胃炎片的质量标准研究＊

孙旭，刘云云，马晓昱，马群，王剑，陈瑶

药学

胃炎片的质量标准研究＊

孙旭，刘云云，马晓昱，马群，王剑，陈瑶＊

目的探讨胃炎片质量标准的控制方法。方法采用TLC对胃炎片处方中的药材成分白芍、原儿茶醛、丹参、延胡索、白芷进行定性鉴别，并用HPLC对胃炎片中的有效成分丹参素钠的含量进行测定。结果胃炎片中白芍、原儿茶醛、丹参、延胡索、白芷的供试品薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；丹参素钠含量在10.17～162.77 μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率98.8%（n=6），精密度RSD=0.15%。结论该方法结果准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。

胃炎片；质量标准；TLC；HPLC

胃炎片是海军青岛第二疗养院经多年临床研究研制出的由丹参、白芍、白芷、延胡索和当归等中药组成的纯中药制剂，具有行气导滞，散寒化结的作用，用于脘腹疼痛，食积呕吐，慢性胃炎，消化性溃疡等症的治疗，取得良好的治疗效果。为了进一步完善该品种的质量标准，配合医疗机构制剂标准提高，笔者对该制剂的质量标准进行修订，采用TLC法对处方中白芍、原儿茶醛、丹参、延胡索、白芷等进行定性鉴别，采用HPLC法测定丹参中丹参素钠的含量，结果表明本法结果准确，重现性好，能有效控制该制剂质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器薄层层析硅胶G、硅胶G254（青岛海洋化工集团）；ZF-6型三用紫外分析仪；METTLER AE240电子天平；Agilent 1100高效液相色谱仪；AS-B超声波清洗仪；HH-8电热恒温水浴锅；HGB电热恒温干燥箱。

1.2 试药对照药材白芷（批号120945-201309）、丹参（批号120923-201414）；对照品芍药苷（批号110736-201337）、原儿茶醛（批号110810-201007）、延胡索乙素（批号110726-201414）、丹参素钠（批号110855-201311所，纯度98.1%），上述对照品和对照药材均购自中国食品药品检定所；胃炎片（批号20130401、20130902、20140101）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 白芍的鉴别［1，2］取本品10片，研细，加乙醇30 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再取不含白芍的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图1。

图1 白芍的TLC图

2.1.2 原儿茶醛的鉴别［1，2］取本品10片，加水50 ml使溶解，用盐酸调节pH值至2.0～3.0，用乙醚振摇提取2次，35 ml/次，合并乙醚液，置水浴蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取不含原儿茶醛的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶6∶1.2）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯（254 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上呈相同的荧光斑点。结果见图2。

图2 原儿茶醛的TLC图

2.1.3 丹参的鉴别［1，2］取本品10片，研细，加乙醚振荡提取2次，20 ml/次，滤过，滤液低温挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1.0 g，按供试品溶液项下方法制成对照药材溶液。再取不含丹参的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。

图3 丹参的TLC图

2.1.4 延胡索的鉴别［1，2］取本品10片，加水25 ml使溶解，用盐酸调节pH值至2.0，滤过，滤液用浓氨试液调节pH至10～11，用乙醚振摇提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含延胡索的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述3种溶液各5～10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-二氯甲烷-甲醇（12∶8∶1）为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和20 min，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏后，置紫外灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图4。

图4 延胡索的TLC图

2.1.5 白芷的鉴别［1，2］取本品10片，研细，加乙醚振摇提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，滤过，乙醚提取液低温挥干，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取白芷对照药材0.5 g，加乙醚10 ml，按供试品溶液项下方法制成对照药材溶液。取不含白芷的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述3种溶液各5～10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图5。

图5 白芷的TLC图

2.2 丹参素钠的含量测定［2-4］

2.2.1 色谱条件及系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（2∶98）为流动相；柱温为25℃；流速1.0 ml/min，检测波长280 nm。理论板数按丹参素钠峰计算应不低于2000。阴性对照、对照品以及供试品的HPLC色谱图见图6、7、8。

图6 丹参素钠对照品HPLC色谱图

图7 胃炎片样品HPLC色谱图

图8 阴性对照品

2.2.2 对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成浓度为1.017 mg/ml的对照品溶液（对照品储备液），精密量取1 ml置25 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得浓度为40.69 μg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备精密称取胃炎片样品3.0 g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25 ml精密称定，超声处理30 min，放冷，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，静置，滤过，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备取缺制丹参的样品，按“2.2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液。

