血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP联合诊断AD的初步研究

李宁侠，付 琳，董恒利，李 凯，李毓新

血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP联合诊断AD的初步研究

李宁侠，付 琳，董恒利，李 凯，李毓新

目的 探析血浆脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）与AD相关神经丝蛋白（AD7c-NTP）联合检测在阿尔茨海默病（AD）诊断中的应用价值。方法 选择西安医学院第二附属医院检验科与西安市北方医院神经内科收治53例AD患者作为观察组，另从同期来进行健康体检者中随机抽取53例作为对照组，比较两组血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP水平，并计算单纯Lp-PLA2与尿AD7c-NTP诊断AD的诊断率及二者联合诊断率。结果 观察组Lp-PLA2与AD7c-NTP水平均显著高于对照组（P＜0.01）；Lp-PLA2诊断AD的诊断率为71.7%（38/53），AD7c-NT为75.5%（40/53），均低于联合诊断的92.5%（49/53）（P＜0.05）。结论 L血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP联合诊断AD可有效避免漏诊，实现早期确诊，为患者预后改善奠定基础。

阿尔茨海默病；脂蛋白相关磷脂酶A2；AD相关神经丝蛋白；诊断

阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）为进行性神经系统变性疾病，与年龄有关。流行病学调查表明［1］，AD已成为死亡率位居第4位的疾病，仅次于心、脑血管疾病及肿瘤，我国60岁以上人群AD患病率达2%～5%。AD以记忆障碍伴认知障碍为核心症状，且起病隐蔽、病程呈不可逆发展，预后差，而早期诊治对改善患者生活质量及提高生存率意义重大，早期诊断方法的选择也因此成为临床热门研究课题。目前，临床主要以tau蛋白、血清β生物标志物A、神经心理学评分、影像学检查等作为AD诊断依据，但上述方法敏感性低、缺乏良好辨识率，多数患者就诊时往往已处于晚期，失去早期治疗机会。有研究提出［2］，AD相关神经丝蛋白（AD7c-NTP）在AD患者脑中呈分泌性上调表达；脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）为独立于心血管因素且与痴呆风险的炎症因子。本研究对血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP联合检测在AD诊断中的应用价值进行初步探索。

1 资料与方法

1.1 病例资料 选择西安医学院第二附属医院检验科与西安市北方医院神经内科2012年1月～2015年12月收治的53例AD患者作为观察组，另从同期进行健康体检者中随机抽取53例作为对照组。两组性别、年龄、空腹血糖、体质量指数、总胆固醇、白细胞计数、C反应蛋白等基线资料的差异无统计学意义（P＞0.05，表1）。

1.2 纳入标准 AD组纳入标准：（1）符合中华医学会精神科分会所制定 《中国精神障碍分类与诊断标准》［3］中AD标准诊断；（2）Hachinski缺血量表评分≤4分；（3）MMSE评分：文化程度中学以上≤24分，小学≤20分，文盲≤17分；（4）CDR评分1～2分；（5）签署知情同意书。对照组纳入标准：（1）智能检查正常；（2）签署知情同意书。

1.3 排除标准 （1）心电图、血常规、血压、血糖、血脂、维生素B12、甲状腺功能异常者；（2）合并肝肾障碍或内分泌疾病者；（3）头颅CT或MRI证实存在头颅占位性病变或感染者。

1.4 检测指标

1.4.1 Lp-PLA2 非空腹状态下采血，3000 r/min离心15 min，取上清置于EP管中，于-80℃下保存待测。应用Spectra Max M2酶标仪（美国Molecular Device公司生产）检测，标准品稀释与加样均按试剂盒（上海高创化学科技有限公司）说明书操作，加待测血清，并设置不加样品及酶标试剂的空白对照孔，用空白对照孔进行调零，测定450 nm波长下各孔吸光度（A值），并于加入终止液后15 min内完成测定。绘制标准曲线，计算Lp-PLA2值。

1.4.2 AD7c-NTP 应用Spectra Max M2酶标仪及AD7c-NTP酶联免疫检测试剂盒 （深圳市安群工程有限公司）检测。留取晨尿中段尿，混匀后首先观察，若尿液颜色很深或较浑浊则弃去，重新采集清亮合格尿标本，400 r/min离心5min，专用塑料试管将离心后尿液存于-20℃下待测，时间＜1 w。测定时首先将标本平衡至室温，按试剂盒说明书操作。测定450 nm波长处吸光度值，用试剂盒内所含AD7c-NTP标准品制备标准曲线，测定尿样本中AD7c-NTP浓度。每组标本重复测定3次，取平均值。

