不同产地黄芩对发热模型大鼠体温及血清中IL-1β、PGE2的影响*

杨志军，郭　胜，杨秀娟，栗会静甘肃中医药大学，甘肃兰州730000；2兰州石化总医院



不同产地黄芩对发热模型大鼠体温及血清中IL-1β、PGE2的影响*

杨志军1，郭胜2△，杨秀娟1，栗会静1
1甘肃中医药大学，甘肃兰州730000；2兰州石化总医院

目的：研究不同产地黄芩水煎液对脂多糖（LPS）诱导的发热模型大鼠的解热作用及机制。方法：将筛选合格的80只大鼠随机分为8组，即生理盐水组、模型组及河北承德、陇西、渭源产黄芩的高、低剂量组。黄芩水煎液灌胃给药2天后，LPS腹腔注射诱导大鼠发热模型，再灌胃给药1天。检测各组大鼠在不同时间点的升温值及血清中IL-1β、PGE2的含量。结果：与生理盐水组比较，模型组大鼠的升温值、IL-1β、PGE2含量显著升高（P＜0.05）；各给药组大鼠在不同时间点的升温值及IL-1β、PGE2含量显著低于模型组（P＜0.05）；同一产地黄芩高剂量组大鼠在2、3、4小时的升温值及血清中IL-1β、PGE2含量显著低于低剂量组（P＜0.05）；不同产地高剂量组间比较，在3、4小时时河北承德组大鼠升温值显著低于陇西、渭源组，河北、渭源组IL-1β含量显著低于陇西组，河北、陇西组PGE2含量显著低于渭源组（P＜0.05）。结论：不同产地黄芩水煎液均有显著的解热作用，河北承德黄芩水煎液的解热效果优于甘肃陇西、渭源黄芩，高剂量组解热效果优于低剂量组；抑制IL-1β、PGE2的释放可能是黄芩发挥解热作用的机制之一。

黄芩；体温；IL-1β；PGE2；道地药材

黄芩始载于《神农本草经》，被列为中品。本品性味苦寒，具有泻火解毒、清热燥湿、止血、安胎等功效，应用于临床已有二千多年历史。近年来，黄芩在甘肃多地广泛种植，且面积大、产量高、疗效好，被确定为甘肃“十大陇药”之一。本实验通过研究不同产地黄芩对LPS诱导的发热模型大鼠体温及血清中IL-1β、PGE2含量的影响，比较甘肃产黄芩与道地产区黄芩在解热作用方面的差异，为临床用药提供依据。

1　材料与方法

1.1实验动物SPF级Wistar大鼠，雄性，体质量（200±20）g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（甘）2011-0001。

1.2药物与试剂河北承德产黄芩，购自河北安国药市；甘肃陇西、渭源产黄芩，于10月底在当地采集，经甘肃中医药大学杜弢教授鉴定均为两年生唇形科植物黄芩S cutel laria baicalensis Georgi的根；脂多糖（LPS）（Sigma公司生产，批号L2880）；白细胞介素1-β（IL-1β）试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号20130402B）；前列腺素E2（PGE2）试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号：20130402B）。

1.3主要仪器80-2型离心沉淀器（江苏省金坛市医疗仪器厂提供）；BS110S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司提供）；T101电子体温计（爱奥乐公司提供）；恒温水浴锅（江苏金坛大地仪器厂提供）；eppendorf Research可调式微量移液器（No 5.531.131）；MODEL680-酶标仪（美国伯乐公司提供）。

1.4药物制备分别将不同产地的黄芩除去杂质，洗净。大小分档，置蒸制容器内隔水加热，蒸至“圆气”后半小时，等质地软化，取出，晾干，切制成片。称取炮制后的黄芩，第1次加10倍量的水浸泡30分钟，文火煎煮50分钟，过滤，再加8倍量的水，文火煎煮40分钟，过滤，合并两次滤液。将滤液水浴浓缩为含生药1g/m L的药液，高压灭菌，4℃以下储存备用。

1.5试剂配制实验前2小时取出冷藏的LPS，精密称取4mg于100mL的容量瓶中，加生理盐水使其溶解，定容，配成40μg/mL的溶液备用。

1.6分组、造模SPF级Wistar大鼠，雄性，共100只，适应性喂养3天。连续测肛温3天，选取3天内体温变化不超过0.3℃的大鼠80只，随机分为8组，即生理盐水组、模型组及河北承德产黄芩高、低剂量组，陇西产黄芩高、低剂量组，渭源产黄芩高、低剂量组。生理盐水组、模型组大鼠灌胃生理盐水0.02mL/g，其余各组分别给予河北、陇西、渭源产黄芩水煎液，高剂量组每只按10g/kg灌胃，低剂量组每只按5g/kg给药。连续给药2天，1次/d。第3天造模前10小时禁食不禁水，每隔0.5小时测大鼠肛温1次，连续测3次，取平均值作为基础体温。生理盐水组大鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液2.5mL/kg，其余各组大鼠均腹腔注射脂多糖（LPS）100μg/kg［1］。造模2小时后，各组大鼠灌胃黄芩水煎液，剂量同前。

