电针肺与大肠经俞募穴改善急性胰腺炎大鼠胃肠动力减轻肺损伤的机理*

袁 玲，吴 俊，苏 杭，刘贞艳，李思成，李 娟，唐文富，万美华△

(1.四川大学华西医院，四川 成都 610041；2.成都中医药大学，四川 成都 610075;3.湖北省中西医结合医院，湖北 武汉 430015)

电针肺与大肠经俞募穴改善急性胰腺炎大鼠胃肠动力减轻肺损伤的机理*

袁 玲1,2，吴 俊1，苏 杭2，刘贞艳2，李思成3，李 娟2，唐文富1，万美华1△

(1.四川大学华西医院，四川 成都 610041；2.成都中医药大学，四川 成都 610075;3.湖北省中西医结合医院，湖北 武汉 430015)

目的：研究大承气汤作为基础治疗时，电针肺与大肠经俞募穴改善急性胰腺炎(AP)大鼠胃肠动力、减轻肺损伤的疗效及机理。方法：将48只大鼠随机分入假手术组(SG)、AP模型组 (MG)、大承气汤组(A)、大承气汤+俞穴针刺组(B)、大承气汤+募穴针刺组(C)和大承气汤+俞募穴针刺组(D)，每组8只。实验组大鼠均采用逆行性胆胰管注射法注入3.5%牛黄胆酸钠建立AP模型，SG组注入生理盐水。造模2 h后开始分别对B、C、D组大鼠进行3次针刺，每次间隔7 h留针40 min。造模24 h后大承气汤治疗组大鼠灌胃,给药12 h后处死大鼠，采集心血、肺和胰腺组织，计算肠推进率，取肺、胰腺做病理切片并进行病理评分，用酶联免疫法检测血清CCK、VIP、MTL及肺组织MPO、MDA。结果：与A组比较，C组血清CCK、MTL明显增加，VIP明显减少，肠推进率增加(P<0.05)，肺组织MPO、MDA及病理评分均明显降低(P<0.05)；B组仅CCK增加较明显(P<0.05)，肺组织MPO及肺组织病理评分明显降低(P<0.05)；D组仅MTL增加较明显(P<0.05)，其它各项指标均无明显差异。结论：电针肺与大肠经俞募穴能通过调整血清CCK、MTL、VIP改善胃肠动力，减少肺组织MPO、MDA,减轻AP大鼠肺损伤，且募穴疗效更优。

电针;肺经；大肠经;俞募穴;急性胰腺炎;胃肠动力;肺损伤

急性胰腺炎是胰蛋白酶被激活后引起的胰腺及胰外器官的炎症反应过程[1-2]。重症急性胰腺炎发生时常常同时伴发胃肠功能紊乱和呼吸窘迫[3-4]。研究表明2009年美国急性胰腺炎住院治疗人数超过274000人次，其中15%～30%重症急性胰腺炎患者死亡[5]，急性胰腺炎早期病死率占总病死率的53.7%[6]，急性呼吸衰竭是其主要死亡原因之一[7-8]。所以如何减轻肺损伤防止急性呼吸衰竭是急性胰腺炎治疗的难点与热点。近年研究发现急性胰腺炎胃肠功能紊乱会引起腹内压升高，腹内压升高又会进一步加重肺损伤甚至发生急性呼吸衰竭，导致患者死亡[9-11]。

《灵枢·经脉》曰：“肺手太阴之脉，起于中焦，下络大肠。”“大肠手阳明之脉，……,下入缺盆，络肺，下膈，属大肠。”中医理论中肺与大肠关系密切，互为表里，腑病及脏，腑气不通则肺气不降[12-14]。俞募穴最早记载于《内经》，并指出“阴病治阳”“阳病治阴”[15]。中西医结合治疗急性胰腺炎疗效显著[16]，针灸作为国医精粹在急性胰腺炎治疗方面前景广阔。目前研究证实具有通腑泻下功效的大承气汤可以通过降低腹内压改善急性胰腺炎肺损伤[17]。因此，基于肺与大肠的表里关系及俞募穴的特殊功效，笔者将大承气汤作为基础治疗来探究电针肺与大肠经俞募穴是否能通过改善急性胰腺炎胃肠动力减轻肺损伤及其机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性SD大鼠，体质量(220±15)g,48只，购于实验动物中心,四川大学华西医学中心，按照四川大学实验室动物饲养和处理指南以及动物伦理委员会指南对大鼠喂养和适应1周，实验开始前24 h禁食。

