颅脑损伤患者脑脊液中一氧化氮和内皮素的含量及意义

李晋　赵中平　杨勇龙　黄娴

【摘要】 目的：探讨一氧化氮（NO）、内皮素（ET）在颅脑损伤患者脑脊液中的表达及意义。方法：选取120例在本院住院时间超过7 d（含7 d）的颅脑损伤患者，根据GCS評分分为轻度组、中度组与重度组。采用Griess比色法和均相竞争法分别测定患者脑脊液中一氧化氮与内皮素水平。结果：120例颅脑损伤患者脑脊液中的内皮素水平高于正常参考值（P<0.05），一氧化氮水平低于正常参考值（P<0.05）。中度组患者入院第1天的一氧化氮、内皮素水平均高于轻度组，差异均有统计学意义（P<0.05）；重度组的一氧化氮、内皮素水平均高于中度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。颅脑损伤患者入院第1天脑脊液中内皮素水平达到最高峰值（195.96±4.38）pg/mL，一氧化氮水平同样达到峰值（13.52±6.01）μmol/L，在入院第3天，这两项指标均逐渐下降，与入院时比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：脑脊液中一氧化氮、内皮素水平的测定能较好地评估患者的颅脑损伤程度。

【关键词】 颅脑损伤； 脑脊液； 一氧化氮； 内皮素

Content and Significance of Nitric Oxide and Endothelin in Cerebrospinal Fluid of Patients with Brain Injury/LI Jin，ZHAO Zhong-ping，YANG Yong-long，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（15）：111-113

【Abstract】 Objective：To study the expression and significance of nitric oxide（NO） and endothelin（ET） in cerebrospinal fluid（CSF） of patients with brain injury.Method：A total of 120 craniocerebral injury patients with hospitalization beyond 7 days（including 7 days） in our hospital were divided into the mild group，the moderate group and the severe group according to GCS scores.Endothelin and nitric oxide levels of 120 cases were respectively detected by the Griess colorimetric method and the homogeneous competition method.Result：The endothelin level in cerebrospinal fluid of 120 patients with craniocerebral injury was higher than that normal reference value（P<0.05），the level of nitric oxide was lower than that normal reference value（P<0.05）.The levels of nitric oxide and endothelin in first day in the moderate group were higher than those in mild group，the differences were statistically significant（P<0.05）；the levels of nitric oxide and endothelin in the severe group were higher than those in the moderate group，the differences were statistically significant（P<0.05）.On the first day after entering the hospital cerebrospinal fluid endothelin level reached the peak （195.96±4.38）pg/mL，and nitric oxide level also reached the peak （13.52±16.01）μmol/L，and after 3 days in the hospital，both of them gradually decreased，compared with admission，the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion：The level of nitric oxide and endothelin in cerebrospinal fluid can be used to evaluate the degree of brain injury.

【Key words】 Brain injury； Cerebrospinal fluid； Nitric oxide； Endothelin

First-authors address：Guangdong Water and Electricity Hospital，Guangzhou 511340，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.15.032

近年来，医学研究发现脑脊液中的相关指标与CT图像结合能够更好的诊治颅脑损伤患者。一氧化氮（NO）与内皮素（ET）是血管内皮细胞分泌的新型神经递质，对微循环毛细血管内皮细胞通透性有很大的调节作用，同时这两项指标与颅脑损伤程度等一系列的病理及生理变化有紧密的联系[1]。针对不同程度颅脑损伤患者脑脊液中NO与ET指标的变化情况，研究两者在颅脑损伤时的变化过程，以此为颅脑损伤的临床治疗以及伤情诊断提供理论依据[2-3]。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽取2015年1月-2016年9月在本院住院时间超过7 d（含7 d）的颅脑损伤患者120例作为研究对象，根据格拉斯哥昏迷（GCS）评分分为轻度组（3～5分）、中度组（6～10分）与重度组（≥11分），轻度组31例，中度组45例，重度组44例。三组患者的一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 120例颅脑损伤患者分别于入院时、入院第1天、入院第2天、入院第3天、入院第5天、入院第7天采集脑脊液。利用硅化空针管采集脑脊液2.5 mL，置于30 mL 10%EDTA以及50 mL抑肽酶的塑料离心管中混匀，以此作为检测ET的准备。采集脑脊液2.5 mL，马上放入预冷的肝素抗凝试管中混匀，以此作为检测NO的准备[4]。

