新霉素氯己定软膏的质量控制研究

2017-05-27金鹏飞何笑荣吴学军

中国医药导报 2016年36期

金鹏飞　何笑荣　吴学军

[摘要] 目的建立新霉素氯己定软膏的质量控制方法。方法分别采用溴化十六烷基三甲胺（HTAB）-溴试液显色法和乙酰丙酮-对二甲氨基苯甲醛试液显色法对新霉素氯己定软膏中的醋酸氯己定和硫酸新霉素进行鉴别；采用紫外-可见分光光度法（UV）在254 nm处测定，对新霉素氯己定软膏中的醋酸氯己定进行测定；采用旋光法对新霉素氯己定软膏中的硫酸新霉素进行测定。结果鉴别和含量测定方法均有良好的专属性。醋酸氯己定的含量测定中，线性范围为5.02～15.06 mg/L，线性相关系数（r）为1.0000，精密度、重复性和12 h稳定性的RSD分别为0.03%、0.73%和0.11%，百分回收率在100.5%和101.1%之间；硫酸新霉素的含量测定中，线性范围为0.50～8.00 mg/L，r=0.9999，精密度和重复性的RSD分别为0.61%和0.44%，溶液在4 h内稳定，百分回收率在99.67%和100.7%之间。结论该方法可用于新霉素氯己定软膏的质量控制。

[关键词] 新霉素氯己定软膏；醋酸氯己定；硫酸新霉素；紫外分光光度法；旋光法；鉴别；含量测定

[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）12（c）-0153-04

[Abstract] Objective To establish a quality control method for Neomycin and Chlorhexidine Ointment. Methods Chlorhexidine Acetate in Neomycin and Chlorhexidine Ointment was indentified by colorimetric method with HTAB-Br test solution as indicator， while Neomycin Sulfate was indentified by colorimetric method with acetylacetone-p-dimethylaminobenzaldehyde test solution as indicator； Chlorhexidine Acetate in Neomycin and Chlorhexidine Ointment was determined by ultraviolet spectrophotometry （UV） at 254 nm， while Neomycin Sulfate was determined by polarmetric analysis. Results The identification and determination methods showed good specificity. For the determination of Chlorhexidine Acetate， the correlation coefficient （r） was 1.0000 in the range of 5.02-15.06 mg/L， the RSD for precision， repeatability， and 12 h stability were 0.03%， 0.73% and 0.11%， respectively， and the spiked recoveries ranged from 100.5% to 101.1%. For the determination of Neomycin Sulfate， r=0.9999 in the range of 0.50-8.00 mg/L， the RSD for precision and repeatability were 0.61% and 0.44%， respectively， the solutions were stable in 4 h， and the spiked recoveries ranged from 99.67% to 100.7%. Conclusion This method can be used as the quality control method for Neomycin and Chlorhexidine Ointment.

[Key words] Neomycin and Chlorhexidine Ointment； Chlorhexidine Acetate； Neomycin Sulfate； Ultraviolet spectrophotometry； Polarmetric analysi； Identification； Determination

新霉素氯己定软膏为北京医院（以下简称“我院”）的特色制剂，处方由硫酸新霉素、醋酸氯己定、冰片等组成，具有杀菌、消炎等作用，临床上主要应用于局部外伤感染，小面积Ⅰ、Ⅱ度烧烫伤，以及脓包疮等化脓性皮肤病。新霉素氯己定软膏在我院已有数十年的应用历史，疗效确切，但现有检验标准并未规定醋酸氯己定和硫酸新霉素的含量测定，不利于该制剂的质量控制。目前，文献对于药品和制剂中醋酸氯己定的测定方法主要有高效液相色谱法[1-9]和紫外分光光度法[10-11]，对于硫酸新霉素的测定方法主要有高效液相色谱法[12-13]、效价测定法[14]、复合物比色法[15-16]、紫外分光光度法[17]和旋光法[18]，但新霉素氯己定软膏中这两种成分的测定还未见报道。根据北京市食品药品监督管理局下发的《北京市医疗机构制剂再注册和标准整顿工作》要求，我院对新霉素氯己定软膏的鉴别和含量测定等质量控制方法进行了研究，建立的方法简便易行，现予以报道。

1 仪器与试药

Agilent 8453紫外分光光度计；WZZ-2S自动旋光仪；Mettler XP-205电子天平；BECKMAN CS-6KR离心机；Millipore超纯水处理系统。醋酸氯己定对照品（批号：100183-201003）纯度为96.2%，硫酸新霉素对照品（批号：130309-201512）效价为652 U/mg，均购自中国食品药品检定研究院；制剂生产用硫酸新霉素原料药（批号：201308017，国药准字H42022149）效价为654 U/mg，购自宜昌三峡制药有限公司。氯仿为分析纯，实验用水為超纯水。新霉素氯己定软膏由我院自制，批号：20110127、20110527、20110707。