1.2 大承气汤的制备

喷雾干燥的大承气汤颗粒(大黄、厚朴、枳实、芒硝的比例为12∶24∶12∶9)从成都绿色草药制药有限公司购买。使用前用蒸馏水配制成1 g/ml的溶液。按10 g/kg的剂量灌胃备用。

1.3 主要试剂及仪器

1.3.1 试剂 3.5%牛黄胆酸钠(美国Sigma公司)，10%水合氯醛(成都市科龙化工试剂厂)，亚甲蓝注射液(济川药业集团股份有限公司)，MPO、MDA等试剂(上海永创医疗器械有限公司)。

1.3.2 仪器 微量泵(Microinfusion pump WZS-50F6，浙江大学医学仪器有限公司)，SDZ-II型电针治疗仪(上海华谊医用仪器厂)，ELISA仪器(永创-SM600，上海永创医疗器械有限公司)。

1.4 穴位定位

肺俞：在背部，当第3胸椎棘突下，旁开1.5寸(约5 mm)。大肠俞：在腰部，当第4腰椎棘突下，旁开1.5寸(约5 mm)。中府：在胸前壁的外上方，肩胛骨喙突下方，平第1肋间隙，距前正中线6寸。天枢：在腹中部，平肚脐，旁开2寸(约5 mm)[18-19]。

1.5 动物造模和治疗

1.5.1 动物造模 将48只SD大鼠随机分为假手术组(SG)、模型组 (MG)、大承气汤组(A)、大承气汤+俞穴针刺组(B)、大承气汤+募穴针刺组(C)、大承气汤+俞募穴针刺组(D)。术前24 h禁食。采用逆行性胆胰管注射造模法[20]，微量泵以0.1 ml/min的速度向除SG组外大鼠的胆胰管内泵入3.5%的牛黄胆酸钠，向SG组大鼠胆胰管内泵入同等剂量的生理盐水，泵入剂量均按1 ml/kg·BW计算。

1.5.2 电针治疗和给药 造模完成2 h后，开始针刺。首先固定大鼠，按大鼠相应的取穴定位图取穴，消毒。然后用15 mm毫针直刺进针5 mm，捻转得气后接通电针仪，选用疏密波，强度设置为“1”档。B、C组大鼠在固定穴位留针40 min，D组大鼠腹背部各留针20 min，SG、MG、A组大鼠均按相同的要求固定40 min。以上流程24 h内重复3次，每次间隔7 h。电针针刺结束后，除MG组外，其他组大鼠均用1 g/ml的大承气汤，按10 g/kg·BW计算灌胃剂量。

1.6 标本采集、数据测定和病理评分

给药后禁食12 h处死大鼠，处死前0.5 h行2%葡聚糖兰2000(0.4 ml)灌胃以测定肠推进率(葡聚糖兰2000蓝染远端至幽门括约肌距离/幽门括约肌至小肠末端距离×100%)[21]，取心血、肺和胰腺组织，对肺、胰腺进行病理评分[22]，并用酶联免疫法测定血清CCK、VIP、MTL和肺组织MPO、MDA。

1.7 数据分析

2 实验结果

2.1 各组肺、胰腺的病理损伤比较

SG组胰腺轻度水肿，无明显出血和坏死的腺泡细胞，而MG组胰腺表现出间质水肿、大量炎性细胞浸润、腺泡细胞空泡以及出血坏死等AP典型征象。见封三彩图1。SG组肺组织结构完整，无明显水肿、炎性浸润及出血坏死表现，MG组肺组织可见明显出血、水肿及炎性细胞浸润，A组肺组织水肿、炎性细胞浸润明显，无明显出血；经针刺治疗后，B、C、D组肺组织水肿、炎性细胞浸润均较A组减轻，其中C组减轻最明显。见封三彩图2。病理评分上，SG组及各治疗组肺组织病理评分均明显低于MG组(P<0.05)；B、C、D组肺组织病理评分均低于A组，其中B、C组与A组差异有统计学意义(P<0.05)。见图3。结果表明针刺肺与大肠经俞募穴能够减轻AP肺损伤且募穴更优。

