羊栖菜多糖抗肝纤维化的作用机制的实验研究

薛海波，马丽丽，林贤凡，吴金明

羊栖菜多糖抗肝纤维化的作用机制的实验研究

薛海波，马丽丽，林贤凡，吴金明

目的探究羊栖菜多糖抗肝纤维化的作用机制。方法建立CCl4诱导的SD大鼠肝纤维化模型，观察血清学指标，大鼠肝脏病理的变化以及对ColⅠ、转化生长因子-（TGF-1）、转录激活因子（Smad）3、Smad4及Smad7等表达情况的影响。结果羊栖菜多糖组大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶的活性均低于模型对照组（均P＜0.05），谷胱甘肽过氧化物酶活性及肝组织中超氧化物歧化酶的含量均高于模型对照组（均P＜0.05），肝组织中羟脯氨酸及丙二醛的含量均低于模型对照组（均P＜0.05），ColⅠ、TGF-1、Smad4、Smad3 mRNA和蛋白的表达均低于模型对照组（均P＜0.05），Smad7 mRNA和蛋白的表达均高于模型对照组（均P＜0.05）；肝星状细胞TGF-1、Smad3及Smad4mRNA和蛋白的表达均低于正常对照组（均P＜0.05），Smad7mRNA和蛋白的表达均高于正常对照组（均P＜0.05）。结论羊栖菜多糖能有效改善肝功能，减轻肝组织病理损伤程度，对CCl4所致肝纤维化大鼠具有一定的保护作用，可有效抑制大鼠肝星状细胞增殖，调控Smad相关mRNA及蛋白的表达，减少细胞外基质的沉积。

羊栖菜多糖；肝纤维化；作用机制；动物模型

肝纤维化就是肝脏疾病一种多发现象[1]，是大部分肝性疾病的一个主要的中间环节。因此，尽早发现肝纤维化，致力于有效逆转或抑制，可以达到有效预防和控制疾病的目的[2]。治疗肝纤维化的主要药物：一是利用加速胶原降解的药物；二是通过抑制一些胶原合成和分泌的药物，如秋水仙碱和干扰素。前者研究才刚刚起步，远不能应用于临床；而后者毒副作用较大，难以推广使用[3]。近来发现羊栖菜多糖的主要成分岩藻聚糖硫酸酯在医学方面具有独特的功效，如多种抗性，降血脂血糖，并且对免疫功能也有一定的影响，而且羊栖菜中羊栖菜多糖含量高[4]，易于提取，毒副作用小。本文探究羊栖菜多糖抗肝纤维化的作用机制，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料成年健康SD大鼠80只，体质量310～350 g，购买于国家啮齿类实验动物种子中心，SPF级，许可证号：SCXK（京）2009-0017。随机分成正常对照组和模型组。正常对照组大鼠以0.9%氯化钠注射液代替。模型组大鼠60只采用50%CCl4花生油溶液灌胃造模，连续8周，从第9周开始，分成模型对照组、秋水仙素组和羊栖菜多糖组，各20只。模型对照组给予等量的0.9%氯化钠注射液，秋水仙素组给予秋水仙碱0.2mg，羊栖菜多糖组给予羊栖菜多糖80 mg，以每天1次灌胃，连续4周。

1.2 观察指标末次给药24 h后处死大鼠，釆集大鼠血清和肝组织。检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力，肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、羟脯氨酸（Hyp）及丙二醛（MDA）的含量。体外培养SD大鼠的肝星状细胞，噻唑蓝（MTT）法检测羊栖菜多糖对肝星状细胞的抑制作用。以＞90%存活率浓度的羊栖菜多糖对肝星状细胞进行干预，通过测定细胞上清液中乳酸脱氢酶的活性评定的细胞毒性，此外采用逆转录聚合酶链式反应和Weaternbilot法分别检测转化生长因子-（TGF-1）、转录激活因子（Smad）3、Smad4、Smad7mRNA及其蛋白的表达。

1.3 统计方法应用SPSS20.0统计软件行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，多重比较采用SND-t检验，两两比较采用t检验；计数资料比较采用2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组大鼠AST、ALT、GSH-PX、Hyp、SOD及MDA比较4组AST、ALT、GSH-PX、Hyp、SOD及MDA差异均有统计学意义（均P＜0.05）。秋水仙素组和羊栖菜多糖组大鼠血清中AST和ALT的活性均低于模型对照组（均P＜0.05）。血清中GSH-PX活性及肝组织中SOD的含量均高于模型对照组（均P＜0.05），肝组织中Hyp及MDA的含量均低于模型对照组（均P＜0.05），见表1。

2.2 4组大鼠ColⅠ、TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7mRNA和蛋白表达比较

4组肝组织ColⅠ、TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7 mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义（均P＜0.05）。秋水仙素组和羊栖菜多糖组肝组织ColⅠ、TGF-1、Smad3及Smad4mRNA和蛋白的表达均低于模型对照组（均P＜0.05），Smad7mRNA和蛋白的表达均高于模型对照组（均P＜0.05）。见表2～3。