1.5 诊断标准 血浆Lp-PLA2诊断AD判定标准：Lp-PLA2＞45 ng/ml；尿AD7c-NTP诊断AD判定标准：AD7c-NTP＞1.44μg/L。

1.6 统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件进行分析，计数资料以例和百分率表示，行χ2检验；计量资料以±s表示，行成组t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血浆Lp-PLA2和尿AD7c-NTP水平比较观察组Lp-PLA2与尿AD7c-NTP水平均显著高于对照组（P＜0.01，表2）。

表2　-PLA2和尿AD7c-NTP水平比较（n=53）两组血浆Lp

2.2 血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP及二者联合诊断AD的诊断率比较 血浆Lp-PLA2和尿AD7c-NT诊断AD的诊断率均低于二者联合诊断（P＜0.05，表3）。

表3　血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP及二者联合诊断AD的诊断率比较

3 讨论

3.1 AD及其生物标志物研究现状 AD发病机制目前尚不明确，以β淀粉样蛋白毒性假说、突触功能障碍、tau蛋白过度磷酸化、线粒体损伤、神经递质障碍、细胞凋亡学说等假说为主［4］。目前临床常用AD生物标志物包括脑脊液标志物Aβ42、血液标志物载脂蛋白E等，其中Aβ42有较高诊断率，达80%～90%［5］，已得到广泛认可。但目前研究结果显示［6］，其敏感性与特异性均较差，推荐作为辅助诊断手段。2012年，国际AD协会多名专家呼吁着力探索AD血液学标志物，尤其对于疑似临床前期或轻度认知功能障碍诊断的标志物。

表1　 两组基线资料的比较（n=53）

3.2 Lp-PLA2诊断AD的价值分析 有研究将Lp-PLA2作为痴呆独立危险因素［7］，认为Lp-PLA2升高者发生痴呆概率更高。Lp-PLA2属磷脂水解酶家族，具水解血小板活化因子作用，为重要炎症因子之一。Lp-PLA2与低密度脂蛋白胆固醇结合易增加猝死风险。有研究发现［8］，AD早期病理主要表现为突触丢失及相关突触素下降，主要与Aβ沉积有关。而最新研究显示［9］，Lp-PLA2阻断剂可抑制Aβ所介导突触变性，诱导血小板活化因子产生，促进机体分泌地诺前列酮，抑制突触变性。本研究中，AD患者Lp-PLA2水平明显高于对照组，提示Lp-PLA2升高为AD患者重要病理改变之一。同时应用Lp-PLA2＞45 ng/m l作为标准所得AD诊断率为71.7%，提示将其作为AD诊断的生物标志物具有一定价值。值得注意的是，目前有关Lp-PLA2诊断AD的临界值并无统一结果，但不少临床研究显示［10］，智能正常人群Lp-PLA2往往≤45 ng/ml，因而本研究将其作为判定标准。俞春江等［11］的研究也发现，不同认知功能障碍患者Lp-PLA2水平差异较大，血管性痴呆最高、AD其次、轻度认知功能障碍最低。

3.3 尿AD7c-NTP诊断AD的价值分析 大量临床研究显示［12］，早期 AD患者AD7c-NTP明显升高。AD7c-NTP为神经丝蛋白家族成员，主要在组织学不完整变性神经元中表达。神经元细胞衰亡后，AD7c-NTP被释放至脑脊液并经尿液排出。AD早期，AD7c-NTP基因过度表达致AD7c-NTP免疫活性增强，引起细胞骨架病变。此外，AD7c-NTP过度表达还会引起线粒体功能受损，成为AD早期重要生物学事件，患者脑脊液及尿液中含量与AD严重程度呈正相关，利于病情评估。本研究中AD患者尿AD7c-NTP水平明显高于对照组，单独应用尿AD7c-NTP诊断AD诊断率为75.5%。尿AD7c-NTP检测具有无创性，易被老年患者及家属接受。

3.4 血浆Lp-PLA2与尿AD7c-NTP联合检测临床价值分析 为提高AD诊断诊断率，联合诊断已成为大势所趋。本研究将二者联合后所得诊断率高达92.5%（49/53），显著高于Lp-PLA2或尿AD7c-NTP单独检测，提示联合诊断意义重大。笔者认为，Lp-PLA2与AD7c-NTP分别从炎症反应及线粒体功能受损等不同方面进行诊断，由于不同患者发病机制不同，因而其主要病理改变也存在差异，若患者为突触功能障碍或神经递质障碍所致AD，则应用Lp-PLA2诊断可取得较好效果，尿AD7c-NTP无明显变化；若为线粒体损伤所致AD，则Lp-PLA2不明显。二者联合后，从不同病变发现病情并诊断，可避免漏诊，提高诊断准确性，临床价值更大。

综上所述，Lp-PLA2与AD7c-NTP水平改变为AD患者重要病理改变的体现，二者联合诊断AD可有效避免漏诊，实现AD早期确诊，为患者预后改善奠定基础。

［1］李妹.阿尔茨海默病患者体液生物标志物的研究进展［J］.国际检验医学杂志，2012，33（9）：1092-1095.