图3 各组大鼠肺、胰腺组织病理评分比较 注：与MG组比较，*P<0.05；与A组比较，#P<0.05

2.2 各组肺组织MPO、MDA比较

与A组比较，针刺后B、C、D组肺组织MPO、MDA均降低，其中C组肺组织MPO、MDA均差异显著(P<0.05)，B组仅肺组织MPO降低有统计学意义(P<0.05)，D组均不明显。结果表明针刺肺与大肠经俞募穴能够降低肺组织MPO、MDA，募穴组较显著。见图4。

图4 各治疗组大鼠肺组织MPO、MDA比较 注:与A组比较,#P<0.05；与B组比较,△P<0.05；与D组比较,▲P<0.05

2.3 各组血清CCK、MTL、VIP与肠推进率比较

与A组相比，针刺后B、C、D组血清CCK、MTL增加，VIP减少，其中C组CCK、MTL、VIP均显著(P<0.05)，而B组仅CCK有统计学意义(P<0.05)，D组仅MTL较明显(P<0.05)。同时，C组MTL明显高于D组，VIP均较B、D组明显降低。见图5。与A组相比，针刺后C组肠推进率明显提高，B、D组差异无统计学意义。见图6。结果表明针刺募穴能显著升高血清 CCK、MTL，降低VIP，明显改善胃肠动力。

图5 各治疗组大鼠血清CCK、MTL、VIP比较 注:与A组比较,#P<0.05；与B组比较,△P<0.05；与D组比较,▲P<0.05

图6 各治疗组大鼠肠推进率比较 注:与A组比较,#P<0.05；与B组比较,△P<0.05；与D组比较,▲P<0.05

3 讨论

急性胰腺炎病情复杂，疾病早期以“痞、满、燥、实、坚”为主要临床表现[4]，与传统医学的阳明腑实证类似，以大承气汤为代表方治疗急性胰腺炎研究较多，本课题组在该领域进行了大量相关研究[17,23]。重症急性胰腺炎病情危重常常并发胃肠功能紊乱和急性呼吸窘迫综合征，胃肠功能紊乱会引起腹压升高加重肺损伤，甚至发展为急性呼吸衰竭[10]。本实验发现电针肺与大肠经俞募穴能够刺激CCK、 MTL释放，抑制VIP释放，改善急性胰腺炎大鼠胃肠动力，减少MPO和MDA的生成，最终减轻肺损伤，且针刺募穴疗效更优。

基于“肺与大肠相表里”及“俞募配穴”理论，笔者选择肺与大肠经俞募穴肺俞、大肠俞、中府、天枢作为针刺穴位。近年研究发现CCK、MTL、VIP是60多种胃肠激素中对胃肠道作用最显著的3种胃肠激素，缩胆囊素(cholecystokinin,CCK)和促胃动素(Motilin,MTL)主要作用是促进胃肠平滑肌收缩，加快胃肠蠕动；肠血管活性肽(Vasoactive intestinal polypeptide,VIP)是抑制胃肠运动主要神经递质之一，主要作用是抑制平滑肌收缩，减慢胃肠蠕动[24]。有研究报道急性胰腺炎时，血清CCK、MTL下降，VIP升高，急性胰腺炎胃肠动力下降与胃肠激素紊乱关系密切[25]。髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)主要存在于中性粒细胞和单核细胞中，当受到外界刺激时，中性粒细胞聚集并在聚集部位产生大量MPO，MPO利用氧化氢氯离子产生次氯酸盐，进而启动脂质过氧化反应，最终造成组织病理损伤[26-27]。丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是体内自由基作用于脂质发生过氧化反应的重要终产物，具有细胞毒性，损伤细胞膜，改变细胞通透性，通过测定MDA可以间接测定膜系统受损程度[28]。本实验表明针刺后血清CCK、MTL增加，VIP降低，肠推进率提高，肺组织MPO、MDA和病理评分均降低，说明胃肠动力改善，肺损伤减轻。笔者得出电针肺与大肠经俞募穴能够通过改善胃肠动力减轻肺损伤，这与目前文献报道大承气汤改善胃肠动力、降低腹内压、减轻肺损伤的结论一致[17]。这可能与电针调整了胃肠激素，胃肠动力增加，一方面腹内压降低，胸腹腔顺应性增加，肺组织缺血缺氧改善；另一方面肠道排空，胃肠积滞消除，肠屏障结构破坏减轻，肠道毒素吸收及肠道菌群移位减少，与肺部感染及中性粒细胞激活受抑有关。肺组织缺血缺氧改善、肺部感染和炎症反应降低，MPO、MDA生成减少，肺细胞脂质过氧化反应减轻，最终肺组织损伤减轻。与A组相比，C组CCK、MTL明显升高，VIP明显降低，肠蠕动加快，肺组织MPO、MDA以及肺组织病理评分均明显降低；B组仅CCK升高较为明显，而肺组织MPO及病理评分也明显降低；D组各项指标均无明显差异。这可能因C组取穴为肺与大肠的募穴中府、天枢，“阳病治阴”,且天枢为便秘要穴[29]，所以胃肠动力改善最明显，肺损伤也明显减轻。B组取穴为肺与大肠的俞穴肺俞、大肠俞，“阳病治阴”,且肺俞为改善肺功能要穴[30]，故胃肠动力虽改善不明显，但肺损伤仍明显减轻，其机制可能与炎症因子调整有关。按中医俞募配穴理论D组疗效应当最佳，但可能在实验中分别刺激腹募、背俞穴时间缩短，未到达最佳刺激时间，尚需要进一步实验证实。

