RP—HPLC测定不同储藏温度的余甘子精粉中单宁酸没食子酸的含量变化

任娇　陈平　王芬　周国丽　范源

摘要：目的测定余甘子精粉在不同温度储藏下没食子酸、单宁酸活性成分的含量变化，分析余甘子精粉中活性成分最适宜的储存温度。方法将余甘子精粉分别置于30℃、5℃、-20℃环境下避光保存，利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）进行没食子酸、单宁酸含量测定。结果随储存温度的升高，余甘子精粉中没食子酸和单宁酸的含量从-20～5℃有所升高，从5℃～30℃之间都明显的下降。结论余甘子精粉中没食子酸和单宁酸在不同温度储存下含量不同，5℃时含量达到最高，可为余甘子精粉的储存及养护提供一定参考。

关键词：余甘子精粉；没食子酸；单宁酸；反相高效液相色谱

中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）10-0069-03

Determination of Tannins and Gallic Acid Content in Emblica Powder

at Different Storage Temperatures by RP-HPLC

REN Jiao1， CHEN Ping1， WANG Fen1， ZHOU Guoli1， FAN Yuan2

（1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan；

2. The First Affiliated Hospital of Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Ynnan）

【Abstract】Objective： To determine the content change of gallic acid and tannic acid activity in emblica powder stored at different temperatures and to analyze best storage temperature for active ingredients in emblica powder. Methods： Emblica powder was kept in dark place in 30℃， 5℃ and -20℃ of environment and RP-HPLC was used to determine gallic acid and tannic acid content. Results： With the increase of storage temperature， the gallic acid and tannic acid content in emblica powder increased from -20 to 5℃ to some extent and significantly decreased from 5℃ to 30℃. Conclusion： The gallic acid and tannic acid content in emblica powder is different at different storage temperatures. When stored at 5℃， its content is highest. The study can provide certain reference for the storage and conservation of emblica powder.

【Key words】emblica powder， gallic acid， tannic acid， RP-HPLC

余甘子（Fructus Phyllanthi）是大戟科（Euphorbiaceae）、叶下珠属（Phyllanthus）植物余甘子（Phyllanthus emblica L.）的果实。又名油甘子、滇橄榄、橄榄子、庵摩勒、久如拉、麻顶帮，气微、味甘、酸、涩，性凉。它在中国、印度、伊朗、阿富汗等17个国家的药物体系和我国中药、藏药、蒙药、傣药、维吾尔民族药等传统药物体系中应用极广。余甘子整株植物作为药食两用的植物，各个器官应用广泛，共涉及42种药用或保健功能[1]。作为一味重要的传统民族药，已被载入多版《中华人民共和国药典》[2]（以下简称《中国药典》）。

余甘子精粉是采用喷雾干燥技术，通过提取余甘子果实的有效成分而得到的一种速溶粉。余甘子精粉呈土黄色或浅黄色，含有丰富的维生素C、E多种氨基酸，富含鞣质、有机酸、酚类，还含有相当数量的能清除自由基的超氧化物歧化酶（SOD），其中每克含量高达482.14单位[2]。且无明显的毒副作用[3-4]。具有清热凉血、消食健胃、生津止渴、抗衰老、防癌症等多种保健与治疗的作用而广泛应用。

目前对余甘子精粉质量的控制多集中在黄酮和多糖类成分。酚类化合物是其药理作用的物质基础之一[5-7]，其中没食子酸、单宁酸为传统中药的常见酚类成分之一。

余甘子精粉在不同温度储存中活性成分易发生褐变对其产品的稳定性均有较大的影响。为提高余甘子精粉的利用，本实验采用反相高效液相色谱法测定在不温度储存条件下，余甘子精粉中单宁酸和没食子酸的含量[8]确定最适宜储存的温度。

2材料与方法

2.1实验试剂滇橄榄精粉样品（龙润集团有限责任公司）；单宁酸对照品和没食子酸对照品（索莱宝生物科技有限公司）；50%甲醇；0.2%磷酸（色谱纯）；甲醇（色谱纯）。

