不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素含量的比较研究*

白万富，石松利，郑倩男，吴培赛内蒙古科技大学包头医学院药学院，内蒙古包头014040



不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素含量的比较研究*

白万富，石松利△，郑倩男，吴培赛
内蒙古科技大学包头医学院药学院，内蒙古包头014040

目的：建立蒙古扁桃叶中槲皮素含量测定的方法，对不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素的含量进行比较。方法：采用HPLC法，Shim-Pack VP-ODS C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相甲醇-0.2%磷酸（50∶50）；柱温30℃；流速1.0mL/min；检测波长360 nm；进样量20μL。结果：线性关系良好，r=0.999 9，回归方程为Y=86130X-6471.9，线性范围为2.5～50μg/mL，平均加样回收率为100.5%，RSD为1.9%（n=6）。不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素的含量存在差异，内蒙古固阳地区的含量最高，贺兰山哈拉乌沟地区的含量最低。结论：本实验首次测定了蒙古扁桃叶中槲皮素的含量并对不同出产地进行比较，方法准确、可靠，可作为蒙古扁桃药材质量评价的指标及资源开发的依据。

蒙古扁桃；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定

蒙古扁桃叶是蔷薇科扁桃属蒙古扁桃（Amygdalusmongolica Maxim.）的干燥叶，蒙古扁桃又称山樱桃、土豆子，蒙古名为乌兰-布依勒斯，多年生木本植物。主要分布于内蒙古、宁夏部分地区荒漠草原区的山地、丘陵、石质坡地等。现为国家三级保护植物。蒙古扁桃为重要的木本油料树种之一，种仁含油率约为40%，其油可供食用。种仁可代“郁李仁”入药，蒙古扁桃能润肠、利尿、主治大便燥结、水肿、脚气等［1］。

槲皮素作为重要的黄酮类化合物，具有保肝利胆、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理学作用［2-3］。槲皮素是蒙古扁桃的重要活性成分之一，本实验采用高效液相色谱法对蒙古扁桃叶中的槲皮素的含量进行测定，并对内蒙古、宁夏等地蒙古扁桃药材中该成分的含量进行比较。本研究可为药材质量的客观评价提供方法，并为蒙古扁桃资源的合理开发奠定科学可靠的实验基础。

1　材料

1.1仪器与试药J Y1201型电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（紫外检测器，二极管阵检测器PDA-2000，岛津国际贸易上海有限公司）；色谱柱［Hypersil OD S2-C18（4.6mm×250mm，5μm）柱号：E2414777］；色谱工作站：LC-solution，DS-2510D T型超声清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），TDZ4-WS低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

1.2试药槲皮素对照品（北京恒源启天化工技术研究院北京世纪奥科生物技术有限公司，批号：MUST-12072505）；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为超纯水。蒙古扁桃叶采自阿右雅布赖戈壁、贺兰山、九峰山等地，经内蒙古大学生命科学学院王迎春教授鉴定为蔷薇科扁桃属植物蒙古扁桃。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2-C18（4.6mm×250mm，5μm）；柱温：30℃；检测波长：360nm；流动相：甲醇∶0.2%磷酸=50∶50；流速：1.0mL/min，进样量：20μL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取槲皮素标准品5mg，置10m L量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得储备液。

2.2.2供试品溶液的制备取蒙古扁桃叶粉末（过20目筛）约1.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇10m L，密塞，超声50分钟（温度25℃），放冷，转移至离心管中，离心（2000 r/min）10分钟，滤过，取上清液，即得。

2.3系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶液各20μL进样，按照“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。理论板数按槲皮素峰计算不低于4 000，槲皮素峰与其他杂质峰分离度均大于1.5。对照品溶液、供试品蒙古扁桃药材溶液在此色谱条件下的色谱图见图1。

图1　槲皮素对照品及蒙古扁桃药材HPLC图

2.4线性关系的考察精密称取槲皮素标准品5mg，置10m L容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得储备液。精密量取该溶液2m L置于10m L量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、5.00 m L，置于10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度。制得含槲皮素浓度为2.5、5、10、15、20、25、50μg/m L的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液各20μL，按“2.1”项下色谱条件测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析，得回归方程：Y=86130X-6471.9，R=0.9999，结果表明：槲皮素在2.5～50μg/m L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度实验取同一对照品溶液，连续进样6次，按“2.1”项下色谱条件测定，测得槲皮素峰面积的R S D为0.9%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6稳定性实验取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10小时进行测定，测得槲皮素峰面积的R S D为1.5%（n=6），表明供试品溶液在10小时内稳定性良好。

2.7重复性实验精密称取同一批样品共六份，每份约1.5 g，按照含量测定的方法，进行测定，计算含量。平均含量为9.788 3mg/g，R S D为2.0%，表明该方法重复性良好。

2.8含量测定取内蒙古、贺兰山等7个产地的供试品，每份约1.5 g，精密称定，按上述含量测定方法进行测定，外标法计算样品中槲皮素的含量［4］，见表1。

表1　不同产地扁桃叶中槲皮素的含量

2.9加样回收率实验精密称取已知含量（0.0153mg/g）的蒙古扁桃叶0.7 g，共6份，精密称定，分别精密加入槲皮素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，分别按“2.1”项下色谱条件测定，结果平均加样回收率为100.5%；R S D为1.9%，见表2。

表2　加样回收实验结果

3　讨论

3.1提取方法的研究

3.1.1提取溶剂的考察［5-6］实验考察了提取溶剂甲醇的浓度（100%，90%，80%，70%，60%）。结果表明：甲醇的浓度对蒙古扁桃叶中槲皮素提取的量有一定的影响，80%甲醇溶液提取槲皮素的量为0.098 6mg/g最高，其次是90%甲醇溶液提取槲皮素的量为0.053 0mg/g，60%甲醇溶液提取槲皮素的量为0.0091mg/g最低。故选择80%甲醇溶液为提取溶剂。