1.7体温测定分别于灌胃给药后1、2、3、4小时监测记录各组大鼠体温，计算各组大鼠在各监测点的升温值（升温值=实测体温-基础体温）。

1.8样品的制备体温测定后从大鼠股动脉取血，静置半个小时后以3000 r/min离心10分钟，吸取血清备用。

1.9血清中IL-1β、PGE2的含量测定严格按照ELISA试剂盒说明书检测血清中IL-1β、PGE2含量。

1.10统计学方法采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析，计量资料以（χ±s）表示，采用方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1各组药物对发热大鼠体温的影响与生理盐水组比较，模型组大鼠升温值高于生理盐水组（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组大鼠在1、2、3、4小时升温值低于模型组（P＜0.05）；同一产地组间比较，在2、3、4小时时黄芩高剂量组大鼠升温值均低于低剂量组（P＜0.05）；不同产地高剂量组间比较，在3、4小时时河北产黄芩高剂量组大鼠升温值低于陇西、渭源组（P＜0.05），见表1。

2.2各组药物对血清中IL-1β含量的影响与生理盐水组比较，模型组大鼠IL-1β、PGE2含量均升高（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组IL-1β、PGE2含量均降低（P＜0.05）；同一产地组间比较，高剂量组大鼠IL-1β、PGE2含量都低于低剂量组（P＜0.05）；高剂量组间比较，河北、渭源组IL-1β含量低于陇西组（P＜0.05），河北、陇西组PGE2含量低于渭源组（P＜0.05），见表2。

3　讨论

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根［2］，主要分布于河北、内蒙古、甘肃等地，河北承德为本品道地产区，其所产黄芩俗称热河黄芩。《千金翼方》云：“黄芩……产于宁州（今甘肃宁县）、泾州（今甘肃泾川县）”［3］，指出甘肃亦为黄芩的主要产区之一。甘肃省自2003年开始扩种黄芩，种植面积逐年递增［4］，甘肃渭源、陇西两县成为黄芩主要产区。本实验主要研究河北承德、甘肃陇西和渭源3个不同产地的黄芩水煎液的解热作用及机制。

脂多糖（LPS）是革兰氏阴性杆菌的内毒素的活性成分，是效应较强的杆菌致热源，是经典的炎性发热模型，常用于筛选解热药物并探讨炎性发热机制。由于该模型具有自限性和耐受性，因此在用于起效较慢的中药解热药效研究时，应在诱导发热模型前即开始给予中药［5］。外源性致热原进入机体，作用于巨噬细胞、淋巴细胞、单核细胞等免疫活性细胞，产生大量致热性细胞因子，这些细胞因子直接或间接通过中枢介质作用于体温调节中枢，使体温调定点上移，产热增加，散热减少，使体温在一个新的调定点达到平衡［6］。IL-1β是目前较为公认的参与多种致热原性发热的重要细胞因子，与其他细胞因子一起经不同途径刺激中枢介质PGE2的释放，进一步刺激体温调节中枢，引起发热［7］。

本实验证实，不同产地黄芩水煎液对LPS诱导的发热大鼠均有显著的解热作用，高剂量黄芩水煎液解热效果优于低剂量，而河北承德产黄芩解热效果略优于甘肃陇西、渭源产黄芩。黄芩水煎液可能通过抑制炎性细胞因子IL-1β的释放，减少体温正调节介质PGE2的生成，从而发挥解热作用。

表1　各组药物对发热大鼠体温的影响（s）

表1　各组药物对发热大鼠体温的影响（s）

注：与生理盐水组比较，#表示P＜0.05；与模型组比较，*表示P＜0.05。

组别例数给药量/（g·kg-1）不同时间点升温值/℃1h 2h 3h 4h生理盐水组10-0.18±0.08*0.20±0.05*0.15±0.12*0.16±0.09*模型组10-0.60±0.09#1.27±0.08#1.73±0.06#1.80±0.08#河北产黄芩低剂量组10 5 0.33±0.09*0.73±0.08*1.01±0.11*1.16±0.15*河北产黄芩高剂量组10 10 0.27±0.16*0.42±0.09*0.71±0.03*0.68±0.06*陇西产黄芩低剂量组10 5 0.45±0.01*0.90±0.14*1.25±0.10*1.23±0.11*陇西产黄芩高剂量组10 10 0.30±0.05*0.48±0.10*0.96±0.10*0.92±0.13*渭源产黄芩低剂量组10 5 0.40±0.10*0.82±0.10*1.24±0.09*1.19±0.11*渭源产黄芩高剂量组10 10 0.25±0.08*0.45±0.07*0.91±0.11*0.79±0.12*

