牛肝菌多糖对力竭运动大鼠骨骼肌炎症反应的影响*

庞俊娣

（昆明医科大学，云南 昆明 650500）

炎症是机体对外界刺激的防御反应，炎症的发生与体内的炎症介质、促炎因子的激活密切相关，如一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等在体内的过量表达，均能导致机体炎症的发生[1-2]。研究证明，反复力竭运动可导致机体炎症，进一步加重组织、器官的损伤，如何预防、控制运动导致的炎症，具有重要的意义[3-4]。

牛肝菌（Boletus.spp.）中富含多糖，在目前的研究中，牛肝菌多糖具有丰富的生物活性，如保肝[5]、抗氧化[6]、抗肿瘤等[7]。在运动领域的研究中，牛肝菌多糖的应用效果研究相对较少，本研究拟建立反复力竭运动模型，观察服用牛肝菌多糖对大鼠力竭运动后骨骼肌一氧化氮（NO）、iNOS、IL-1、IL-6含量的影响，为牛肝菌多糖的抗炎作用提供相关试验数据支撑。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

昆明雄性大鼠50只，8周龄，清洁级，健康。平均体重（190.33±9.27）g，大鼠分笼饲养，每笼6只。大鼠采用国家啮齿类饲料喂养，正常进食、饮水。动物饲养房温度25℃，湿度45%～55%，自然昼夜照明。

大鼠适应喂养3 d后，随机分为安静对照组、运动组、低剂量运动给药组、中剂量运动给药组、高剂量运动给药组，每组10只。试验前对3组大鼠的体质量、力竭游泳时间进行测定（力竭判定标准：大鼠头沉入水约8 s。捞出后鼠背放桌面，无法完成翻正反射）。结果显示5组大鼠的体质量、力竭游泳时间均无显著性差异，符合实验的要求。

1.2 主要试剂与仪器

牛肝菌多糖，购自陕西慈缘科技有限公司（纯度为90%，粉末状，溶于水）；NO试剂盒、iNOS试剂盒、IL-1试剂盒、IL-6试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；大鼠用泳池（自制，100 cm×60 cm×80 cm，池内有自动加温系统、小型水泵）；FSH-2高速电动匀浆机、DL-46RC转速冷冻机均购自中科生物医学公司。

1.3 动物训练方案与给药方案

安静对照组：常规饮食，进水，不参加运动。

运动组：隔天进行1次力竭游泳，共20 d，每天上午9:00～11:00灌服等同运动给药组同体积的生理盐水。

低剂量运动给药组、中剂量运动给药组、高剂量运动给药组：3组隔天进行1次力竭游泳，共20 d，每天上午9:00～11:00灌服牛肝菌多糖，低剂量运动给药组、中剂量运动给药组、高剂量运动给药组的给药剂量分别为 15 mg·kg-1d-1、30 mg·kg-1d-1、45 mg·kg-1d-1。

1.4 动物取材和指标的测定

骨骼肌组织采集与匀浆：大鼠最后1次力竭运动后，断头处死，迅速去除股四头肌，生理盐水冲洗、滤纸吸干水分，4℃冰箱保存待测。称重5 g骨骼肌组织，匀浆（按1∶9加入生理盐水，4℃、6 000 r·min-1离心、20 min），提取上清液[8]，待测。

指标测定：采用硝酸还原酶法测定NO[9]，采用双抗体夹心ELISA法检测iNOS[10]，采用双抗体夹心ELISA法检测IL-6、IL-10[11]。

1.5 统计学处理

2 试验结果分析

2.1 NO、iNOS含量测定

各组大鼠NO、iNOS含量比较结果，见表1。

表1 各组大鼠体NO、iNOS含量的比较（±s）Tab.1 Comparison of NO and iNOS content of rats in each group（±s）

表1 各组大鼠体NO、iNOS含量的比较（±s）Tab.1 Comparison of NO and iNOS content of rats in each group（±s）

注：*表示与安静组相比，P＜0.05；#表示与运动组相比P＜0.05，@表示与高剂量给药组相比，P＜0.05。Note:*Compared with the quiet group,P＜0.05,#Compared with the exercise group,P＜0.05;@Compared with the high dose group,P＜0.05.