2 方法与结果

2.1 制备工艺

2.1.1 处方硫酸新霉素10 g，醋酸氯己定2 g，冰片10 g，无水羊毛脂100 g，黄凡士林878 g。

2.1.2 制法按处方比例，取无水羊毛脂与黄凡士林置适宜的容器中加热融化（温度不宜超过60℃）；将冰片、醋酸氯己定和硫酸新霉素依次在洁净的乳钵中研细，混合后加入适量上述融化的基质，研磨至糊状，再将剩余的基质加入，研匀，分装，即得。

2.2 鉴别

2.2.1 醋酸氯己定取本品约2 g，加乙醇20 mL，置水浴中加热使基质溶解，搅拌2 min后，放冷至室温，滤过，取续滤液5 mL，加热的1%溴化十六烷基三甲胺溶液5 mL，再加溴试液与氢氧化钠试液各1 mL，即显橙黄色。

2.2.2 硫酸新霉素取本品2 g，加乙醚20 mL，振摇使基质溶解，加水2 mL，振摇提取硫酸新霉素，分取水层，加盐酸溶液（9→100）2 mL，在水浴中加热10 min，加8%氢氧化钠溶液2 mL与2%乙酰丙酮水溶液1 mL，置水浴中加热5 min，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1 mL，即显樱桃红色。

2.2.3 鉴别方法的专属性按照“2.1.2”项下规定分别制备缺醋酸新霉素的软膏和缺醋酸氯己定的软膏，分别用“2.2.1”和“2.2.2”项下方法进行鉴别，结果均呈阴性反应；而各批新霉素氯己定软膏样品用“2.2.1”和“2.2.2”项下方法进行鉴别，均呈阳性反应，表明本研究制定的鉴别方法具有专属性。

2.4 醋酸氯己定含量测定

2.4.1 对照品溶液的制备精密称取醋酸氯己定对照品25.1012 mg于100 mL容量瓶中，加水适量溶解并定容至刻度，摇匀，即为醋酸氯己定储备液。再精密量取储备液2、3、4、5、6 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，获得浓度分别为5.02、7.53、10.04、12.55、15.06 mg/L的對照品溶液。10.04 mg/L的对照品溶液作为外标法定量用的对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备取本品约40 g于烧杯中，加热至软膏基质完全融化，摇匀，趁热精密称取融化软膏样品约0.5 g于100 mL量瓶中，加热水60 mL，置于70℃水浴中，时时振摇，软膏基质完全融化5 min后取出量瓶，冷却，用水定容至刻度，摇匀，取适量于离心管中，3000 r/min离心10 min，取上清液，即得。

2.4.3 空白溶液的制备取“2.2.3”项下缺醋酸氯己定的软膏约40 g，按照“2.4.2”项下要求制备空白溶液。

2.4.4 测定方法分别取对照品溶液和供试品溶液于1 cm石英吸收池中，以水为空白，在254 nm处测定吸光度，外标法计算含量。

2.4.5 专属性对照品溶液、供试品溶液和空白溶液的紫外谱图显示，空白溶液在254 nm处无吸收，表明软膏中其他成分不干扰醋酸氯己定的测定。见图1。

2.4.6 线性考察对“2.4.1”项下不同浓度的对照品溶液分别进样，以紫外吸光度为纵坐标，质量浓度（mg/L）为横坐标作标准曲线。得到标准曲线的回归方程为Y=0.044 63X-0.014 16，线性相关系数（r）为1.0000，表明在5.02～15.06 mg/L的浓度范围内方法线性良好。

2.4.7 精密度试验对批号为20110127的一份供试品溶液连续测定6次，计算得到254 nm处吸光度的RSD（n=6）为0.03%，表明方法精密度良好。

2.4.8 稳定性试验对批号为20110127的一份供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12 h进行测定，计算得到254 nm处吸光度的RSD（n=6）为0.11%，表明12 h内方法稳定性良好。

2.4.9 重复性试验对批号20110127的制剂制备6份供试品溶液，分别测定，计算得到醋酸氯己定标示量百分含量的RSD（n=6）为0.73%，表明方法重复性良好。

2.4.10 回收率试验在100 mL容量瓶中加入“2.2.3”项下缺醋酸氯己定的软膏约0.5 g，再分别加入储备液3、4、5 mL，按照“2.4.2”项下的规定，从“加热水约60 mL……”开始操作，制备溶液。每个浓度制备3份，共9份样品，在254 nm处分别测定吸光度，以标准曲线计算得到的醋酸氯己定加标量和实际加入醋酸氯己定量的比值作为回收率。测得低、中、高浓度下的百分回收率分别为100.8%、100.5%和101.1%，RSD（n=3）分别为0.61%、0.60%和0.25%，表明本方法回收率良好。见表1。

2.5 硫酸新霉素含量测定

2.5.1 对照品溶液的制备精密称取硫酸新霉素对照品249.9979 mg于25 mL的量瓶中，加水适量溶解并定容至刻度，摇匀，即为硫酸新霉素储备液。精密量取储备液0.5、1、2、4、8 mL于10 mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，获得浓度分别为0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mg/mL的对照品溶液。2.00 mg/mL的对照品溶液作为外标法定量用的对照品溶液。