［2］夏鸣华，张玉琦，张峰，等.阿尔茨海默病患者尿中AD7c-NTP含量测定的意义［J］.江苏医药，2014，40（8）：926-927.

［3］中华医学会精神科分会.中国精神障碍分类与诊断标准［M］.3版.济南：山东科学技术出版社，2001：87-88.

［4］洪萍，王培昌.阿尔茨海默病蛋白标志物研究进展［J］.中华临床实验室管理电子杂志，2014，2（2）：28-30.

［5］曾瀛，徐丽君，唐震宇，等.阿尔茨海默病患者尿液中相关的神经丝蛋白的诊断价值［J］.中国老年学杂志，2013，33（13）：3058-3060.

［6］尹黎英，袁慧欣，张冀平，等.阿尔茨海默病相关的神经丝蛋白的早期诊断价值［J］.武警医学，2012，23（1）：28-29，34.

［7］白洁，徐亚茹，张艳丽，等.脂蛋白相关磷脂酶A2与非痴呆型血管性认知障碍的相关性 ［J］.中国老年学杂志，2014，22（12）：3260-3262.

［8］吕高萍，陈春莲，陆慧慧，等.可疑AD患者和抑郁性假性痴呆患者大脑血流速度的比较［J］.西南国防医药，2012，22（9）：932-934.

［9］郝建华，王田园，张然蓉，等.阿尔茨海默病患者AD7C-NTP和Aβ42检测的价值探讨［J］.现代检验医学杂志，2014，29（1）：44-47.

［10］蔡超群，周毅.尿AD7c-NTP联合血浆Hcy水平在老年性痴呆患者中的检测意义［J］.重庆医学，2013，42（16）：1865-1866.

［11］俞春江，刘伟，李峰，等.不同类型认知功能障碍患者的脂蛋白结合磷脂酶A2水平［J］.中国脑血管病杂志，2011，8（5）：243-247.

［12］白春艳，孙宏侠，刘敏，等.阿尔茨海默病患者尿中AD7c-NTP含量的研究［J］.中风与神经疾病杂志，2010，27（1）：8-11.

A preliminary study on plasma Lp-PLA2 combined with urinary AD7c-NTP in diagnosis of AD

Li Ningxia1，Fu Lin2，Dong Hengli1，Li Kai1，Li Yuxin1
1.Department of Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical College，Xi′an，Shaanxi，710038，China；2.Departmentof Neurology，Xi′an North Hospital，Xi′an，Shaanxi，710038，China

Objective To explore the application value of plasma lipoprotein associated phospholipase A2（Lp-PLA2）combined with AD associated neurofilament protein （AD7c-NTP）in the diagnosis of Alzheimer′s disease （AD）.Methods A total of 53 AD patientswho were admitted to Departmentof Laboratory of the Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical College and Department of Neurology in Xi′an North Hospital were selected to constitute an observation group；another 53 persons who underwent physical examination during the same period were random ly selected to constitute a control group.Plasma Lp-PLA2 and urinary AD7c-NTP levels in the two groups were compared.The diagnostic rates of simple Lp-PLA2 and urinary AD7c-NTP and the combination in AD were calculated.Results The levels of Lp-PLA2 and AD7c-NTP in the observation group were significantly higher than those in the control group（P＜0.01）.The accuracy rate of Lp-PLA2 in diagnosis of AD was 71.7% （38/53）while that of urinary AD7c-NT was 75.5%（40/53）which were lower than that of the combined diagnostic rate［92.5%（49/53）］（P＜0.05）.Conclusion The diagnosis of AD by Lp-PLA2 combined with AD7c-NTP can effectively avoid missed diagnosis，realize early diagnosis and lay foundation for the improvementof the prognosis of patients.

AD；Lp-PLA2；AD7c-NTP；diagnosis

R 745.1

A

1004-0188（2016）10-1099-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.10.003

2016-01-26）

710038西安，西安医学院第二附属医院检验科（李宁侠，董恒利，李 凯，李毓新）；西安市北方医院神经内科（付 琳）