应的退火温度退火30 s，72 ℃延伸40 s。最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶(EB)染色，凝胶成像仪成像。取PCR扩增产物10 μl，5 U Dde Ⅰ，Alu Ⅰ和Ssp Ⅰ内切酶(美国promega公司生产)，10×缓冲液2 μl，加双蒸水补充体积至20 μl，37 ℃温育12 h后，取10 μl上述产物，用含EB的2%琼脂糖凝胶在电压100 V、1×TAE缓冲液中电泳45 min，凝胶成像系统下观察并保存酶切结果。

表1 基因多态性位点的扩增引物和条件

注：AT1R=血管紧张素Ⅱ1型受体，PCR=聚合酶链式反应

2 结果

2.1 治疗前后临床生化指标比较 患者治疗前后BMI、HR、ALT、AST、Cr、BUN、UA、FPG、TC、TG、LDL-C、HDL-C、血钠、血钾、血氯水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；患者治疗前后AngⅡ水平比较，差异有统计学意义(P<0.05，见表2)。

2.2AT1R基因多态性位点基因型和等位基因频率分布AT1R基因3个多态性位点1166A/C、-810A/T和-521C/T基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.95、0.27、0.55，P>0.05，见表3)。-521C/TTT基因型频率较低，因此将CT和TT基因型合并，行进一步分析。

2.3AT1R基因多态性不同基因型血压比较AT1R基因1166A/CAA基因型和AC基因型治疗前收缩压、治疗后收缩压、收缩压降幅、治疗前舒张压、治疗后舒张压、舒张压降幅比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。AT1R基因-810A/TAA基因型、AT基因型、TT基因型治疗前收缩压、治疗后收缩压、收缩压降幅、治疗前舒张压、治疗后舒张压、舒张压降幅比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。AT1R基因-521C/TCC基因型、CT+TT基因型治疗前收缩压、治疗后收缩压、收缩压降幅、治疗前舒张压、治疗后舒张压比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；舒张压降幅比较，差异有统计学意义(P<0.05，见表4)。

2.4 多元线性回归分析 以舒张压降幅为因变量，以性别(赋值：男=1，女=2)、年龄、BMI、Cr、UA、TG、FPG、LDL-C、HDL-C、-521C/T(赋值：CC=1，CT+TT=2)、治疗前AngⅡ、治疗前收缩压、治疗前舒张压、治疗前HR为自变量进行多元线性回归分析，结果显示，UA、-521C/T、治疗前AngⅡ、治疗前舒张压是影响舒张压降幅的因素(P<0.05，见表5)。

表3AT1R基因多态性位点基因型和等位基因频率分布〔n(%)〕

Table3Genotypeandallelefrequenciesofthe1166A/C，-810A/Tand-521C/TpolymorphismsoftheAT1Rgene

Table4ComparisonofbloodpressureindifferentgenotypesofAT1Rgenepolymorphism

基因型例数收缩压舒张压治疗前治疗后降幅治疗前治疗后降幅1166A/C AA126160±17147±20a18±14101±893±10a 9±6 AC22157±16136±18a23±19103±492±8a12±3 t值0.5831.728-1.107-0.6530.612-0.927 P值0.5610.0870.2710.5150.5420.356-810A/T AA81162±20146±22a17±14102±894±12a 9±5 AT50165±17153±12a17±10100±396±6a 9±3 TT17157±16143±20a20±15102±793±10a10±6 F值1.3121.2720.4080.1690.4880.380 P值0.2740.2850.6660.8450.6150.685-521C/T CC91158±18144±19a19±14102±793±10a11±5 CT+TT57162±15147±21a18±17100±795±11a 7±3 t值-1.047-0.8120.2431.160-1.0392.278 P值0.2980.4190.8090.2490.3010.025

注：与治疗前比较，aP<0.05

表2 患者治疗前后临床和生化指标比较±s，n=148)

注：BMI=体质指数，HR=心率，ALT=丙氨酸氨基转移酶，AST=天冬氨酸氨基转移酶，Cr=肌酐，BUN=尿素氮，UA=尿酸，FPG=空腹血糖，TC=总胆固醇，TG=三酰甘油，LDL-C=低密度脂蛋白胆固醇，HDL-C=高密度脂蛋白胆固醇，AngⅡ=血管紧张素Ⅱ

表5 舒张压降幅影响因素的多元线性回归分析

Table 5 Multiple linear regression analysis on influencing factors for DBP reducing ranges

变量ββ'SEt值P值UA-0.038-0.0690.018-2.1110.038-521C/T-1.566-0.1880.779-2.0100.047治疗前AngⅡ0.0350.2430.0162.1300.036治疗前舒张压0.4240.3720.1442.9360.004

注：常数=-33.180，R2=0.249，调整R2=0.121，F=1.946，P<0.05

3 讨论

人类AngⅡ受体有AT1R和2型受体(AT2R)两种亚型，目前认为AngⅡ所起的作用主要通过AT1R完成。人类AT1R基因位于3号染色体q21～25，含5个外显子和4个内含子。1994年BONNARDEAUX等[3]发现该基因有5种多态性，即537C/T、1062A/G、1166A/C、1517G/T和1878A/G，其中与临床关系最密切的是1166A/C。此后，ERDMANN等[4]在AT1R基因的启动子区域发现了9个多态性位点，认为可能影响AT1R基因的表达。