含量NO/（μmol·L-1）iNOS/（U·mL-1）安静对照组 10 0.19±0.01 0.174±0.03组别 数量/只运动组 100.43±0.05* 0.57±0.05*低剂量运动给药组 10中剂量运动给药组 10 0.24±0.01*#@ 0.37±0.01*#@高剂量运动给药组 10 0.20±0.02*# 0.31±0.02*#0.26±0.07*#@ 0.39±0.03*#@

由表1可知，运动组、低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组NO、iNOS含量均大幅度高于安静对照组，差异显著（P＜0.05）；低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组NO、iNOS均小于运动组，差异显著（P＜0.05）；低剂量给药组、中剂量给药组NO、iNOS含量均高于高剂量给药组，差异显著（P＜0.05）。结果显示，低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组能抑制力竭运动造成的NO、iNOS含量增加，以高剂量给药组效果最佳。

2.2 IL-1、IL-6含量测定

各组大鼠IL-1、IL-6的比较结果，见表2。

表2 各组大鼠IL-1、IL-6含量比较（±s）Tab.2 Comparison of IL-1 and IL-6 content in each group of rats（±s）

表2 各组大鼠IL-1、IL-6含量比较（±s）Tab.2 Comparison of IL-1 and IL-6 content in each group of rats（±s）

注：*表示与安静组相比，P＜0.05；#表示与运动组相比P＜0.05；@表示与高剂量给药组相比，P＜0.05。Note:*Compared with the quiet group,P＜0.05,#Compared with the exercise group,P＜0.05,@Compared with the high dose group,P＜0.05.

含量IL-1β/（pg·mL-1）IL-6/（pg·mL-1）安静对照组 10 28.62±4.86 49.88±5.91组别 数量/只运动组 1046.32±5.09* 97.76±9.02*低剂量运动给药组 10中剂量运动给药组 10 36.33±3.31*#@86.31±6.04*#@高剂量运动给药组 10 33.21±4.21*# 81.26±6.07*#37.21±3.22*#@86.26±7.11*#@

由表2可知，运动组、低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组IL-1、IL-6均大幅度高于安静对照组，差异显著（P＜0.05）；低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组IL-1、IL-6均小于运动组，差异显著（P＜0.05）；低剂量给药组、中剂量给药组IL-1、IL-6均大于运动组，差异显著（P＜0.05）。结果显示，低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组均能降低力竭运动引起的炎性因子升高，以高剂量组效果最佳。

3 讨论

炎症的产生受炎症介质调控，NO、iNOS是较典型的炎症介质。NO是强大的血管扩张物质，同时具备较强的毒性。NO是以L-精氨酸为底物，在一氧化氮合酶（NOS）催化下生成。叶邵凡等[12]的研究表明，大鼠在大强度运动、反复力竭运动时，肝组织中iNOS活性大量增加，导致NO生成过多。叶素英等[13]研究表明，小鼠在过度训练中，脑组织iNOS含量增加，NO的毒性代谢产物也相应增加。本研究中，大鼠在反复力竭运动后，牛肝菌多糖能抑制骨骼肌组织中iNOS、NO增加，表明牛肝菌多糖能正向调控炎症介质的产生，对力竭运动导致的骨骼肌炎症有较好的调理作用。

IL-1、IL-6是典型的细胞因子，在炎症反应中发挥介导免疫细胞增值、活化的作用。IL-1、IL-6是较典型的促炎因子，在正常的生理情况下，细胞促炎因子与抗炎因子处于动态平衡状态。张富婷等[14]研究证实，大强度或者力竭运动时，机体炎症动态平衡被打破，促炎因子活性增加，从而引起炎症反应。本研究中，大鼠力竭运动中IL-1、IL-6大幅度增加，而牛肝菌多糖能抑制上述现象。结果表明，牛肝菌多糖能正向调整机体的炎症状态，抑制机体促炎因子活性的增加。可能是牛肝菌多糖能抑制iNOS的活性，减少NO毒性物质的产生，从而抑制促炎因子的活性，抑制炎症的产生。

4 结论

反复力竭运动导致机体骨骼肌iNOS、NO含量的增加，从而导致机体促炎因子IL-1、IL-6活性增加，引发骨骼肌炎症反应。牛肝菌多糖能抑制上述状况的发生，效果以高剂量给药组为佳，与牛肝菌多糖正向调控炎症介质，从而导致促炎因子活性降低有关。