人参Rb组皂苷对大鼠体内外血栓形成的影响

2016-12-06于晓风徐华丽睢大筼

中国老年学杂志 2016年21期

关键词：药组旁路灌胃

曲莉于晓风徐华丽睢大筼

(吉林省疾病预防控制中心，吉林长春 130062)

人参Rb组皂苷对大鼠体内外血栓形成的影响

曲莉于晓风1徐华丽1睢大筼1

(吉林省疾病预防控制中心，吉林长春 130062)

目的观察人参Rb组皂苷(G-Rb)对大鼠体内、外血栓形成的影响。方法 Wistar大鼠随机分为对照组，G-Rb 17.5、35、70 mg/kg组及阳性药组。对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠2 ml/kg，G-Rb三个剂量组分别灌胃G-Rb 17.5、35、70 mg/kg，阳性药组灌胃通心络胶囊1 000 mg/kg，连续7 d。①体外旁路循环实验：从颈总动脉至颈外静脉插入一根带有丝线并充满肝素-生理盐水的聚乙烯套管，连接形成体外旁路循环。②电刺激实验：分离右颈总动脉，将不锈钢电极放置在该动脉处，并在其远端放置温度测量探头备测血管表面的温度。1.5 mA直流电持续刺激7.5 min。③体外血栓形成实验：用硅化注射器由腹主动脉采血1.8 ml，立即注入内径4 mm硅化聚乙烯塑料环中，置LBY-S5体外血栓形成仪上分别测定血栓湿重及血栓干重。结果 G-Rb 35、70 mg/kg组均可使体外旁路循环法所致血栓湿重明显减轻，明显延长电刺激法所致颈总动脉血栓形成时间及凝血时间，显著提高凝血酶原浓度，并可使体外血栓形成实验所致血栓湿重及血栓干重均明显减轻(P<0.05或P<0.01)。结论 G-Rb对大鼠体内、外血栓形成均具有明显抑制作用。

人参Rb组皂苷；血栓；体外旁路循环

人参Rb组皂苷(Ginsenoside-Rb,G-Rb)系从五加科人参属植物西洋参(Panax Quinquefolium Linn)茎叶及根提取的总皂苷中分离得到的有效部位群，保证了人参皂苷Rb组分(包括Rb1、Rb2和Rb3)的完整性。前期研究表明，G-Rb能缩小急性心肌梗死犬心肌梗死面积，降低血清磷酸肌酸激酶及乳酸脱氢酶活性，并明显降低血清LPO含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性〔1〕；可明显降低实验性心肌梗死大鼠血液黏度和游离脂肪酸水平〔2〕；亦能降低心肌耗氧量，改善冠脉循环、抗自由基氧化损伤及增加心肌营养性血流量等〔3～5〕；对结扎大鼠腹主动脉所致压力超负荷性心室重构具有保护作用，可改善心室重构大鼠的左心收缩和舒张功能，减少缩血管活性物质对心肌的损伤，纠正PGI2/TXA2失衡〔6〕；对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压所致实验性脑缺血模型具有明显保护作用〔7〕。G-Rb是否也具有防治体内、外血栓形成作用，目前尚未见文献报道。本文观察G-Rb对大鼠体内、外血栓形成的影响，为扩大其治疗缺血性脑中风的适应证提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 动物清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重220～250 g，合格证号SCXK-(吉)2007-0003，吉林大学实验动物中心提供。

1.2 药品 G-Rb 由吉林人参研究院提供，批号：20101220，人参皂苷Rb组分含量86.5%，实验时以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度；阳性对照药品：通心络胶囊，石家庄以岭药业股份有限公司产品，批号20110706；规格：0.38 g/粒；用法：口服，2～4粒/次，3次/d。功能主治：益气活血、通络止痛，用于冠心病心绞痛，证属心气虚乏、血瘀络阻者。试验时以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度。

1.3 实验方法

1.3.1 对大鼠动脉-静脉旁路血栓形成的影响 50只Wistar大鼠随机分为对照组，阳性药通心络胶囊1 000 mg/kg组及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg组，每组10只。G-Rb及阳性药组分别灌胃给药，对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠，均1次/d，连续7 d。末次给药后30 min，以戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉大鼠，按文献方法制作大鼠动脉-静脉旁路血栓模型〔8〕，分离右颈总动脉及左颈外静脉，将充满肝素的聚乙烯管(将两根内径1 cm、长10 cm的聚乙烯管2根，接于内径2 cm、长8 cm聚乙烯管1根，粗管段上放入1根6 cm已称重的线)一端插入静脉，另一端插入颈总动脉。开启动脉，血流由颈总动脉流入颈静脉。15 min后中断血流，取出丝线用微量电子秤取湿重(mg)，计算血栓重量及抑制率。血栓湿重(mg)= 总重量-线重量。抑制率=〔(对照组血栓重-给药组血栓重)/ 对照组血栓重〕×100%。

1.3.2 对大鼠电刺激血栓形成时间、凝血时间及凝血酶原浓度的影响 50只Wistar大鼠随机分为对照组，阳性药(予通心络胶囊1 000 mg/kg)组及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg组，每组10只。G-Rb及阳性药组分别灌胃给药，对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠，均1次/d，连续7 d。末次给药后30 min，以戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，分离右颈总动脉15 mm，将不锈钢电极放置在该动脉处，并在其远端放置温度测量探头备测血管表面的温度。1.5 mA直流电持续刺激7.5 min。当颈总动脉内因血栓形成堵塞血流时，血管远端温度突降，从刺激开始到温度突降所需时间为血栓形成时间(OT)。以OT值和延长率作为判断药效的指标。延长率=(给药组血栓形成时间-空白对照组血栓形成时间)/空白对照组血栓形成时间×100%。大鼠取血，测凝血时间；离心，取血清，测定大鼠凝血酶原浓度〔9〕。

