VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌组织中表达及临床意义

金光虎，夏海波，高志明，包国昌，李海峰

（赤峰学院附属医院，内蒙古 赤峰 024000）

VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌组织中表达及临床意义

金光虎，夏海波，高志明，包国昌，李海峰

（赤峰学院附属医院，内蒙古 赤峰 024000）

目的:观察VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌中的表达，并探讨其与临床病理特征的关系.方法:应用免疫组化SP法检测85份膀胱癌组织标本(其中初发患者标本52份，复发患者标本33份)和13份正常膀胱组织标本VEGF、Survivin和COX-2的表达，并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系.结果:膀胱癌组织中VEGF、Survivin和COX-2的表达明显高于正常膀胱组织(P＜0.01).VEGF、Survivin和COX-2阳性表达率在不同年龄、性别、肿瘤大小及数目的患者之间无统计学差异(P＞0.05),三者在膀胱癌复发患者与初发患者中的表达差异有统计学意义(P＜0.05).在膀胱癌组织中VEGF、Survivin和COX-2蛋白表达具有正相关性.结论:VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌组织中出现特异性表达上调，三个指标联合检测更有助于膀胱移行细胞癌临床分期的判断及指导预后.

膀胱癌；VEGF；Survivin；COX-2；免疫组织化学

膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐渐上涨趋势，其生物学行为变化多端，术后肿瘤复发率高，因此努力寻找对膀胱癌诊断敏感性高、特异性强的肿瘤标记物是当前研究的重要方向.近几年来对膀胱癌发生机制、进展的研究发现，其与基因突变、新生血管形成等密切相关.本研究采用免疫组化方法检测膀胱癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）、生存素（Survivin）和环氧化酶－2（COX-2）的表达，并结合膀胱癌病理分级、临床分期，分析它们之间的相关性及其临床意义，现报告如下.

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择赤峰学院附属医院泌尿外科2012年12月-2015年12月手术切除并经病理证实、资料完整的85份膀胱癌患者的组织标本和13份正常膀胱组织标本，患者男58例、女27例，年龄24-81岁、平均61.3岁.临床分期根据国际抗癌协会标准:Ta-T1期为非肌层浸润型，T2-T4期为浸润型.病理分级根据世界卫生组织分类标准:低分级癌（I-II）33例，高分级癌（III）52例.正常膀胱标本，8份取自男性TURP时的患者正常膀胱黏膜，5例取自女性经尿道膀胱颈电切术时的正常膀胱黏膜.

1.2 试剂与方法

采用免疫组织化学染色的方法，对患者的病理切片进行VEGF、Survivin和COX-2化学染色，VEGF鼠抗人多克隆抗体购自美国Zymed公司，兔抗人Survivin多克隆抗体购置美国Santa Cruz公司，COX-2兔抗人单克隆抗体购自美国Spring公司.取膀胱癌标本和正常膀胱粘膜组织标本进行固定，经70%乙醇30 min、80%乙醇30min、90%乙醇30min 2次、95%乙醇30min 2次、100%乙醇30min 2次、二甲苯透明30min 2次、55℃石蜡中30min 2次后用铜制模具包埋组织块.此后按说明书步骤操作.选择实验组和对照组的阳性和阴性组织进行100×和400×的显微照相.结果判定以细胞核／质呈清晰棕黄色或紫色染色为阳性.根据阳性细胞比例分为以下4级：阳性细胞数＜10%（-），阳性细胞数10%～25%（+），阳性细胞数26%～50%（++），阳性细胞数＞51%（+++）.选择典型部位，随意取5个高倍视野，计数100个细胞，以平均数作为最终判定[1].

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0统计软件进行数据处理，计数资料之间的比较采用χ2检验；计量资料以x±s表示，相关性分析采用Spearman相关，以P＜0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 不同组织 VEGF、Survivin和 COX-2的表达比较VEGF、Survivin和COX-2在13例正常膀胱组织中表达分别为8.24%(7/85)、5.89%(5/85)和7.06%(6/85)，85例膀胱癌组织中表达分别为90.59%（77/85）、71.76%(61/85)和89.41%（76/85），正常膀胱组织与膀胱癌组织的三指标比较，P值均＜0.01.

