探究菌血症对G试验的干扰

方 慧 沈菊英 蔡惠萍

（同济大学附属杨浦医院，上海 200090）

探究菌血症对G试验的干扰

方 慧 沈菊英 蔡惠萍

（同济大学附属杨浦医院，上海 200090）

目的 了解菌血症对安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒的干扰因素，有助于减少G试验的假阳性率。方法 回顾分析48例非侵袭性真菌感染菌血症患者，血培养当日G试验检测结果。结果 48例非侵袭性真菌感染菌血症患者中18例（37.50%）为G试验阳性，其中革兰阳性菌感染的菌血症中11例G试验阳性（40.74%、11/27）均为葡萄球菌属感染。革兰阴性菌感染的菌血症中7例G试验阳性（33.33%、7/21），大肠埃希菌6例，铜绿假单胞菌感染1例。结果显示头状葡萄球菌，溶血葡萄球菌，人葡萄球菌，表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌感染可引起G试验阳性。结论 葡萄球菌属，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌对湛江安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒产生干扰，可引起G试验假阳性。

菌血症；G试验；真菌；(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒

侵袭性真菌感染（IFI）又称深部真菌感染或系统性真菌感染，是指致病性真菌感染侵犯皮下组织，黏膜，肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病[1]。由于广谱抗菌药物及免疫抑制剂，导管等的广泛应用，深部真菌感染呈持续上升趋势。目前实验室主要通过血清学检测（如真菌表面抗原，真菌代谢物以及相应抗体等）、病原学及病理学来检测细菌侵袭。病理学检查属于侵入性操作，对患者伤害较大，临床应用有限；而病原学检查由于不能分清定植和侵入，且培养周期长，也不能满足临床需要[2]。而非培养检测方法的G试验，弥补了传统病理学及培养的不足，可以提高IFI检出率，缩短检出时间，为早期治疗赢得时间。

（1，3）-β-D葡聚糖[（1，3）-β-D-glucan，BG]广泛存在于真菌细胞壁中除毛霉菌（属接合菌属），隐球菌以外，约占细胞壁重量的50%。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬，BG可从胞壁中释放出来，在血液及其他体液（如尿液、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等）中的含量增高[3]。目前国外市场常用的G-试验检测试剂盒主要有2种，一种是日本Seikagaku kogyo公司的Fungitec-G试剂和美国Cape code协会的Glu-Catell或Fungitell试剂，它们的cut-off值分别是≥20 pg/mL和≥60 pg/mL或≥80 pg/mL。目前国内主要有北京金山川科技发展公司的GKT-5m set试剂盒和广东湛江安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，它们的cut-off值分别是20 pg/mL和100.5 pg/mL。

国外研究显示菌血症特别是革兰阳性菌感染患者对Fungitell试剂盒有交叉反应[4-5]。国内对金山川的GKT-5M set动态检测试剂盒也有报道显示：与国外研究类似，革兰阳性菌患者对试剂盒也有交叉反应[6]。本文回顾性分析了本院48例菌血症患者G试验检测结果，旨在为全面了解湛江安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖试剂的性能使此G试验更好地服务于临床。

1 材料与方法

1.1 病历资料：2015年1月至2015年9月，因发热行血培养证实为菌血症的非IFI患者48例。其中肾脏病科1例，神经内科1例，EICU8例，老年科5例，全科病房5例，急诊观察室11例，呼吸科7例，CCU1例，风湿科2例，消化科2例，RICU3例，普外科1例，内分泌科1例。男性25例，平均年龄81岁；女性23例，平均年龄79岁。所有患者血培养当天同时送检G-试验，搜集患者采血前1～3 d内有无透析，插管，输注白蛋白和抗生素使用情况。血培养分离出革兰阳性菌27例（金黄色葡萄球菌5株，表皮葡萄球菌2株，头状葡萄球菌5株，溶血葡萄球菌2株，人葡萄球菌3株，缓慢葡萄球菌1株，华纳葡萄球菌1株，咽峡炎链球菌1株，溶血链球菌1株，粪肠球菌2株，屎肠球菌2株，母鸡肠球菌1株，鸟肠球菌1株），革兰阴性菌21例（大肠埃希菌11株，铜绿假单胞菌2株，奇异变形杆菌3株，肺炎克雷伯菌4株，放射根瘤菌1株）。