2.2.5 标准曲线的绘制取“2.2.2”项下丹参素钠对照品贮备液适量，用50%甲醇稀释，得系列标准溶液。含丹参素钠分别为10.17、20.35、40.69、81.38、162.77 μg/ml，分别取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积值为纵坐标（Y），浓度（μg/ml）为横坐标（X）绘制标准曲线。计算得回归方程，Y= 13.668X+5.8019，R2=0.9998。实验结果表明丹参素在10.17～162.77 μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.6 精密度试验精密吸取“2.2.5”项下40.69 μg/ ml对照品溶液20 μl，按“2.2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积值，计算RSD为0.15%。说明仪器的精密度良好。

2.2.7 重现性试验取胃炎片（批号20130902），按“2.2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，分别进样20 μl，记录丹参素钠峰面积值，计算RSD（n=6）为1.64%，表明方法重复性良好。

2.2.8 稳定性试验取胃炎片（批号20130902），按“2.2.3”项下方法配制供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h进样20 μl，按“2.2.1”项下色谱条件，测定丹参素钠的峰面积，计算RSD为1.52%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.2.9 加样回收率试验取已知含量的样品（批号20130902）6份，在线性范周内分别加入一定量的丹参素钠对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，结果详见表1。结果说明本法回收率良好。

表1 胃炎片中丹参素钠加样回收率试验测定结果

2.2.10 样品含量测定按“2.2.1”项下色谱条件，分别精密吸取“2.2.2”“2.2.3”项下溶液各20 μl，照2015年版《中国药典》四部通则0512，进样3批样品，每批样品测定2份，以外标法计算各个样品中丹参素钠的含量，结果详见表2。

表2 胃炎片中丹参素钠含量测定结果（n=2）

3 讨论

3.1 TLC鉴别该文通过实验制定了丹参、白芍、白芷和延胡索的TLC鉴别方法，该方法特征斑点明显色谱分离清晰，可作为胃炎片中的丹参、白芍、白芷和延胡索专属性鉴别。

3.2 样品溶液的制备该实验在前处理过程中进行了不同提取溶剂的比较［1，3-6］，如酸处理-乙酸乙酯萃取或50%甲醇回流提取，结果表明采用本品研碎直接加50%甲醇超声30 min提取制备丹参素钠含量测定样品溶液，可有效提取所含丹参素钠；该方法简便、可靠、重现性好，缩短了检验流程，避免了回流提取萃取分离的烦琐操作，节省了人力物力。

3.3 流动相选择该实验亦比较了不同比例流动相对峰型、分离度的影响，如甲醇-1%HAc（2∶98），甲醇-1%HAc（4∶96），甲醇-1%HAc（6∶94），最终确定流动相为甲醇-1%HAc（2∶98）时丹参素钠峰型及分离度较好。

该实验建立的含量测定方法经方法学研究结果表明，该方法简便、可行、快捷，专属性强，准确度、灵敏度及重现性好，可用于胃炎片的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］．2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：488-1297．

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部［S］．2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：57-61．

［3］李海燕，李振国，宋汉敏，等.HPLC测定冠心生脉口服液中丹参素钠的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（12）：78-79.

［4］周修森，方永凯.HPLC法测定柴丹舒利胶囊中丹参素的含量［J］.中国科技，2012，25（10）：25-27.

［5］李艳丽，张虹，陈湘玲，等.高效液相色谱法测定止眩通脉胶囊中丹参素钠的含量［J］.山西医科大学学报，2012，11（11）：823-834.

［6］胡晓琴，李进，陈涛，等.HPLC法测定新生脉散片中丹参素钠的含量［J］.天津中医药，2012，4（2）：181-183.

［2016－10－23收稿，2016－11－21修回］［本文编辑：刘一洋］

Study on the quality standard for Weiyan tablets

SUN Xü①，LIU Yun-yun，MA Xiao-yu，et al.
①Institute for Drug and Instrument Control of Shenyang Joint Service Support Center，Jinan，Shandong 250022，China

ObjectiveTo establish a control method of the quality standard for Weiyan tablets.Methods Radixpaeoniaealba，Protocatechuicaldehyde，Salviaemiltiorrhizae，Corydalistuber，Radixangelicaeinthis prescription were identified by TLC；and the content of Danshensu-sodium was determined by HPLC．ResultsThe spots in the TLC of Radix paeoniae alba，Protocatechuic aldehyde，Salviae miltiorrhizae，Corydalis tuber，Radix angelicae were in the same color with those in the chromatograms of control articles；the calibration curve of Danshensu-sodium was linear over the range of 10.17-162.77 μg/ml（r=0.9998），the average recovery rate was 98.8%（n=6）.ConclusionThe above method is easy，accurate and reproducible，which can be used effectively for the quality control of this preparation．

Weiyan tablets；Quality standard；TLC；HPLC

R975.1

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.05.024

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题计划（14ZJZ01-2）

250022山东济南，沈阳联勤保障中心药品仪器检验所（孙旭，刘云云，马晓昱，陈瑶）；266100山东青岛，海军青岛第二疗养院（马群，王剑）

陈瑶，Email：chenyao1975@163.com