不同生长月份女贞子中特女贞苷含量的动态差异

田志祥，王　伟，刘　艺，韩春超山东中医药大学药学院，山东济南250300



不同生长月份女贞子中特女贞苷含量的动态差异

田志祥，王伟△，刘艺，韩春超
山东中医药大学药学院，山东济南250300

目的：探讨不同月份女贞子中特女贞苷的含量差异。方法：采收10～12月份的女贞子，阴干后，分别称取20 g女贞子，先经石油醚脱脂2次，0.5 h/次，然后以80%乙醇提取2次，3 h/次，合并提取液并浓缩，将浓缩后的提取液经D-101大孔树脂柱纯化，分离得到目标成分，进行含量测定。结果：11月份女贞子中特女贞苷含量达到最高。

女贞子；特女贞苷；含量差异

女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）是木犀科常绿乔木女贞Liustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。初始记载于《神农本草经》，上品，为扶正固本药。其味甘苦，性凉，归肝肾经，有滋补肝肾和明目乌发之功效，用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明、内热消渴、骨蒸潮热等症［1］。因其有保护肝脏，降血压，降血糖，抗病毒，消炎等功效而越来越受到人们的重视。

女贞子化学成分有醚萜类、挥发油、苯乙醇类、三萜类、黄酮类、多糖、氨基酸、脂肪酸及微量元素等，而在女贞子中分离得到的主要化合物是三萜类和环烯醚萜苷类［2-3］。女贞子中的一种活性有效成分——特女贞苷具有较强的免疫调节和抗氧化作用［4-5］，可以与亚适量刀豆球蛋白A（Con A）协同提高正常鼠脾T淋巴细胞的转化，并能显著提高由环磷酞胺抑制的自然杀伤细胞协胶的杀伤功能，减轻由地塞米松引起的N K活性低下的作用［6］。特女贞苷结构式见图1。

图1　特女贞苷的结构式

2010版的药典中［1］记载女贞子为成熟果实，冬季时采收。经过查阅文献，发现女贞子的果实采收期为10～12月份［7］。在现有文献中并没有关于采收月份与特女贞苷含量之间关系的报道。本研究比较女贞子中特女贞苷在10～12不同月份的含量差异。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1植物材料及其样品的制备供试植物为野生大叶女贞，分别于10～12月底，采其果实部分，于室温暗处干燥至恒重。

1.1.2使用仪器和试剂UV9000紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司）；万分之一天平（上海菁海仪器有限公司FA2004N型）；旋转蒸发仪（上海亚荣RE-52）；二两装高速中药粉碎机（瑞安市永历制药机械有限公司）；层析柱（上海禾汽玻璃仪器有限公司）；D-101大孔树脂（安徽三星树脂科技有限公司）；无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）；石油醚（天津市富宇精细化工有限公司）；GF-254薄层硅胶（天津市富宇精细化工有限公司）；特女贞苷标准品纯度为98%（南京森贝伽生物科技有限公司）；蒸馏水。

1.2特女贞苷的提取及分离

1.2.1特女贞苷的提取精确称量10、11、12月份的女贞子各20.00g共3份，粉碎后用石油醚在70℃下脱脂2次，0.5h/次，滤去石油醚，将女贞子粉末取出，挥干石油醚。然后用10倍量80%乙醇提取，提取条件为：水浴热提，提取温度定为70℃，提取2次，3h/次［8］。合并2次提取液，在50℃下减压浓缩，干燥，得到特女贞苷粗提取物。1.2.2特女贞苷的分离将10、11、12月份的特女贞苷粗提取物各用100mL蒸馏水溶解，将粗提物水溶液分别经预先处理好的D-101大孔树脂柱分离纯化。先用蒸馏水冲至洗脱液无色且mol ish反应为阴性；接着用400m L40%乙醇洗脱，除杂；最后用70%乙醇洗脱，收集洗脱液。

1.3特女贞苷的含量鉴别方法采用薄层色谱法比较女贞子提取液上柱后特女贞苷含量的差异。

1.3.1硅胶G薄层板的制备使用表面光滑平整的5cm×10cm的玻璃板，洗净晾干。把硅胶G F254与0.3%的羧甲基纤维素钠水溶液按1∶3的比例在研钵中调匀后，将研好的浆液倾倒于玻璃板上，形成硅胶薄层板，室温下晾干，在105℃下活化半小时以上后，即可使用。

1.3.2展开剂与显色剂使用乙酸乙酯-甲醇（3∶1）为展开剂；使用10%硫酸乙醇溶液作为显色剂。

1.3.3比较方法将收集到的大孔树脂洗脱液浓缩5m L进行点板，并用展开剂分离，待展开剂挥干后用显色剂显色。

1.4紫外法测定比较特女贞苷的含量

1.4.1对照品溶液的制备精密称取0.01g对照品，用蒸馏水溶解并定容至200mL。

1.4.2测定对照品吸光度查文献得知特女贞苷的最大吸收波长为224nm［9］，可通过紫外分光光度计测定出对照品的吸光度。

1.4.3测定大孔树脂柱后浸膏的重量将收集到的大孔树脂洗脱液蒸干，测浸膏重量。

1.4.4测定样品的吸光度将浸膏用蒸馏水溶解并定容至5000mL，通过紫外分光光度计测定样品的吸光度。

1.5高效液相法比较特女贞苷含量差异采用agilent C18（4.6mm×150mm，5m）色谱柱，流动相为乙腈∶水=32∶68，检测波长为224nm，流速1m L/min，对特女贞苷进行检测。