1.2 仪器和试剂：LKM动态试管检测仪；真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒；TAL-80E型试管恒温仪；WH-1微型旋涡混合仪；无热原吸头；移液管；VITEK2-copact全自动微生物鉴定仪；BD BACTEC FX40全自动血培养仪。

1.3 血浆G试验：用无热源肝素抗凝管采集全血1～2mL，400 g离心力离心10 min，分离富含血小板血浆，如2 h内不能检测，以无热源吸头移取血浆至无热源真空管内，并存于-20 ℃冰箱待测。采用湛江安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，及LKM动态试管检测仪，严格按说明书操作，质控品随标本同时检测。Cut-coff值为100.5 pg/mL，＜100.5 pg/mL为阴性，100.5～151.5 pg/mL为病变初期，需连续检测，＞151.5 pg/mL为阳性。

2 结 果

2.1 菌血症患者G-试验结果：48例非IFI的菌血症患者中，18例（37.50%）为G-试验阳性。其中革兰阳性菌感染的菌血症患者中11例G-试验阳性（40.74%、11/27）均为葡萄球菌属感染，葡萄球菌属感染的菌血症患者中G-试验阳性占（61.11%、11/18）。革兰阴性菌感染的菌血症患者中7例（33.33% 7/21）G-试验阳性，大肠埃希菌感染患者6例，铜绿假单胞菌感染1例。值得提出的是金黄色葡萄球菌感染患者中G试验阳性率为100%（5/5），溶血性葡萄球菌感染患者中G试验阳性率为100%（2/2），大肠埃希菌感染患者中G试验阳性率为54.54%（6/11），铜绿假单胞菌感染患者中G试验阳性率为50%（1/2）。

本组患者中引起G-试验阳性的菌株有头状葡萄球菌，溶血葡萄球菌，人葡萄球菌，表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌。G-试验阴性的菌株有缓慢葡萄球菌，华纳葡萄球菌，咽峡炎链球菌，溶血链球菌，粪肠球菌，屎肠球菌，母鸡肠球菌，鸟肠球菌，奇异变形杆菌，肺炎克雷伯菌，放射根瘤菌。

2.2 干扰因素分析：输注白蛋白，血液透析，插管和以真菌为原料的抗菌药物会引起G-试验假阳性，但这些都是临床常用的治疗手段和措施。本组48例患者有40例不能完全排除上述干扰因素。如排除β-内酰胺类药物的影响有32例患者接受插管，血透或输注白蛋白的治疗。18例G-试验阳性的菌血症患者中有16例接受输注白蛋白，血液透析，插管等治疗，但仍有一部分接受同等治疗的患者表现为G-试验阴性。

3 讨 论

G-试验适用于除隐球菌和结合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌，还可以区分定植和深部真菌感染，但不能确定菌种和菌属。

G试验是（1-3）-β-D葡聚糖激活试剂中鲎变形细胞裂解物中的凝固酶原（G因子），形成凝固蛋白，根据反应物的浓度变化对（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量检测[7]。

目前认为BG是一个良好的IFI的筛查标志，具有很高阴性预测值[4,8-10]，2009年新修订的欧洲癌症-侵袭性真菌感染治疗研究协作组和美国国立变态反应和感染病研究院真菌病研究组（EORTC/MSG）将BG纳入侵袭性真菌感染拟诊的标准之一[11]，可以用来排除IFI。在BG检测中有些容易造成假阳性的因素如污染，应用纤微素薄膜进行血液透析，用含白蛋白、凝固因子、免疫球蛋白等的静脉制剂，香菇多糖，裂殖菌多糖等抗肿瘤类药物，菌血症特别是革兰阳性球菌感染等，限制了BG在IFI的诊断作用[12]。