本研究选择AT1R基因1166A/C、-810A/T和-521C/T 3个多态性位点，研究结果发现，替米沙坦治疗8周后，在-521C/T位点，治疗前后CC基因型和CT+TT基因型舒张压降幅比较有差异；应用多元线性回归分析，排除影响患者服用ARB后降压疗效的因素后，-521C/T仍具有统计学意义；提示在-521C/T位点上，CC基因型对替米沙坦降压疗效可能起着积极的作用。-521C/T位点位于AT1R基因的启动子区域5′调控序列，基因调控序列的多态性位点可影响基因mRNA表达及相应蛋白质生成量，推测该位点可能通过影响AT1R基因的表达，从而影响系统中该基因产物的功能。目前国内外对该位点的研究极少，其与RAS其他成分如ACE、AngⅡ等关系尚不明确，因此进一步深入研究有助于该位点功能的阐明。

本研究未发现1166A/C、-810A/T与服用ARB后的降压疗效有关，1166A/C位于AT1R基因的非编码区，对AT1R基因转录和翻译不会产生直接影响，KURLAND等[5]研究未发现1166A/C多态性与伊贝沙坦降压疗效间存在相关性。其原因可能为：首先，AA和AC基因型的血清AT1R表达一致，替米沙坦作用于AT1R而发挥降压疗效，因此两组降压疗效无明显差别。其次，1166A/C多态性与血管壁对AngⅡ反应之间不存在相关性，HILGERS等[6]予以不同浓度的外源AngⅡ输注(0.5～3.0 ng/kg)，结果未发现不同基因型之间血压、醛固酮和肾血流动力学的差别。SPIERING等[7]研究证实此观点，表明1166A/C多态性不直接参与AngⅡ的调节。-810A/T位于AT1R基因启动子区-810处，笔者前期研究表明-810T等位基因在高血压患者中的发生率明显高于正常人，-810A/T多态性与高血压相关[8]，推测-810A/T可能通过影响AT1R的表达，增强AngⅡ的作用，从而对血压产生一定的影响。但未发现其与ARB降压疗效有关。

作者贡献：龚洪涛进行文章的构思与设计、数据收集、数据整理、统计学处理、结果的分析与解释、撰写论文、进行论文修订；龚洪涛、杜凤和、陈步星进行研究的实施与可行性分析、负责文章的质量控制及审校、对文章整体负责，监督管理。

本文无利益冲突。

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(本文编辑：贾萌萌)

Relationship between Polymorphisms of Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptor and Antihypertensive Responses of Telmisartan

GONGHong-tao，DUFeng-he，CHENBu-xing*

DepartmentofCardiology，BeijingTiantanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100050，China

*Correspondingauthor:CHENBu-xing，Chiefphysician;E-mail：chbux@126.com

Objective This study aims to investigate the relationship between the polymorphism of angiotensin Ⅱ type 1 receptor(AT1R) and the antihypertensive efficacy of telmisartan.Methods From June 2005 to January 2007，one hundred and forty-eight patients with mild-to-moderate primary hypertension were selected.All the patients accepted monotherapy of telmisartan for 8 weeks，blood pressure was measured 1-2 times/week.The AT1R genes 1166A/C，-810A/T and -521C/T polymorphism of the patients were analyzed by polymerase chain reaction (PCR).Some biochemical indexes such as alanine aminotransferase(ALT)，aspartate aminotransferase(AST)，creatinine(Cr)，blood urea nitrogen(BUN)，uric acid(UA)，fasting plasma glucose (FPG)，total cholesterol(TC)，triglyceride(TG)，low density lipoprotein cholesterol(LDL-C)，high density lipoprotein cholesterol(HDL-C)，blood sodium，blood potassium，blood chloride，angiotensin Ⅱ(AngⅡ) were also measured at the same time.Results The body mass index(BMI)，heart rate(HR)，ALT，AST，Cr，BUN，UA，FPG，TC，TG，LDL-C，HDL-C，blood sodium，blood potassium and blood chlorine levels were compared before and after treatment，the differences were all not statistically significant(P>0.05).The AngⅡ level of the patients before and after treatment were compared，the difference was statistically significant(P<0.05).The systolic blood pressure before and after treatment，systolic blood pressure drop，diastolic blood pressure before and after treatment，diastolic blood pressure drop between AT1R gene 1166 A/C AA genotype and AC genotype，-810A/T AA genotype and AT genotype and TT genotype were compared，there were no significant differences(P>0.05).The systolic blood pressure before and after treatment，systolic blood pressure drop，diastolic blood pressure before and after treatment between AT1R gene -521C/T CC genotype and CT+TT genotype were compared，there were no significant differences(P>0.05).The diastolic blood pressure drop was compared，there was a statistically significant difference(P<0.05).Multiple linear regression analysis showed that UA，-521C/T，AngⅡ before treatment and diastolic blood pressure before treatment were the influencing factors of diastolic blood pressure drop(P<0.05).Conclusion The -521C/T polymorphism of AT1R gene can independently predict the individual difference in patients′ response to telmisartan.

Hypertension;Receptor，angiotensin，type 1;Polymorphism，single nucleotide;Angiotensin Ⅱ type 1 receptor blockers

R 544.1

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.20.006

2016-11-06；

2017-04-13)

100050北京市，首都医科大学附属北京天坛医院心内科

*通信作者：陈步星，主任医师；E-mail：chbux@126.com