高效液相色谱法测定多维矿物质片中维生素C的含量

陈静，魏晓亮，陈雅琴



高效液相色谱法测定多维矿物质片中维生素C的含量

陈静，魏晓亮，陈雅琴

（东北制药集团股份有限公司，辽宁 沈阳 110027）

目的：建立多维矿物质片中维生素C的高效液相色谱检测方法。方法：色谱柱为Thermo ODS-2 HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.1%草酸溶液-甲醇（98∶2），流速为1.0 mL·min-1，柱温为25 ℃，进样量为20 μL，检测波长为254 nm。结果：维生素C在6.91～27.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好（=1），平均回收率为99.0%，RSD为1.31%（=9）。结论：该方法操作简单，精密度好，准确度高，可用于多维矿物质片中维生素C的含量测定。

多维矿物质片；维生素C；含量测定；高效液相色谱法

维生素C，又称抗坏血酸，是人体必须的维生素之一。在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶；其来源于各类新鲜蔬果及药品。目前，维生素C已在感染及炎症、防治肿瘤、心血管等疾病中有广泛的应用[1,2]。因此，维生素 C 的含量成为评价食品营养价值和药品质量的重要标准之一。

文献报道的食品与药品中维生素 C的检测方法主要包括滴定分析法[3]、光度法[4]、电化学法[5]、液相色谱法[6]以及原子吸收间接法[7]等。对于成分较复杂的制剂来说，常见的滴定分析法存在滴定终点判定困难的弊端，其它方法也存在专属性差、或所用分析仪器应用普及性不高的缺点。而液相色谱法较其它方法有着灵敏度高，专属性强等优势。本文建立了一种高效液相色谱法，可以快速、准确的测定多维矿物质片中维生素C的含量。

1 仪器与试药

Waters E2695高效液相色谱仪（沃特世公司）；MSU125P-100DU型电子天平（赛多利斯公司）；DL-820B超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）。维生素 C对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号：100425-201504）；维生素C原粉（东北制药集团股份有限公司，含量为99.9%）；多维矿物质片（东北制药集团股份有限公司研究院， 批号为20150619、20150820、20150821）；爱乐维（外购，批号为ARV316）；其他成分与辅料均由东北制药集团股份有限公司提供；水为超纯水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo ODS-2 HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1% 草酸溶液-甲醇（98∶2）；流速：1.0 mL∶min-1；检测波长：254 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取维生素C对照品13 mg， 置100 ml量瓶中，加10 g·L-1草酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取多维矿物质片（批号为20150619）20片，研细，精密称取适量（约相当于维生素C 65.6 mg），置250 mL量瓶中，加10 g·L-1草酸溶液适量，超声2 min，冷却至室温，用10 g·L-1草酸溶液稀释至刻度，过滤，精密量取续滤液5.0 mL置100 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

取除维生素C的其余原辅料，按处方比例混合，照2.2.2项下方法操作，制备阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱条件各进样 20μL，记录色谱图。结果表明，阴性对照溶液主峰位置无干扰，见图1。

图1 3种溶液的HPLC色谱图

A. 对照品溶液； B. 供试品溶液； C. 阴性对照溶液

2.4 线性关系考察

精密称取维生素C对照品适量，加10 g·L-1草酸溶液制成每1 mL中含108 μg的溶液，作为贮备液。分别精密量取贮备液3.2 mL置50 mL量瓶、1.0 mL置10 mL量瓶、6.5 mL置50 mL量瓶、2.0 mL置10 mL量瓶、2.5 mL置10 mL量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释成不同浓度的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以浓度（）为横坐标，色谱峰面积（）为纵坐标，得回归方程=47006+2139，相关系数=1。结果表明维生素在6.91～27.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积。计算维生素C峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.09%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批多维矿物质片（批号为20150619）20片，研细，称取6份，制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，记录色谱图，测定维生素C的标示百分含量。6份样品的平均含量为97.8%，RSD为1.62%，表明方法重复性良好。

2.7 回收率实验

取不含维生素C的其它成分及辅料9份，分别置于9个250 mL量瓶中，精密称取维生素C原粉（含量：99.9%）52.5 mg、65.6 mg、78.7 mg各3份，置于上述250 mL量瓶中，按“2.2.2”项下配制成高、中、低3个浓度样品，每个浓度3份样品，测定维生素C的含量，计算回收率，结果平均回收率为99.0%，RSD=1.31%。见表1。