表2　各组大鼠血清中IL-1β、PGE2的含量（s）

表2　各组大鼠血清中IL-1β、PGE2的含量（s）

注：与生理盐水组比较，#表示P＜0.05；与模型组比较，*表示P＜0.05；“-”表示该组大鼠灌胃生理盐水0.02mL/g。

组别例数给药量/（g·kg-1）IL-1β/（pg·mL-1）PGE2/（pg·mL-1）生理盐水组10-17.29±0.28 165.84±5.49模型组10-31.69±1.59#213.57±6.52#河北黄芩低剂量组10 5 24.17±0.31*188.77±10.74*河北黄芩高剂量组10 10 17.35±0.27*174.81±6.88*陇西黄芩低剂量组10 5 26.46±0.34*190.35±8.97*陇西黄芩高剂量组10 10 22.80±0.68*175.84±3.15*渭源黄芩低剂量组10 5 26.13±0.23*202.59±7.72*渭源黄芩高剂量组10 10 17.74±0.44*187.81±15.84*

［1］左泽平，王志斌，高阳，等.柴胡注射液对LPS发热大鼠解热机制的研究［J］.中药药理与临床，2012，28（4）:57-60.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京:中国医药出版社，2010:282-283.

［3］孙思邈.千金翼方（影印本）［M］.北京:人民卫生出版社，1982：51.

［4］崔璐，路俊仙，林慧彬，等.我国黄芩资源及生产现状调查研究［J］.时珍国医国药，2009，20（9）:2279-2280.

［5］高琳，谢鸣，孙明瑜，等.柴芩合煎液与分煎液对LPS诱导的大鼠发热模型的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2003，9（6）: 22-25.

［6］李楚杰.发热时体温的正调节和负调节［J］.中国病理生理杂志，1994，10（5）:553-557.

［7］汤毅珊，王宁生，张银卿.雄黄及含雄黄复方对炎症介质IL-1β，IL-6，TNF-α和NO的影响［J］.中药药理与临床，2007，23（5）: 107-110.

Effectsof HuangQin from Different Producing Areason Body Temperature，the Levelsof IL-1βand PGE2of Rats with Fever

YANG Zhijun1，GUO Sheng2△，YANG Xiujuan1，LIHuijing1
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China；2 General Hospital of Lanzhou Petrochemical Company

Objective:To study antipyretic effectsand themechanism of the decoction of HuangQin（Scutellaria baicalensis Georgi）from different producing areas on lipopolysaccharide（LPS）-induced ratmodelwith fever. Methods:Eighty ratswere randomized into eightgroups:physiologicalsalinegroup，themodel group，high and low dosesgroupsof HuangQin from Chengde，Longxi and Weiyuan.A fter intragastric adm inistration of HuangQin decoction for two days，the ratmodelw ith feverw as induced by peritoneal injection of LPS，and they received intragastric adm inistration for one day.The contents of IL-1βand PGE2and the tem perature rise atdifferent timesof the rats in different groupsw ere detected.Results:Com pared w ith physiological saline group，the contents of IL-1βand PGE2and the temperature risenotably raised in themodelgroup（P＜0.05）；these indexesatdifferent times in themedication groupswere lower than theseof themodel group significantly（P＜0.05）；the contents of IL-1βand PGE2and the temperature rise in two hours，threehoursand fourhours in thehigh dosegroup of HuangQin from the same producing areawere lower than these of the low dose group apparently（P＜0.05）；the comparison among high doses groups of HuangQin from different producing areas showed that the temperature rises at three and four hours in Chengde group were notably lower than these of the Longxi group and Weiyuan group，the contents of IL-1βin Chengde group and Weiyuan group were low er than these of Longxi group notably，the contentsof PGE2in Chengde group and Longxi group were lower than these of Weiyuan group significantly（P＜0.05）.Conclusion:The decoction of HuangQin from different producing areas presents notable antipyretic effects，antipyretic effects of HuangQin from Chengde are superior to these of HuangQin from Longxi and Weiyuan，the effectsof high dose group are superior to these of low dose groups；inhibiting the release of IL-1βand PGE2m ight be one of the mechanisms of HuangQin bringing antipyretic effects into play.

HuangQin；body temperature；IL-1β；PGE2；genuineherbs

R285.5

A

1004-6852（2016）03-0005-03

2015-10-20

甘肃省高校基本科研业务费项目（编号BH2012-020）。

杨志军（1971—），女，在读博士研究生，副教授。研究方向：中药及复方的药效及不良反应。

△郭胜（1971—），男，副主任医师。研究方向：消化系统疾病的中西医结合诊治。