2　结果

2.1薄层色谱法测定结果由薄层色谱图可知，11月份的特女贞苷的量达到最大，10月份次之，12月份最少，见图2。

图2　特女贞苷薄层图

2.2紫外法对照品的吸光度为0.475，10月份样品的吸光度为0.484，11月份样品的吸光度为0.541，12月份样品的吸光度为0.441。样品浓度=标准品的浓度×样品吸光度/标准品吸光度，依据该公式分别求得其浓度。接着用（浓度×溶解的体积）/浸膏重量，得上柱后样品的含量，见表1、图3。

表1　不同月份女贞子中特女贞苷含量（紫外法）

图3　不同月份女贞子中特女贞苷含量柱状图（紫外法）

2.3高效液相色谱图由外标法算得10月份女贞子中特女贞苷的含量为36.6%，11月份女贞子中特女贞苷的含量为53.2%，12月份女贞子中特女贞苷的含量为23.9%，见图4—8。

图4　 10月份女贞子测得特女贞苷的色谱图

图5　 11月份女贞子测得特女贞苷的色谱图

图6　 12月份女贞子测得特女贞苷的色谱图

图7　特女贞苷对照品的高效液相图

图8　不同月份女贞子中特女贞苷含量比较（高效液相结果）

3　讨论

药典收录的中药材女贞子在生长和成熟的过程中，其有效成分之一——特女贞苷的含量，除了受到外界环境的影响和自身遗传因子的调控外，还可能受到加工以及采收的影响，采收期为影响其含量的重要因素。本研究通过薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法对不同月份的女贞子中特女贞苷的含量进行测定，结果准确，灵敏度高。实验结果表明，女贞子中的特女贞苷含量在11月份达到最高，随着果实的成熟反而呈现缓慢下降的趋势，通过测定10～12月份女贞子中特女贞苷含量，得出10～12月份的女贞子中特女贞苷含量从高到低为11月＞10月＞12月。原因可能是10月份的女贞子未达到最佳时期，而由于特女贞苷的光不稳定性，在12月后，特女贞苷的含量有所降低。由于仅靠女贞子中特女贞苷一个成分的变化来确定女贞子的采收季节，具有一定的局限性。但是，鉴于药典中以特女贞苷这一有效成分为检测指标，因此本研究能为女贞子的最佳采收期提供一定的依据。可以初步确定，由于11月份女贞子中特女贞苷含量达到最高，女贞子的最佳采收期应为11月份。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:43.

［2］黄新苹，王武朝.中药女贞子的化学成分研究进展［J］.国际药学研究杂志，2011，38（l）:47-51.

［3］张兴辉，石力夫.中药女贞子化学成分研究（1）［J］.第二军医大学学报，2004，25（3）：333-334.

［4］Guo N1，Yu Y，Ablajan K，et al.Seasonal var iations in metabol i te prof i l ing of the f ruits of l igust rum lucidum Ai t［J］.Rapid Commun Mass Spec t rom，2011，25（12）:1701-1714.

［5］He ZD，But PPH，Chan TW，et al.Antioxidative glucosides f rom the f rui ts of Ligustrum lucidum［J］.Chem Pharm Bul l（Tokyo），2001，49（6）:780-784.

［6］蔡漆，石力夫，胡晋红，等.特女贞甙体外对小鼠脾淋巴细胞转化和自然杀伤细胞活性的影响［J］.第二军医大学学报，1995，19（1）:76-78.

［7］戴启金，杨林，朱正普.女贞子综合利用及栽培技术［J］.林业实用技术，2005（6）:38-40.

［8］He ZD，Dong H，Xu HX，et al.Secoiridoid consti tuents f rom the f ruits of ligustrum lucidum［J］.Phytochemistry，2001，56（4）：327-330.

［9］张学兰，侯杰，李慧芬，等.炮制对女贞子中特女贞苷含量的影响［J］.中药材，2009，32（4）：498-500.

Dynamic Differencesof the Contentsof Specnuezhenide in NvZhenZi in DifferentGrowth Months

TIAN Zhixiang，WANGWei△，LIU Yi，HAN Chunchao
Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250300，China

Objective:To study the contentsofspecnuezhenide in NvZhenZi（Fructus Ligustri Lucidi）in differ-entgrow thmonths.Methods:NvZhenZi grew from Octomber to December were collected and dried in the shade，20g NvZhenZi wasweighed，degreased with petroleum ether twice，30min every time，extracted with 80%ethanol twice，threehourseach time.The extractswere concentrated，the concentrated extractwaspurified by D-101macroporous resin column to obtain the target ingredients，contents of the the ingredientswere determined.Results:The contentsof specnuezhenide contained in NvZhenZi grew in November reach thehighest.

NvZhenZi；specnuezhenide；contentdifference

R284.1

A

1004-6852（2016）03-0037-04

2015-01-27

田志祥（1991—），男，在读硕士研究生。研究方向：中药活性物质与新剂型。

△王伟（1978—），男，博士学位，讲师。研究方向：中药制剂。