综上，本研究证实，在大承气汤治疗基础上，电针肺与大肠经俞募穴能够改善急性胰腺炎大鼠胃肠动力，减轻肺损伤，且募穴疗效更优，为急性胰腺炎合并肺损伤的针刺治疗提供了实验依据。

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Mechanism of Electro-acupuncture at Shu and Mu Acupoints of Lung and Large Intestine Meridians for Ameliorating the Gastrointestinal Motility to Reduce the Lung Injury Complicated with Acute Pancreatitis in Rats

YUAN Ling1,2,WU Jun1,SU Hang2,LIU Zhen-yan2,LI Si-cheng3,LI Juan2,TANG Wen-fu1,WAN Mei-hua1△

(1.WestChinaHospital,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China;3.HubeiProvincialHospitalofIntegratedChineseandWesternMedicine,Wuhan430015,China)

Objective：To explore whether electro-acupuncture(EA) at Shu and Mu acupoints of lung and large intestine meridians could ameliorate gastrointestinal motility(GM)to reduce acute lung injury (ALI) complicated with AP in rats and its mechanism when Da Cheng Qi decoction (DCQD) was used as the fundamental treatment.Methods：Forty-eight rats were randomly divided into a sham-operation group (SG), a model group (MG),a DCQD group(A),DCQD & Shu point group (B), DCQD & Mu point group (C) and DCQD & Shu and Mu points group (D),with eight rats in each group. Rats in the experimental groups were induced AP by retrograde perfusion into the biliopancreatic duct of 3.5% sodium taurocholate, while group SG received normal saline instead. Two hours after injection, rats in group B, C, D were separately performed EA for three times,with the interval time of seven hours and retaining needles for forty minutes each time. Twenty-four hours after injection, rats in treatment groups were given DCQD intragastrically. Intestinal propulsion rates of all rats were measured after twelve hours of DCQD administration.Then they were sacrificed and their blood, lung and pancreas tissue samples were collected for pathological examination and CCK, VIP, MTL in blood as well as MPO and MDA were measured by ELISA. Results：Compared with Group A, CCK and MTL in group C were significantly increased and VIP was significantly decreased and intestinal propulsion rates were also increased (P<0.05). MPO & MDA and pathology score of lung in group C were obviously lower (P<0.05); CCK in group B was obviously increased (P<0.05). MPO and pathology score of lung in group B were obviously lower (P<0.05). MTL in group D was obviously increased (P<0.05).However, other indicators in group D were not significant. Conclusion：EA at Shu and Mu acupoints of lung and large intestine meridians can increase CCK & MTL and decrease VIP to ameliorate GM and lower MPO & MDA to reduce the lung injury complicated with acute pancreatitis in rats. It shows that the Mu point is more effective.

Electro-acupuncture;Lung meridian;Large intestine meridian;Shu and Mu acupoints;Acute pancreatitis;Gastrointestinal motility;Lung injury

国家自然科学基金项目，编号：81374042，81573857。

袁玲(1991-)，女，2010级针灸英语专业硕士研究生。

△通讯作者：万美华(1978-)，女，副主任医师，研究方向:中西医结合治疗急性胰腺炎。

R246.1

A

1005-0779(2017)02-0049-04

2016-09-06