甲胎蛋白、α-L-岩藻糖苷酶和高尔基体蛋白73检测在原发性肝癌诊断中的意义

卢青云，张文杰，王　沛，强永杰

甲胎蛋白、α-L-岩藻糖苷酶和高尔基体蛋白73检测在原发性肝癌诊断中的意义

卢青云，张文杰△，王沛，强永杰

（甘肃省第二人民医院检验科，甘肃 兰州 730000）

探讨血清中甲胎蛋白（AFP）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）和高尔基体蛋白73（CP73）在原发性肝癌诊断中的意义。对原发性肝癌患者（55例）、良性肝病患者（60例）、健康体检者（60例）共175个血清样本，采用化学发光法检测各组甲胎蛋白含量，用速率法测定α-L-岩藻糖苷酶含量，用酶联免疫吸附法测定GP73含量。原发性肝癌组血清AFP、AFU和GP73含量均显著高于其他各组，差异有统计学意义 （P＜0.05）；原发性肝癌患者血清AFP、AFU和GP73阳性率分别为65.6%、74.9%、83.2%，AFP、AFU和GP73联合检测阳性率可提高到95.2%。联合检测AFP、AFU 和GP73可提高原发性肝癌的诊断效率，尤其是AFP阴性原发性肝癌的诊断效率，对原发性肝癌的早期诊断有一定指导意义。

原发性肝癌；甲胎蛋白（AFP）；α-L-岩藻糖苷酶（AFU）；高尔基体蛋白73

原发性肝癌（Primary hepatic cancer，PHC）指肝细胞或肝内胆管细胞发生癌变，是临床上常见的消化系统恶性肿瘤之一。我国是肝癌大国，且发病率仍在呈上升势头［1］。由于肝癌发病较为隐袭，早期诊断困难，大多数患者在确诊时已到中晚期，治疗难度大，术后易复发及发生远处转移，预后较差，患者生存期短。因此早发现、早诊断、早治疗是提高肝细胞癌患者生存率的最佳途径［2］。被广泛认可的原发性肝癌血清标志物是是甲胎蛋白（AFP），但其在病毒性肝炎和慢性肝脏疾病中亦可见不同程度升高，临床检测的敏感度较低。随着蛋白组学技术的发展，近年来发现高尔基体蛋白73（GP73）、a-L岩藻糖苷酶（AFU）在原发性肝癌中呈高表达，广泛用于原发性肝癌早期诊断［3］。本研究以原发性肝癌，良性肝病，健康对照样本为试验材料，分别以放射免疫法、速率法及酶联免疫吸附试验测定血清中AFP、AFU和GP73含量，探讨三项联合检测在原发性肝癌诊断中的临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料

本研究选取我院2013年1月-2013年12月住院患者血清标本115例，年龄在20～69岁（46.63±13.69），其中男性70例，女性45例，包括原发性肝癌55例，良性肝病60例。原发性肝癌诊断根据中国抗癌协会肝癌专业委员会（2001）修订的《原发性肝癌的诊断与分期标准》进行［4］。肝硬化和肝炎的诊断按照中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会（2000）联合修订的《病毒性肝炎防治方案》进行［5］。选择本院同期体检健康者60例，年龄在22～72岁（44.65±14.59），其中男性30例，女性20例，病毒检测和ALT等检测项目均为阴性，排除相关肝病。

1.2方法

所有受试者均于清晨空腹抽取静脉血3mL，分离血清检测。GP73测定采用酶联免疫吸附法（ELISA），试剂盒购自上海泛柯生物公司。测量仪器为美国BioTck公司ELX800酶标仪和Bio-Rad1575洗板机，美国雅培I2000全自动免疫分析仪及配套试剂，肝癌判断值为≥90μg/L。AFP测定采用化学发光免疫分析法，测量仪器为BECKMANAcess化学发光仪，配套试剂肝癌判断值为≥200μg/L。AFU测定采用速率法，测量仪器为日本奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪及宁波美康生物科技有限公司试剂盒检测，肝癌判断值为≥45U/L。

1.3统计学处理

各组数据均以平均数（x）±标准差（s）表示。用SPSSI7.0统计软件对数据进行t检验和P值，P＜0.05为差异有统计学意义。

各组血清AFP、AFU和GP73含量比较：PHC组血清AFP、AFU和GP73含量均明显高于良性肝病组及健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），检测结果见表1。

2　结果

表1　三组血清AFP、AFU、GP73检测结果比较（±s）

表1　三组血清AFP、AFU、GP73检测结果比较（±s）

?

原发性肝癌组血清AFP、AFU和GP73检测阳性率：AFP阳性率为65.6%，AFU阳性率为74.9%，GP73阳性率为 83.2%。三项联合检测阳性率为95.2%。

3　讨论

原发性肝癌（PHC）是亚洲人和非洲人的主要死因。影像学技术检测用于诊断肝癌仍然有很多的局限性，使很多患者未能及时得到准确诊断，失去了最佳的治疗时机。

AFP是一种糖原蛋白，由590个氨基酸残基组成，属于类白蛋白家族，具有免疫调节和调控细胞增殖等作用。在哺乳动物的胚胎期，主要由肝脏实质细胞和卵黄囊细胞合成。出生后不久AFP的产生迅速降低，以后完全被白蛋白替代。血清AFP作为肝癌的普查、诊断及疗效随访观察指标已多年，但高分化或分化很差的肝癌细胞常不产生AFP，仍有30%左右的肝癌患者AFP在正常范围内［6］。而且部分肝炎和肝硬化患者可出现AFP的一过性升高，女性妊娠期，AFP也会出现生理性升高。有研究认为，AFP作为肝癌早期诊断指标，敏感度为39%～64%，特异度为76%～91%，阳性预测值为9%～32%［7，8］。因此单纯使用AFP监测原发性肝癌的发生、发展已经不能满足临床需要，很容易造成漏诊和误诊。