1.2.2 检测方法 （1）NO检测：采用Griess比色法间接测定NO含量，依据硝酸盐与磺酸及萘乙烯二胺盐酸盐反应产生粉红色偶氮化合物原理，代谢产物NO2以及NO3则是NO的含量，从而间接检测脑脊液NO中的含量[5]。一氧化氮正常参考值为（3.99±1.99）μmol/L。（2）ET检测：采取均相竞争法直接测定脑脊液内皮素含量，内皮素-1与标准物或样品同时竞争性与内皮素抗体结合，最后依据样品中放射性含量直接从标准曲线中查出相应内皮素含量[6-9]。内皮素的正常参考值为（83.90±13.80）pg/mL。

1.3 统计学处理 采用SPSS 21.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 入院第1天一氧化氮、内皮素水平与正常参考值比较 颅脑损伤患者入院第1天的一氧化氮水平为（13.52±6.01）μmol/L，高于正常参考值（3.99±1.99）μmol/L，内皮素水平为（195.96±4.38）pg/mL，低于正常参考值（83.90±13.80）pg/mL，差異均有统计学意义（P<0.05）。

2.2 三组患者入院第1天的一氧化氮、内皮素水平比较 中度组的一氧化氮、内皮素水平均高于轻度组，差异均有统计学意义（t=9.0773，P<0.05；t=195.6269，P<0.05）；重度组的一氧化氮、内皮素水平均高于中度组，差异均有统计学意义（t=7.6381，P<0.05；t=10.6900，P<0.05）

*与轻度组比较，P<0.05；#与中度组比较， P<0.05

2.3 颅脑损伤患者入院不同时期脑脊液一氧化氮、内皮素水平比较 颅脑损伤患者入院第1天脑脊液中的一氧化氮、内皮素水平达到顶点，自入院第3天开始，两者均逐渐下降，与入院时比较，差异均有统计学意义（P<0.05）

3 讨论

Yanagisawa等[2]在1988年从猪主动脉内皮细胞培养液中分离并纯化出内皮素，其是由21个氨基酸残基构成的小分子生物活性肽。当颅脑损伤发生时，尤其是重度脑损伤患者，其应激反应致使肾上腺素增加，致使血管内皮细胞释放出ET[9]，又由于颅脑损伤后颅内压增高，致使这些ET扩散到脑脊液中，引起脑灌注压降低，脑缺血、缺氧等都易刺激血管内皮细胞产生ET，其水平的增加将会刺激电压依赖性钙通道，使血管平滑肌细胞内钙超载，致使脑血管收缩痉挛，更容易加重脑损伤病情[10-13]。

在本研究中，颅脑损伤患者脑脊液内皮素水平明显高于正常参考范围，充分体现其水平与机体损伤有紧密联系，可以作为诊断颅脑是否损伤的参考依据。随着颅脑损伤病情的加重，脑脊液中内皮素水平呈上升趋势。轻度组、中度组、重度组脑脊液内皮素水平分别（50.97±0.79）、（134.13±2.27）、（140.88±3.56）pg/mL，轻度组与中度组比较、中度组与中度组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。颅脑损伤患者入院第1天脑脊液中内皮素水平达到峰值（195.96±4.38）μmol/L，自入院第3天开始逐渐下降，与入院时比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。这同样也可以作为诊断颅脑损伤患者在入院之后的病情程度的依据。