1.3.3 对大鼠体外血栓形成的影响 50只Wistar大鼠随机分为对照组，阳性药(予通心络胶囊1 000 mg/kg)组及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg组，每组10只。G-Rb及阳性药组分别灌胃给药，对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠，均1次/d，连续7 d。末次给药后30 min，按文献方法〔8〕制作体外血栓模型，腹主动脉取血2.0 ml加入体外血栓管中，将血栓管环状套在体外血栓形成仪转动盘上，开动仪器，圆盘转动速度为17 r/min。转动15 min后停转，迅速取下血栓管，把管内血液及形成血栓倒在培养皿中，将血栓放在干滤纸上，测量其长度，吸干表面鲜血，称重，减去纸片重量后记录血栓的湿重，将湿血栓连同纸片放入烤箱中(64℃)20 min，取出称其重量，减去纸片重量为血栓干重。

2 结果

2.1 G-Rb对大鼠动脉-静脉旁路血栓形成的影响与对照组比较，G-Rb 35、70 mg/kg组及阳性药组的血栓湿重均明显降低(P<0.05)，其抑制率分别为23.94%、26.06%及24.65%，见表1。

表1 G-Rb对大鼠动脉-静脉旁路血栓形成的影响

与对照组比较：1)P<0.05

2.2 G-Rb对大鼠电刺激血栓形成时间、凝血时间及凝血酶原浓度的影响与对照组比较，G-Rb 35、70 mg/kg组及阳性药组均能明显延长血栓形成时间及凝血时间(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg组亦能显著提高凝血酶原浓度(P<0.05)，见表2。

表2 G-Rb对电刺激血栓形成及凝血时间、凝血酶原浓度的影响

与对照组比较:1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3 G-Rb对大鼠体外血栓形成的影响与对照组比较，G-Rb 35、70 mg/kg组及阳性药组均能明显降低大鼠体外血栓湿重及干重(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg组亦能明显降低大鼠血栓长度(P<0.05 )，见表3。

表3 G-Rb对大鼠体外血栓形成的影响±s，n=10)

3 讨论

动脉粥样硬化是心脑缺血的病理基础。血栓形成不仅与动脉粥样硬化斑块有关，在斑块破裂、斑块内出血与斑块碎屑等导致动脉闭塞等一系列变化的过程中起主要作用〔10〕。血栓形成的直接因素为血液凝固及血小板黏附与聚集，也与血管壁损伤、血液黏度的升高及血流速度减慢有关。Chandler法形成血栓的组织结构与人的动脉血栓相似，其中含有血小板、红细胞、纤维蛋白和水分等〔11〕。

本实验结果显示，G-Rb可使体外旁路循环法所致血栓湿重明显减轻，明显延长电刺激法所致颈总动脉血栓形成时间及凝血时间，显著提高凝血酶原浓度，并可使体外血栓形成实验所致血栓湿重及血栓干重均明显减轻，提示其对大鼠体内、外血栓形成均具有明显的拮抗作用，这种活性对防治缺血性脑血管疾病非常有价值。G-Rb抑制血栓形成的作用可能与延长凝血时间、提高凝血酶原浓度有关，确切机制有待进一步研究。

1 睢大员，陈满秋，于晓风，等.人参Rb组皂苷对犬实验性心肌梗死的保护作用〔J〕.中草药，2001;32(2):136-9.

2 覃秀川，睢大员，杨景文，等.人参Rb组皂苷对实验性心梗大鼠血液粘度和游离脂肪酸水平的影响〔J〕.中草药，2002;32(6):540-4.

3 孙乾，睢大员，于晓风，等.人参Rb组皂苷对实验性心肌梗死犬心脏血流动力学和氧化谢的影响〔J〕.中草药，2002;33(8):718-22.

4 覃秀川，睢大员，杨景文，等.人参Rb组皂甙对急性心肌梗死大鼠自由基代谢的影响〔J〕.吉林中医药，2002;22(3)：51-3.

5 徐华丽，翟玉荣，曲绍春，等.人参Rb组皂苷对小鼠心肌营养性血流量的影响〔J〕.人参研究，2003;15(3):2-4.

6 王天晓，于晓风，曲绍春，等.人参Rb组皂苷对压力负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的影响及其作用机制〔J〕.时珍国医国药，2008;19(7)：1615-7.

7 张涵亮，于晓风，曲绍春，等.人参Rb 组皂苷对大鼠实验性脑缺血的影响〔J〕.中国老年学杂志，2011;31(12)：2247-9.

8 石鹤坤，甘雨，秦文艳，等.赢络复欣颗粒对大鼠血栓形成及小鼠肠系膜微循环障碍的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2011;17(3)：167-9.

9 岳海涛，李金成，吕铭洋，等.红花注射液对大鼠血栓形成的影响及其作用机制〔J〕.中草药，2011;42(8)：1585-7.

10 刘泽霖，贺石林，李家增，等.血栓性疾病的诊断与治疗〔M〕.北京：人民卫生出版社，2000;262-3.

11 殷蔚荑，孟娟如，刘进扬，等.四甲基吡嗪对实验性血栓形成的影响〔J〕.中国药理学报，1981;2(4)：238-40.

〔2015-11-12修回〕