AFU是一种能分解蛋白糖链中岩藻糖苷键的溶酶体酶，广泛存在于哺乳动物的细胞和体液中，参与含岩藻糖基的糖肽、糖脂、低聚糖等生物活性大分子的分解代谢。1984年Deugnier等发现PHC患者血清AFU活性明显升高。国内外已有文献表明，原发性肝癌患者的血清AFU活性不仅高于健康人，而且显著高于肝硬化患者等，是又一诊断PHC的敏感指标［9］。血清AFU升高对血清AFP阴性和低水平的PHC有较高的诊断意义，尤其对肝细胞癌早期诊断更有价值，与AFP检测有互补性。AFU对原发性肝癌的诊断阳性率为64%～81.2%，特异性为90%左右［10］。

GP73是存在于高尔基体的一种跨膜糖蛋白，相对分子量为73Kd［11］。在正常的人体肝组织中GP73主要由胆管上皮细胞表达，肝细胞很少甚至不表达。机体正常情况下，GP73是高尔基体顺面膜囊上的一种整合膜蛋白，疾病状态时候GP73可从游离于胞内体以及细胞表面［12］，BLOCK等［13］研究发现在肝细胞癌中GP73表达异常活跃，可能原因是急性肝细胞损伤触发和慢性肝脏组织的重构和纤维化。GP73诊断肝癌的敏感性为69%，特异性为75%，对于早期肝癌的诊断，GP73的敏感性（62%）显著优于AFP（25%）［14］。朱国民等（2010）应用双抗体夹心酶联免疫定量测定方法检测肝癌、慢性肝炎血清中GP73含量，结果发现GP73以作为恶性肝病的独立指标与AFP互补应用于临床，具有更高的灵敏度，可提高原发性肝癌的诊断率。

本研究通过检测各组血清中AFP、AFU和G P73浓度，探讨它们作为原发性肝癌临床诊断标志物的可靠性，结果支持它们都具有较好的诊断效果；分析三者单独和联合检测结果，由于每一项单项检测均存在一定的假阴性，所检PHC的阳性率分别是AFP阳性率为65.6%，AFU阳性率为74.9%，GP73阳性率为83.2%，而三项联合检测可优势互补，大大提高了PHC检出的敏感度和准确度，阳性率可达95.2%，明显高于单项

检测的阳性率。因此，我们认为血清AFP、AFU和GP73三项联合检测有助于提高原发性肝癌的诊断率，及早采取有效治疗措施改善患者预后。

［1］ 蔡永娥，乔建锦，孙晓茹，等.我国原发性肝癌研究进展［J］. 2008，16（1）：141.

［2］Colombo M.Screening and diagnosis of hepatocellular carci noma［J］.LiveiIntemaional，2009，29（S1）：143.

［3］ StefaniukP，CianciaraJ，Wiereinska-DrapaloA，Presentand futurepossibilitiesforearlydiagnosisofhepatocellularcali noma［J］.WorldJournalofGastroenterology.2010，28，16（4）：418.

［4］ 中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准［J］.中华肝脏病杂志，2001，9（6）：324.

［5］ 中华医学会传染病与寄生虫病学分会和肝病学分会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8（6）：324.

［6］ Yamamoto K，Imamura H，Matsuyama Y，et a1.AFP，AFPL3，DCP，and GP73 as markers for monitoring treatment re sponse and recurrence and as surrogate markers of clinico pathologicalvariables of HCC［J］.Journal of Gastroenterolo gy，2010，45（12）：1272—1282.

［7］ PATERON D，GANNE N，TRINCHET J C，et al.Prospective studyofscreeningforhepatocellularcarcinomainCaucasion patientswithcirrhosis［J］.JHepatol，1994，20（1）：65-67.

［8］ZOLI M，MAGALOTTI D，BIANCHI G，et al.Efficacy of a surveillanceprogramfor early detection of hepatocellular car cinoma［J］.Cancer，1996，78（5）：977-985.

［9］ 魏学，王少斌，尚静安.原发性肝癌诊断中血清α-L-岩藻糖苷酶的价值［J］.中华肿瘤杂志，2002，22（2）：148-150.

［10］赵平，王江滨，张爱国，等.α-L-岩藻糖苷酶对原发性肝癌的诊断价值的探讨［J］.临床肝胆病杂志，2003，19（2）：109-110.

［11］KLADNEYRD，BULLAGA，GUOL，etal.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection［J］. Gene，2000，249（1/2）：53-65.

［12］孔祥亘，韩绍磊，郑昭敏，等.高尔基体蛋白73联合甲胎蛋白异质体在原发性癌诊断中的价值［J］.山东大学学报（医学版），2011，49（4）：110.

［13］BLOCKTM，COMUNALEMA，LOWMANM，etal.Useof targetedglycoproteomicstoidentifyserumglycoproteinsthat correlatewithlivercancerinwoodehuksandhumans［J］.Proc NatlAcadSciUSA，2005，102（3）779-784.

［14］MarreroJA，RomanoPR，NikolaevaO，etal.GP73，aresident golgiglycoprotein，isanovel serummarkerforhepatocellular carcinoma［J］.JHepatol，2005，43（6）1007-1012.

张文杰，13919259897。