2.2仪器Agilent HP1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Agilent C18柱；电子天平CP114（奥豪斯仪器上海有限公司制造）；HH-S数显恒温水浴锅（金坛市正基仪器有限公司）；温度计；回流装置；抽滤器。

2.3HPLC的色谱条件

2.3.1 单宁酸的测定条件Agilent C18色谱柱；流动相 水：甲醇（20%：80%）；温度25℃；流速：0.5 mL/min；波长275 nm；进样量2 uL；时间：10 min。

2.3.2没食子酸的测定条件Agilent C18色谱柱；流动相 0.2%磷酸：甲醇（95%：5%）；温度25℃；流速1 mL/min；波长273 nm；进样量10 uL；时间15 min。

2.4对照品溶液的制备

2.4.1 单宁酸对照品溶液的制备精密称取0.00044 g单宁酸对照品，置于10 mL容量瓶中，用7 mL乙醇、2.9 mL水和0.1 mL丙酮的混合液定容，即得。

2.4.2没食子酸对照品溶液的制备精密称取0.0025 g没食子酸对照品，置于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，即得。

2.5样品溶液的制备

2.5.1单宁酸酸样品溶液的制备取适量余甘子精粉，过60目筛，精密称定3份5 g余甘子精粉，分别置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃环境下避光保存72 h，置具塞锥形瓶中，按料液比1：30加入60%乙醇浓度，称重，提取温度85℃、回流提取时间1.5 h[9]，再次称重，冷却至室温，用60%乙醇溶液补足失重，摇匀，真空抽滤一次，测量滤液体积，取2 mL续滤液用（0.45 um）微孔虑膜过滤，即得所需供试品。

2.5.2没食子酸样品溶液的制备取适量余甘子精粉，过60目筛，精密称定3份5 g余甘子精粉，分别置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃环境下避光保存72 h，置具塞锥形瓶中，精密加入250 mL的50%甲醇溶液，称重，回流提取1 h[10]，冷却至室温，再次称重，用50%甲醇溶液补足失重，摇匀，真空抽滤一次，测量滤液体积，取2 mL续滤液用（0.45 um）微孔虑膜过滤，即得所需供试品。

2.6标准曲线的制备单宁酸标准曲线的制备 精密称取对照品2.58 ug，置于10 mL容量瓶中，用乙醇、水、丙酮体积比为69.9、29.8、0.3%的溶液溶解并定容至刻度，摇匀，作为储备液。按上述单宁酸色谱条件分别取2、4、6、8、10 uL不同体积进样，以单宁酸的峰面积为纵坐标，以标准品的质量为横坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程y=5719.5x-1924.8，r=0.9974，结果表明：单宁酸峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为0.516～2.58ug。

没食子酸标准曲线的制备 精密称取对照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，摇匀作为储备液。分别精密吸取0.1、0.5、1、2、4 mL于10 mL容量瓶中，50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即配制成浓度为1、5、10、20、40 ug/mL的标准溶液。按上述色谱条件进样20 uL，以没食子酸的峰面积为纵坐标，标准品的浓度为横坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程y=114.7x+2.4554，r=0.9999，结果表明：没食子酸峰面积值与浓度有良好的线性关系，线性范围为1～10 ug/mL。

3实验结果见表1-3及图1-2。

4结论

以上实验数据可以看出：不同温度储存下余甘子精粉中的单宁酸、没食子酸活性成分会发生变化，其中较高温易促使单宁酸、没食子酸等活性物质含量下降，当储存温度在5℃时单宁酸、没食子酸的含量最高。

近年来世界卫生组织已将余甘子指定为世界广泛种植的3种保健植物之一[11-13]。我国目前余甘子精粉产量较大，应用广。如果不注重储存的温度，可导致余甘子的褐变，影响到余甘子产品的质量。本实验利用反相高效液相色谱法对其不同温度储存下的含量测定，研究并分析余甘子精粉适宜的储存温度，可以较好的保证其质量，为余甘子精粉的储存及养护提供一定参考。

参考文献：

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