2.5.2 供试品溶液的制备精密称取本品约5.0 g于锥形瓶中，加氯仿10 mL，振摇使基质分散，加水10 mL振摇后转移至100 mL分液漏斗中，强力振摇后，静置分层，分取水层置25 mL量瓶中，同法用水提取2次，每次5 mL，合并水层，用水定容至刻度，摇匀，取适量于离心管中，3000 r/min离心10 min，取上清液，即得。

2.5.3 空白溶液的制备取“2.2.3”项下缺硫酸新霉素的软膏约5.0 g，按照“2.5.2”项下要求制备空白溶液。

2.5.4 测定方法取对照品溶液和供试品溶液分别测定旋光度，外标法计算含量。

2.5.5 专属性用旋光法对空白溶液进行测定，旋光度为0，表明样品中其他成分和辅料不干扰硫酸新霉素的测定。

2.5.6 线性考察对“2.5.1”项下不同浓度的对照品溶液分别进样，以旋光度（Y）为纵坐标，质量浓度（mg/mL）为横坐标（X）作标准曲线。得到标准曲线的回归方程为Y=0.0507X+0.0021，线性相关系数（r）为0.9999，表明在0.50～8.00 mg/mL的范围内方法线性良好。

2.5.7 精密度试验对批号为20110127的一份供试品溶液连续测定6次，计算得到旋光度的RSD（n=6）为0.61%，表明方法精密度良好。

2.5.8 稳定性试验对批号为20110127的一份供试品溶液分别于0、0.5、1、1.5、2、4 h进行测定，计算得到旋光度的RSD（n=6）为1.79%，说明4 h内方法稳定性良好。但进一步研究发现，当溶液放置超过6 h后，旋光度显著增加，因而供试品溶液制备后应在4 h内测定。

2.5.9 重复性试验对批号20110127的制剂制备6份供试品溶液，分别测定，计算得到硫酸新霉素标示量百分含量的RSD（n=6）为0.44%，表明方法重复性良好。

2.5.10 回收率试验取“2.2.3”项下缺硫酸新霉素的软膏约5.0 g，共9份，分别加入硫酸新霉素对照品25、50、100 mg，每个浓度制备3份，按照“2.5.2”项下规定制备加标溶液，以标准曲线计算得到的硫酸新霉素加标量和实际加入硫酸新霉素的量的比值作为回收率。测得低、中、高浓度下的百分回收率分别为99.67%、100.3%和100.7%，RSD（n=3）分别为1.55%、2.33%和1.24%，表明本方法回收率良好。见表2。

2.6 样品测定

对批号分别为20110127、20110527、20110707的新霉素氯己定软膏进行醋酸氯己定和硫酸新霉素的含量测定。每批样品测定2份，取平均值作为含量。测得醋酸氯己定的标示量百分含量分别为98.13%、99.02%和100.3%；硫酸新霉素的标示量百分含量分别为98.88%、106.2%和99.57%。

3 讨论

3.1 鉴别方法的确定

本方法中醋酸氯己定的鉴别参照了《中国药典》项下醋酸氯己定软膏的鉴别方法[19]1543，硫酸新霉素的鉴别参照了《中国药典》项下硫酸新霉素原料药的鉴别方法[19]1363-1364，只是由于基質不同，前处理方法略有不同。

3.2 醋酸氯己定含量测定方法的确定

新霉素氯己定软膏中除了硫酸新霉素和醋酸氯己定能溶于水外，其他成分均不溶于水，用水进行提取可有效去除其他成分的干扰。而同为水溶性的硫酸新霉素在254 nm处无吸收，因而也不干扰测定。水浴加热使软膏基质完全融化，可使醋酸氯己定完全溶出，冷却后油性基质吸附在容器内壁，不影响定容。此外，研究还发现用滤纸或尼龙滤膜过滤时，醋酸氯己定均会被大量吸附，导致方法回收率和含量偏低，最终确定使用3000 r/min离心10 min，取上清液进行分析。《中国药典》醋酸氯己定软膏的含量测定也用紫外-可见分光光度法[1]，但需要用到多种溶剂并进行液液萃取，而新霉素氯己定软膏的基质比醋酸氯己定软膏更为复杂，但本文建立的紫外-可见分光光度法较《中国药典》方法更为简单。

3.3 硫酸新霉素含量测定方法的确定

新霉素氯己定软膏中硫酸新霉素提取过程中，利用硫酸新霉素易溶于水的特性，用水提取硫酸新霉素，结果由于基质中无水羊毛脂的干扰，样品回收率仅能达到85%。分析可能是基质包裹造成回收率偏低。在提取过程加入少量氯仿溶液可促使软膏基质充分溶散，提高方法的回收率。同时发现滤纸或尼龙滤膜过滤也会少量吸附硫酸新霉素，导致含量降低，因而采用3000 r/min离心10 min的方法制备溶液。

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