3.1.2样品水解程度的考察［7-9］由于色谱柱的p H范围在1～10之间，当酸度过大就会使色谱柱受损，采用2mol/L盐酸对样品进行水解，提取槲皮素，发现用甲醇提取的槲皮素的量与加入盐酸水解提取的槲皮素的量相差不大，因此，本研究直接采用甲醇提取的方法。

3.1.3脱脂对样品中槲皮素含量测定［10-12］分别精密称取同一批号的样品约1.5g 2份，一份加入石油醚进行脱脂处理，另一份作为空白对照，比较两者槲皮素的含量，结果显示含量相差不明显，因此无需对样品进行脱脂处理。

3.2不同产地含量的比较本实验结果显示，不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素的含量有较大差异，固阳蒙古扁桃中槲皮素0.4007mg/g最高，其次为乌海千里沟蒙古扁桃中槲皮素0.0979mg/g，而贺兰山哈拉乌沟蒙古扁桃中槲皮素0.0117mg/g为最低，可为蒙古扁桃药材质量控制提供参考依据［13-15］。

研究证明，本实验方法简便、灵敏、稳定、准确，可用于蒙古扁桃药材的质量监控与评价；并为蒙古扁桃资源的合理开发提供科学可靠的实验依据。

［1］斯琴巴特尔.蒙古扁桃［J］.生物学通报，2003，38（8）:23-24.

［2］黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.中国中药杂志，2000，25（10）：589-592.

［3］刘明学，魏光辉.槲皮素的药理学作用及临床应用前景［J］.中国药房，2010，21（27）：2581-2583.

［4］李成义，王延惠，魏学明，等.HPLC测定不同产地当归中阿魏酸的含量［J］.西部中医药，2012，25（1）：34-36.

［5］严蕾，石骁昵，孙莲.液相色谱法测定植物样品中槲皮素和山奈酚［J］.中国卫生检验杂志，2008，18（6）:1056-1057.

［6］汤道权，张尊建，高媛媛，等.固相萃取-高效液相色谱法测定银杏叶提取物中芦丁、槲皮素、山奈酚和异鼠李素［J］.中草药，2009，40（1）:56-60.

［7］黄兴富，黎其万，刘宏程，等.高效液相色谱法同时测定苦荞中芦丁、槲皮素和山奈酚的含量［J］.中成药，2011，33（2）: 345-347.

［8］田振坤，顾媛媛，宋成贵，等.HPLC法测定凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（18）:106-108.

［9］刘唯芬，慕善学，刘欣荣，等.RP-HPLC法测定罗布麻叶中芦丁和槲皮素的含量［J］.中华中医药学刊，2009，27（12）:2677-2678.

［10］雷鹏，刘韶，李新中，等.HPLC测定地锦草中槲皮素、山奈素的含量［J］.中国药材，2005，28（8）:666-667.

［11］陈娟，师彦平.HPLC测定萹蓄中槲皮素和山奈素的含量［J］.中国中药杂志，2009，34（4）:423-426.

［12］梁洁，柳贤福，孙正伊，等.HPLC测定白花舌草配方颗粒中槲皮素和山奈素含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（24）: 149-151.

［13］青梅，鞠爱华，白万富.不同产地文冠木中槲皮素与总黄酮含量的比较研究［J］.内蒙古大学学报：自然科学版，2010，41（5）:540-544.

［14］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［15］王宇，张玉兰.HPLC法测定党参中5-羟甲基糠醛的含量［J］.西部中医药，2014，27（2）:31-33.

Com parisonsof the ContentsofQuercetin in Mongolian Almond Leaf from Different Producing Areas

BAIWanfu，SHISongli△，ZHENGQiannan，WU Peisai
Pharmacy School of Baotou Medical College of Inner Mongolia University of Science&Technology，Baotou 014040，China

Objective:To compare the contents of quercetin contained in Mongolian almond leaf［Amygdalus mongolica（Maxim.）Ricker］form different producing areas by establishing content determ ination method of quercetin.Methods:HPLCmethodwasadopted，Shim-Pack VP-ODSC18chromatographic column（4.6mm×250mm，5μm）；mobile phase:methanol-0.2%phosphoric acid（50:50）；column tem perature 30℃；flow ratewas1.0m L/m in；detection wavelengthwas360 nm；the sample sizewas20μL.Results:Linear relationship wasbetter，r=0.999 9，regression equation w as Y=86130X-6471.9，linear range was from 2.5 to 50μg/m L，average recovery rate w as 100.5%，RSD was1.9%（n=6）.The differencewasexisted in the comparison of the contents of quercetin ofMongolian almond leaf from different producing areas，the contents of quercetin contained in Mongolian almond fromguyang districtwere the highest，while these contained in the Mongolian almond from Halawugou districtof Helan mountainswere the lowest.Conclusion:The contents of quercetin in Mongolian almond leaf are initially detected，and different producing areasare compared in the experiment，themethod，accurate and reliable，could be taken as the index of quality evaluation of Mongolian almond and the reference of resource development.

Mongolian almond；quercetin；HPLC；contentdetermination

R917

A

1004-6852（2016）03-0030-03

2015-03-30

国家自然科学基金项目（编号81102760）；内蒙古自治区自然科学基金项目（编号2015MS0808）。

白万富（1982—），男，硕士学位，讲师。研究方向：中、蒙药及其制剂的化学成分及质量标准研究。

△石松利（1981—），女，博士学位，教授。研究方向：中、蒙药成分及资源开发利用研究。