国外研究显示，菌血症患者特别是革兰阳性菌患者对Fungiteii试剂有交叉反应，引起G-试验阳性的菌株有：金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性葡萄球菌，缓症链球菌，屎肠球菌，大肠埃希菌，沙门氏菌，铜绿假单胞菌，类产碱杆菌和肺炎链球菌[4-5]。国内研究显示北京金山川动态真菌检测试剂盒也有类似交叉反应，引起G-试验阳性的也有金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性葡萄球菌，铜绿假单胞菌，另还有国外没有报道的鲍鳗不动复合群，但肠球菌属，肺炎链球菌，大肠埃希菌感染未引起G试验阳性[6]。本研究对湛江安度斯的真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒在菌血症患者中的应用进行评价，我们的结果介于国外与国内北京金山川之间。革兰阳性菌感染的菌血症中G试验阳性率为（40.74%、11/27）均为葡萄球菌属感染，与以上二者相似，与试剂产生交叉反应，引起G试验阳性，葡萄球菌属感染的菌血症中G试验阳性率为（61.11%、11/18）。革兰阴性菌感染的菌血症中G试验阳性率为（33.33%、7/21）。铜绿假单胞菌与以上二者相似，产生了交叉反应。而大肠埃希菌则与国外Fungitell试剂盒相似产生了交叉反应，引起G试验阳性，肠球菌属则于国内北京金山川动态真菌试剂盒反应相似，未引起G试验阳性。

以上细菌造成G试验阳性的原因还不清楚，粪产碱杆菌，肺炎链球菌，铜绿假单胞菌可以产生1，2-β-葡聚糖和1-6-β-葡聚糖或葡聚糖类似物，可能是引起G试验交叉反应的原因。本组资料为回顾性分析，老年患者居多，多有基础疾病且病情较重，无法完全排除插管、血透、β-内酰胺类药物，静脉输注白蛋白制剂等治疗手段的干扰。Pickering[4]等曾收集了菌血症患者插管、血透、β-内酰胺类药物、静脉输注白蛋白制剂的资料，进行统计分析显示，并非所有接受上述治疗的患者都会产生假阳性的结果，这与本研究的结果很类似。Pickering[4]等认为这些患者中可能还存在某些尚不知晓的原因。还有研究]13-14]专门针对一些治疗药物在应用中是否会引起G试验假阳性进行了评价，如Marty等[14]检测了美国常用的44种抗生素静脉制剂，在最大血浆浓度时无一检测到β-D-glucan活性，他们认为“使用抗生素会产生G试验假阳性”的结论需进一步证实，因此我们在分析时排除了抗生素的使用因素。以上这些研究数据对于菌血症又并发基础疾病的患者，有利于排除特定因素对G试验检测的影响。

在可能的含有侵袭性真菌感染的菌血症患者中，如果G试验阳性，且感染菌为葡萄球菌属，大肠杆菌，铜绿假单胞菌等，首先要排除假阳性可能，再结合影像学，培养法检查的结果分析。另外增加G试验的检测频率，可以降低假阳性率[15]。如果G试验阴性，则可以排除深部真菌感染。

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A Research on the Interference of Bacteremia on BG

FANG Hui, SHEN Ju-ying, CAI Hui-ping
(Yangpu Hospital of Tongji University, Shanghai 200090, China)

Objective To observe the interference of bacteria inflection on (1-3)-β-D-glucan (BG) detection by A&C Kit. It will be helpful to reduce false positivity in bacteremia. Methods Results of (1-3)- β-D-glucan detection in 48 non-invasive fungal infection bacteremia at the same day of blood culture were analyzed retrospectly. Results Of 48 patients, 18 (37.50%) were BG positive. The positive rate was 40.74% (11/27) in patient with gram-positive bacteremia, which were all infected by Staphylococcus spp. 7 of 21 gram-negative bacteremia showed positive results of (1-3)-β-D-glucan. The positive rate was 33.3% (7/21). 6 cases were interfered by Escherichia coli. The other one case was interfered by Pseudomonas aeruginosa. Positive results of (1-3)-β-D-glucan were detected in bacteremia caused by Staphylococcus capitis, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa. Conclusion Some bacteria such as Staphylococcus spp. Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa would interfere the result of Zhanjiang A&C Kit. This might result in false positivity in bacteremia due to above mentioned bacteria.

Bacteremia; G test; Fungal; (1-3)-β-D-glucan (BG) detection kit

R446.5

B

1671-8194（2017）18-0024-03