表1 维生素C回收率测定结果

2.8 稳定性试验

按“2.2.2”项下方法，制备1份供试品溶液，分别于配制后0，1，2，3，4 h进样，测定维生素C峰面积的RSD为0.89%，表明供试品溶液在4 h内稳定。

2.9 耐用性试验

通过适当改变流动相比例，改变流动相不同盐浓度，选用2种不同型号的液相色谱仪（日立L-2400及沃特世E2695），考察方法的耐用性。结果表明，供试品中维生素C的含量在不同考察条件下无明显差别，方法耐用性良好。

2.10 检测限与定量限

取维生素C对照品溶液，逐级稀释，得本法的检测限为0.041 µg·mL-1；定量限为0.138 µg·mL-1。

2.11 样品含量测定

取3批多维矿物质片（批号为20150619、20150820、20150821）及1批爱乐维（批号为ARV316），按“2.2.2”项下方法，制备供试品溶液，分别进样测定维生素C含量。结果3批多维矿物质片及1批爱乐维中维生素C的含量分别为标示量的98.5%，96.3%，95.4%，124.5%。

3 讨论

多维矿物质片中成分比较复杂，特别是含有多种矿物质，金属离子在样品配制及测定中易起到催化作用，使得维生素C的稳定性变差，导致测定结果不准确。本文考察了水、醋酸溶液[8]、草酸溶液[9]作为提取溶剂，发现采用草酸溶液作为溶剂，操作简单，方法回收率高，维生素C的溶液稳定性良好。

通过方法学验证，该方法操作简单，专属性、重现性、精密度良好，方法准确、耐用，试用于成分复杂的多维矿物质片中维生素C的含量测定。

［1］李志惠，宋海亭. 大剂量维生素C粉针治疗社区获得性下呼吸道感染[J]. 现代中西医结合杂志，2006,15（3）：323-324.

［2］荆晓娟，杜冀晖，贺克俭. 维生素C在肿瘤治疗中的作用研究进展[J]. 医学综述，2010, 16（4）：554-557.

［3］王元秀, 庄海燕. 微量滴定法测定猕猴桃中维生素C的含量[J]. 济南大学学报, 2001, 15: 374-378.

［4］陈焕文, 宋庆宇, 刘宏伟，等. 测定抗坏血酸的亚甲蓝褪色光度法[J]. 分析测试学报, 2001, 20(2): 55-57.

［5］Y. P. Wen, X. M. Duan, J. K. Xu, et al. One-step electrosynthesis of poly(3,4-ethylenedioxy-thiophene)-ethylsulfate matrix for fabricating vitamin C electrochemical biosensor and its determination in commercial juices. Chinese Journal of Polymer Science, 2012, 30(3): 460-469.

［6］李荣玮，何晓艳，潘振宇. HPLC法测定小儿复方赖氨酸颗粒中维生素C的含量[J]. 中国药师，2016，19（8）：1588-1589.

［7］刘国胜, 张玉铭, 王珏云，等. 用原子吸收间接法测定水果蔬菜和果汁饮料中的维生素C[J]. 河北大学学报, 1999, 19(3): 260-263.

［8］中国药典[S]. 2015年版. 二部. 1237.

［9］中华人民共和国国家标准[S]. GB/T 5009.86-2003. 第二法．

Content Determination of Vitamin C in Multivitamin Mineral Tablets by HPLC

，，

（Northeast Pharmaceutical Group Co.,Ltd., Liaoning Shenyang 110027, China）

Objective: To establish a method for the content determination of vitamin C in multivitamin mineral tablets by HPLC. Methods: The content determination was performed on a Thermo ODS-2 HYPERSIL（250mm×4.6mm，5μm）column with 0.1% oxalic acid solution-methanol（98:2）as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was 25℃. The injection volume was 20μL and the detection wavelength was 254nm. Results: The linear range of vitamin C was 6.91～27.0 μg·mL-1（=1）, and the average sampling recovery was 99.0% with RSD of 1.31%(=9). Conclusion: The method is simple, precise and accurate, and it can be used for the determination of vitamin C in multivitamin mineral tablets.

multivitamin mineral tablets; vitamin C; content determination; HPLC

O 657

A

1004-0935（2017）10-1039-03

2017-07-24

陈静（1984-），女，工程师，硕士学位，辽宁省沈阳市人，2010年毕业于沈阳药科大学药物分析学专业，研究方向：药物分析。