TLC法鉴别复方罗汉果止咳颗粒中的枇杷叶*

龙永诚，黎　霜，韦忠孙，罗　强，覃怀宁，马剑霜桂林中族中药股份有限公司，广西桂林54800；桂林电子科技大学生命与环境科学学院



TLC法鉴别复方罗汉果止咳颗粒中的枇杷叶*

龙永诚1，黎霜2△，韦忠孙1，罗强2，覃怀宁2，马剑霜1
1桂林中族中药股份有限公司，广西桂林541800；2桂林电子科技大学生命与环境科学学院

目的：复方罗汉果止咳颗粒中枇杷叶的鉴别。方法：采用薄层色谱方法，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水（19∶45∶26∶10）为展开剂，硅胶G为固定相，喷以10%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视薄层斑点。结果：薄层色谱图中，样品溶液在对照品、对照药材相应的位置上，分别显相同颜色的紫红色斑点。阴性样品无相同斑点。结论：本法简便、准确，可用于复方罗汉果止咳颗粒中的枇杷叶的鉴别。

薄层色谱法（TLC）；复方罗汉果止咳颗粒；枇杷叶

复方罗汉果止咳颗粒制剂，涉及6味药材，化学成分复杂，结构多样，而其现行质量标准，检测项目仅有性状和颗粒剂常规检查两项［1］。药材在种植过程中易受种植区域、气候条件、采收时间等多种因素的影响，如未能有效控制其质量，会给服药患者带来安全隐患。为保证该品种的有效性、安全性和可控性，本研究采用薄层色谱法对制剂中的枇杷叶进行鉴别研究，为进一步完善其质量标准提供科学依据。

1　材料与方法

1.1仪器与试剂S ar torius200型电子天平；奥林巴斯相机；水浴锅；分液漏斗、玻璃板等；乙醚、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲苯、甲酸等均为分析纯，实验用水均为纯化水；硅胶G（青岛海洋化工厂，簿层色谱用）。

1.2样品与标准品标准品：熊果酸（中国生物制品研究院提供，批号：110742-201220）；枇杷叶（中国生物制品研究院提供）。样品：市售复方罗汉果止咳颗粒3批，分别为GG JS-140301，NNWW-130701，GLZZZ Y-130301。阴性样品：取枇杷叶、百部、桑白皮、白前、桔梗等5味药材，按照相同的提取制备工艺，制备得缺枇杷叶的阴性样品（桂林中族中药股份有限公司制备）。

1.3实验方法

1.3.1供试品溶液的制备取样品20g，加水40mL，超声处理5分钟，用乙醚振摇提取3次，40mL/次，弃去乙醚溶液，取水层加0.5gNaOH，摇匀，用水饱和的正丁醇提取2次，30mL/次，合并正丁醇，水洗至中性，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，即得。

1.3.2对照溶液的制备

1.3.2.1对照药材溶液的制备取枇杷叶对照药材1g，加水100mL，煎煮30分钟，冷却后过滤，取滤液加0.5gNaOH，摇匀，用水饱和的正丁醇提取2次，30mL/次，合并正丁醇，水洗至中性，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，即得。

1.3.2.2对照品溶液的制备取熊果酸对照品0.2mg，加1mL甲醇，使溶解，即得。

1.3.2.3阴性样品溶液的制备取阴性样品20g，按供试品溶液项下的方法制备得阴性样品溶液。

1.3.2.4实验条件展开剂：三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=19∶45∶26∶10。薄层板：硅胶G板。点样量：10μL。显色：喷10%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

2　结果

色谱图中，样品溶液在与对照药材相应的位置上，显1个相同的紫红色斑点，对照品相应的位置上显相同的紫红色斑点，阴性样品无干扰，见图1。

图1　枇杷叶薄层色谱图

色谱图中，从左到右分别是：阴性样品，枇杷叶对照药材，供试品，熊果酸对照样品。

3　讨论

由于吸附剂对不同化合物吸附力大小的不同，当有溶液流过时，具有微小差异的物质在吸附剂之间发生连续不断的吸附、解吸、再吸附、再解吸，从而达到分离［2］。复方罗汉果止咳颗粒中含有六味药材，成分复杂，本实验选择薄层色谱的方法对其中的枇杷叶进行定性鉴别。

枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Eriobotryaja Pon.ica（T hunb.）I，indl的干燥叶，具有清肺止咳，降逆止呕之功效，常用于肺热咳嗽，气逆喘急，胃热呕逆，烦热口渴等症状［3］。相关研究［4-6］在对枇杷叶的化学成分分析中发现其主要活性成分为皂苷类、黄酮类物质。因此，本实验在研究样品的前处理方法时，选择了两种不同方法［7-8］：1）取样品20g，研细，加乙醇40mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，20mL/次，取水层溶液加正丁醇振摇提取2次，20mL/次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，30mL/次，分取正丁醇液，回收至干。2）取样品20g，加水40mL，超声处理5分钟，使均匀，用乙醚振摇萃取3次，40mL/次，弃去乙醚层备用；合并水层，加0.5gNaOH使溶解，摇匀，水层溶液加水饱和的正丁醇提取2次，30mL/次；合并正丁醇液，水洗至中性，水浴蒸干。实验结果表明，后一种方法中以熊果酸为代表的主要活性成分得到了较好的富集，在薄层色谱鉴别中展现出少而清晰的斑点。

正丁醇为极性较大的溶剂，根据“相似相溶”原理，以此为介质萃取到的物质极性应当处于大极性范围。因此，在选择薄层色谱的固定相、展开剂时，主要考虑较大极性的吸附剂、溶剂，通过文献研究［7-9］，分别选择了三氯甲烷-甲醇-水、氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水、环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸等3种展开剂体系对供试品溶液进行薄层色谱法实验，经过实验比较、验证，以硅胶G为吸附剂，三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=19∶45∶26∶10为展开剂时，得到良好的分离效果，样品和枇杷叶对照药材在相应的位置上，显1个相同颜色的斑点，在和熊果酸对照品相同的位置上显相同颜色的斑点，缺枇杷叶的阴性样品无干扰。

由于购买到的枇杷叶对照药材量不足，使得对照药材斑点不够明显；所用薄层板为实验室手工铺制，对物质的分离有一定的影响。

本研究结果可用于复方罗汉果止咳颗粒制剂中枇杷叶药材的定性鉴别，方法准确、简便、快速，可收录于质量控制标准中。

［1］董莹，郭伟.《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂：第三册［J］.中国中药杂志，1991，16（12）：118.

［2］许瑞庭.实用药物分析化学［M］.杭州：浙江科学技术出版社，1992:513.

［3］国家药典委员会.中国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：190.

［4］吕寒，李维林，裴咏萍，等.枇杷叶中黄酮类化学成分的HPLC-MSn分析［J］.现代中药研究与实践，2009，23（6）:56-58.

［5］吕寒，陈剑，李维林，等.枇杷叶中三萜类化学成分的研究［J］.中药材，2008，31（9）：1351-1354.

［6］陈欢.枇杷叶化学成分及抗癌活性的研究［D］.北京：北京化工大学，2012.

［7］刘军.枇杷止咳颗粒质量标准的修订及指纹图谱研究［D］.合肥：安徽医科大学，2011.

［8］谢周涛，胡进.复方枇杷桔梗膏质量标准研究［J］.中国药业，2014，23（8）:26-28.

［9］李茂森.含枇杷叶的中成药薄层色谱鉴别探讨［J］.中国药品标准，2003，4（2）：64.

Determ ination of Loquat Leaves in Compound LuoHanGuo ZhiKe Granulesby TLC

LONG Yongcheng1，LIShuang2△，WEIZhongsun1，LUO Qiang2，QIN Huaining2，MA Jianshuang1
1 Guilin Otigh Herbs Company，Ltd，Guilin 541800，China；2 School of Life and Environmental Science of Guilin University of Electronic Technology

Objective:To identify loquat leaveas（Eriobotrya japonica Thunb.）in compound LuoHanGuo ZhiKe granules.Methods:TLCmethodwasadopted，chloroform:acetic ether:methanol:water（19:45:26:10）were chosen as developing agents，silica gel as the immobile phase，and spraying 10%vanillin sulfuric acid solution，the spots were clear till heating to 105℃，and they were observed under the light.Results:The sample solutionswere in the corresponding places of the control articles and control herbs in TLC，which presented the purp le red spots in the same colors respectively.Therew asno same spot in the negative samp les.Conclusion:Themethod，simp le and accurate，could beused for the identification of loquat leaves in compound LuoHanGuo ZhiKe granules.

TLC；compound LuoHanGuo ZhiKe granules；loquat leaves

R282.7

A

1004-6852（2016）03-0033-02

2015-02-19

国家科技支撑计划（编号2011BA101B03）；广西大学生创新训练计划项目（编号201410595107）。

龙永诚（1971—），男，工程师。研究方向：中药成分分析。

△黎霜（1968—），女，博士学位，副教授。研究方向：新药的研究与开发。