颅脑损伤患者入院第1天，脑脊液中NO含量即达到高峰，后期则有所下降，其原因可能是NO在基础释放量时具有维持脑血管张力、调节脑血流量的作用，所以在创伤早期，机体通过自身反馈增加NO的含量，以加强扩血管作用，改善局部脑血流，使病灶边缘区可逆性神经细胞损伤得以恢复，因而创伤早期NO含量的代偿性升高并非全部具有病理意义[14-15]。颅脑损伤患者常在创伤早期发生脑缺血、缺氧等应激性颅脑损伤，甚至下丘脑-垂体等系统损伤，机体此阶段的一氧化氮水平上升，实质上对颅脑损伤患者脑部血管损伤起到了一定的保护作用。轻度组、中度组、重度组脑脊液一氧化氮水平分别为（5.23±4.38）、（13.86±3.85）、（18.86±2.03）μmol/L，轻度组与中度组比较、中度组与中度组比较，差异均有统计学意义（P<0.05），表明随着颅脑损伤程度的加重，其脑脊液一氧化氮水平逐渐上升，由此可以看出颅脑损伤患者脑脊液一氧化氮水平在一定程度上反应病情程度。颅脑损伤患者入院第1天脑脊液中一氧化氮水平达到峰值（13.52±6.01）μmol/L，在入院第3天后逐渐下降，与入院时比较，差异有统计学意义（P<0.05），脑脊液中一氧化氮可以作为颅脑损伤患者病情程度的诊断指标。

综上所述，颅脑损伤患者脑脊液一氧化氮、内皮素水平测定有助于诊断颅脑损伤患者病情。

参考文献

[1]王晓，陶志宇，肖龙坡，等.颅脑损伤后血、脑脊液一氧化氮、内皮素含量变化及其临床意义[J].创伤外科杂志，2001，3（4）：258-260.

[2] Yanagisawa M，Kurihara H，Kimura S，et al.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endotheline cells[J].Nature，1988，332（6163）：441-447.

[3]许民辉，邹咏文.急性颅脑外伤后血浆、脑脊液内皮素含量变化的初步报告[J].中国神经精神疾病杂志，1995，21（3）：172-173.

[4] Noiri E.Permissive role of nitric oxide in endothel in induced migyation of endothelial cells[J].J Biol Chem，1997，272（3）：1747.

[5]张文娟，李娜，程晋成，等.急性颅脑损伤患者体液内皮素-1表达的意义[J].白求恩医学杂志，2014，12（1）：6-8.

[6] Laurence A，Amarnath S，Mariotti J，et al.STAT3 transcription factor promotes instability of nTreg cells and limits generation of iTreg cells during acute murine graft-versus-host disease[J].Immunity，2012，37（2）：209-222.

[7]张圣恭，白玉，王良荣，等.参麦注射液对外伤性脑损伤大鼠血清神经烯醇化酶、一氧化氮、内皮素水平的影响[J].中华中医药学刊，2010，28（3）：583-585.

[8] Alvarez D，Briassouli P，Clancy R M，et al.A novel role of endothelin-1 in linking Toll-like receptor 7-mediated inflammation to fibrosis in congenital heart block[J].J Biol Chem，2011，286（35）：30 444-30 454.

[9] Büyükcam F，Kaya U，Karak?l?? M E，et al.Predicting the outcome in children with head trauma：comparison of FOUR score and Glasgow Coma Scale[J].Ulus Travma Acil Cerrahi Derg，2012，18（6）：469-473.

[10]张卫，何文干，潘云，等.急性颅脑损伤后脑脊液内皮素和一氧化氮的浓度变化及意义[J].右江民族医学院学报，2004，26（5）：639-641.

[11]周任，吕健，黄卫东，等.创伤性脑血管痉挛与内皮素水平变化的关系[J].西安医科大学学报，2002，23（2）：164-166.

[12]王颜宏.重度颅脑损伤后脑血管痉挛与NO及内皮素水平的研究[D].长沙：中南大学，2013.

[13] Miller R C，Pelton J T，Huggins J P.Endothelin--from receprors to medicine[J].Tips，1993，14（2）：54-60.

[14] Suzuki M，Asahara H，Endo S，et al.Increased levels of nitrite/nitrate in the cerebrospinal fluid of patients with subarachnoid hemorrhage[J].Neurosurgical Review，1999，22（2）：96-98.

[15]王曉， 陶志宇， 肖龙坡，等. 颅脑损伤后一氧化氮、内皮素活性变化及其意义[J]. 中国现代医学杂志，2002，12（4）：94-95.

（收稿日期：2017-02-20） （本文编辑：程旭然）