2.3 3组肝星状细胞TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7mRNA和蛋白表达的影响秋水仙素组和羊栖菜多糖组肝星状细胞TGF-1、Smad3及Smad4mRNA和蛋白的表达均低于正常对照组（均P＜0.05），Smad7mRNA和蛋白的表达均高于正常对照组（均＜0.05）。见表4～5。

表1 4组大鼠血清AST、ALT、GSH-PX、Hyp、SOD及MDA比较

表2 4组大鼠肝组织ColⅠ、TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7mRNA表达比较

表3 4组大鼠肝组织TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7蛋白表达比较

表4 3组肝星状细胞TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7mRNA表达的影响

表5 3组肝星状细胞TGF-1、Smad3、Smad4及Smad7蛋白表达的影响

3 讨论

肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生。任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化的过程，如果损伤因素长期不能去除，纤维化长期持续就会发展成肝硬化。因此它不是一个独立的疾病，对于其治疗应当重视对各种原发病的防治，积极预防和治疗，减少致病因素[5]。目前临床上主要通过针对肝纤维化原发病和针对肝纤维化本身两种治疗方式。

羊栖菜多糖是经马尾藻科马尾藻属植物羊栖菜精制提取而成的一种羊栖菜提取物，一般有20%、40%和60%3种成分。张杰等[6]发现，羊栖菜多糖可通过上调糖尿病大鼠胰岛细胞中Glut-2mRNA表达，从而改善大鼠胰岛素抵抗、降低血糖。Kim等[7]发现，羊栖菜多糖可有效的抑制模型大鼠血中胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇的增长，升高高密度脂蛋白胆固醇的含量。张雪琴[8]等发现，羊栖菜多糖可有效的抑制HSC-T6增殖并能诱导其凋亡、减少MDA分泌及Ⅰ型胶原的表达，进而增加SOD的分泌，从而达到抗纤维化的的效果。

本文显示，羊栖菜多糖能有效改善肝功能，减轻肝组织病理损伤程度，对CCl4所致肝纤维化大鼠具有一定的保护作用，其机制可能与其抗自由基，抑制脂质过氧化有关；羊栖菜多糖可有效抑制大鼠肝星状细胞增殖[9]，调控Smad相关mRNA及蛋白的表达，减少细胞外基质的沉积，推测这是其抗肝纤维化的作用机制之一[10]。

综上所述，羊栖菜多糖能有效改善肝功能，减轻肝组织病理损伤程度，对CCl4所致肝纤维化大鼠具有一定的保护作用，可有效抑制大鼠肝星状细胞增殖，调控Smad相关mRNA及蛋白的表达，减少细胞外基质的沉积。

[1]ShokouhiS,RakhshanM,Gachkar L,etal. Accuracyofbiochemicalmarkersandplatelet countfordiagnosisof liver fibrosisstaging in patientswith liver fibrosis,loghmanhakim& taleghanihospitals,tehran,iran(2000-2004) [J].HepatitisMonthly,2007,7(4):190-197.

[2]严全能,陈均忠,陈晓文,等.羊栖菜多糖的分离纯化及其对小鼠免疫功能的影响[J].实用医学杂志,2008,24(12):2046-2048.

[3]姬云涛,王娟,张会,等.羊栖菜多糖抑脂沉积及其机制研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2015,24(1):40-42.

[4]蒋定文,沈先荣,贾福星,等.羊栖菜多糖的提取及纯化[J].食品科学,2007,28(12):136-138.

[5]薛风照,张慧,章建程,等.羊栖菜多糖及其络合物调节血脂功能的研究[J].海军医学杂志,2008,29(1):1-2.

[6]张杰,杨旭东,杨骄霞,等.羊栖菜多糖对糖尿病大鼠胰岛细胞葡萄糖转运蛋白-2表达的影响[J].中国食物与营养,2014, 20(9):76-78.

[7]Kim JW,Kwon YR,Youn KS,etal.Qualitycharacteristicsandantioxidantpropertiesinspray driedand freeze-dried powderpreparedwithpowderedseaweedextracts[J].Korean JournalofFood Science&Technology,2012,44(6):125-130.

[8]张雪琴,吴金明,黄智銘,等.羊栖菜多糖对内毒素诱导的大鼠肝星状细胞增殖活化、氧化损伤及凋亡的影响[J].世界华人消化杂志,2012,20(15):1333-1337.

[9]曹高忠,楚生辉,刘敏,等.羊栖菜多糖提取物急性毒性实验[J].医药导报,2009,28(12): 1549-1550.

[10]张荣信,杨文明,谢道俊,等.中药抗肝纤维化药理基础研究[J].中医药临床杂志,2014, 12(2):111-114.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.10.029

R575

A

1671-0800(2016)10-1317-03

2016-05-22

（本文编辑：孙海儿）

325000浙江省温州，温州医科大学附属第一医院

薛海波，Email:76899751@ qq.com