2.2 VEGF、Survivin和COX-2的阳性表达率与膀胱癌临床病理特征的关系（见表1）.

3 讨论

近几年随着对肿瘤分子机制认识的加深，用于预测膀胱恶性肿瘤的生物学行为的许多肿瘤标记物相继被发现. VEGF是一种重要的血管生成调控因子，其与受体结合后会导致血管内皮细胞的分裂、增殖和迁移，促进肿瘤新生血管形成，其过度表达往往与肿瘤细胞的生长活跃程度密切相关[2、3].本研究结果显示肌层浸润性膀胱癌中VEGF的表达率比非肌层浸润性高，在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ级膀胱癌中的表达率亦有显著差异，有统计学意义；我们发现癌细胞侵犯脉管的膀胱癌组织中VEGF表达率显著高于脉管未侵犯，具有统计学意义，提示VEGF在肿瘤的发展、浸润、迁移中起着重要作用.P53与VEGF表达强度的相关性分析显示两者呈正相关，这可能与p53基因突变可以上调促进血管增生的内皮生长因子，从而调控肿瘤血管生长有关[4、5].

表1 VEGF、Survivin和COX-2的表达与膀胱癌临床病理特征的关系［例（%）］

survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一，其能够调节细胞周期，抑制细胞的凋亡，是迄今为止发现的最强的抑制因子，随着大家对他了解的深入，survivin被作为一种恶性肿瘤诊断的标志物，并且其在多种恶性肿瘤中的高表达已成为生存期较短的独立的预后因子[6]，生存素因其在人类恶性肿瘤中过表达、高选择性分布、特殊的抗凋亡作用等特性，特别是在肿瘤治疗方面的潜在价值使其倍受关注.本研究采用免疫组化SP法检测85份膀胱癌和13份正常膀胱组织中的Survivin的表达，发现其在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织，有显著统计学差异.Survivin的表达与膀胱癌患者的性别、年龄及肿瘤的大小、数目无明显相关.但随着临床分级及病理分级的增加，Survivin蛋白表达率及表达强度均增加，Survivin 蛋白在初发者中的异常表达率低于复发者.提示Survivin高表达是非肌层浸润性膀胱癌复发的高危因素，可以作为判断膀胱癌进展的指标.

COX-2是前列腺COX-2素生物合成中的限速酶，多种因子可刺激COX-2的表达，其对肿瘤的发生、发展、侵袭及转移有促进作用.多数研究认为COX-2和VEGF的表达存在密切联系，其可上调VEGF-C的表达从而促肿瘤新生血管生成[7]，我们的结果亦提示COX-2与VEGF的表达强度呈高度正相关.本研究结果显示肌层浸润性膀胱癌中COX-2的表达率比非肌层浸润性高，在Ⅲ级膀胱癌中的表达率比Ⅰ～Ⅱ级表达率高，有显著统计学差异；我们发现膀胱癌组织中COX-2的表达率随着肿瘤分期、分级的升高而升高，但是无统计学差异.

综上所述，VEGF、Survivin和COX-2在膀胱癌组织中出现特异性表达上调，三者的过度表达对膀胱癌生长、浸润起着协同作用，三个指标联合检测更有助于膀胱移行细胞癌临床分期的判断及指导预后.

〔1〕郭雪涛,崔明玉.P53、P16、TGF、EGFR、VEGF在膀胱移形细胞癌组织中的表达及意义 [J].现代泌尿外科杂志，2007,12(4):225-228.

〔2〕Perrot-applanat M,VEGF is forms[J].Cell Adh Migr, 2012.6(6):526-527.

〔3〕Biselli-chicote PM,Oliveira AR,Pavarino ec,et al.VEGF gene alternative splicing;pro and anti-angiogenic isoforms in cancer[J].Cancer Res Clin Oncol,2012,138(3);363-370.

〔4〕Rennel E,Waine E,Guan H,et al.the endogenous antiangiogenic VEGF isoform,VEGF isoform,VEGF 165b inhibits human tumour growth in mice[J].Br J cancer, 2008,98(7):1250-1257.

〔5〕Bates Do,Cui TG,Doughty JM,et al.VEGF 165b,an inhibitory splice variantofvascularendothelialgrowth factoris down-regulated in renal cell carcinoma[J].Cancer Res,2002,62(14);4123-4131.

〔6〕Schultz IJ,Kiemeney LA,Witjes JA,et al.Survivin mRNA expression is elevated in malignant urothelial cell carcinomas and predicts time to recurrence[J].AnticancerRes, 2003.23(4):3327-3331.

〔7〕Leagh KM,Ornberg RL,Wang Y,et al.Cyclooxygenase-2 inhibition by celecoxib reduces proliferation and induces apotosis in angiogenic endotherlial cells in vivo[J].Cancer Res,2002,62(3):625-631.

R69

A

1673-260X（2017）02-0082-02

2016-12-23

内蒙古自然科学基金(2013MS1114)内蒙古高等学校创新平台培育项目