金银木不同部位绿原酸的含量测定

朱成姣，陈　飞，姚梅悦，周祉延，周长征△山东中医药大学药学院，山东济南50355；吉林大学口腔医学院



金银木不同部位绿原酸的含量测定

朱成姣1，陈飞1，姚梅悦1，周祉延2，周长征1△
1山东中医药大学药学院，山东济南250355；2吉林大学口腔医学院

目的：提取并测定金银木茎、叶、花及花蕾中绿原酸的含量，比较不同时期茎、叶、花及花蕾中绿原酸含量的变化。方法：以金银木为材料，采用超声波提取法提取金银木茎、叶、花及花蕾中的绿原酸，用紫外分光光度法测定提取物中绿原酸含量。结果：金银木幼叶中绿原酸含量为3.366%，茎1（与幼叶同时期）中为1.016%，花蕾中为6.175%，全开花中为7.471%，茎2（与花蕾同时期）中为2.416%，叶2（与花蕾同时期）中为10.735%。结论：茎、叶不同生长期中的绿原酸含量不同，并且随着生长呈现增加的趋势，故金银木的茎、叶、花及花蕾均具有较高的开发利用价值。

金银木；超声提取法；绿原酸；紫外分光光度法

金银木［Lonicer maakii（Rupr.）Maxim.］，别名金银忍冬、木忍冬、鸡骨头，是忍冬科忍冬属的落叶灌木，分布于全国各地，生于林缘、沟谷地带、山坡阴湿处或杂木林中。金银木全株可入药，具有祛风解毒、消肿止痛的作用。金银忍冬含有绿原酸，绿原酸（chloro genicacid）是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，为众多药材（如金银花、茵陈、杜仲）中的主要有效成分，现代药理研究表明，其除有抗菌抗病毒作用外，还有抗艾滋病毒、抗过敏、抗肿瘤等功能，具有保肝利胆、止血、抗氧化、抗生育等作用，由于其所具有的药理和药效作用而日益引起人们的重视［1］。为此，本实验对金银木茎、叶、花及花蕾中绿原酸进行提取及含量分析，并比较不同时期茎叶中绿原酸的含量变化，旨在为金银木的开发和综合利用提供理论依据。

1　材料

1.1药材金银木茎、叶、花蕾和全开花，采于山东中医药大学长清校区校园内，经鉴定为金银木的茎、叶、花蕾及花，经阴干、低温烘干处理为干品，粉碎。

1.2仪器电子分析天平［AL204型，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］；XD-6型热风循环烘箱（WMZK-02型，上海医用仪表厂）；四两装高速万能粉碎机（武义县屹立工具有限公司）；KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；紫外分光光度计（UV1100，上海天美科学仪器有限公司）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司，天平仪器厂制造）。

1.3试剂绿原酸标准品，购自天津一方科技有限公司；甲醇（分析纯），购自天津市广成化学试剂有限公司；蒸馏水。

2　方法与结果

2.1标准品溶液的制备准确称取5.0mg绿原酸标准品，用浓度50%的甲醇溶液在超声条件下使其完全溶解［2］，并定容至25mL，得到浓度为0.200mg/m L的标准品溶液。

2.2标准曲线的制备分别取0.5、1.0、1.5、2.0和2.5m L标准品溶液置于25m L棕色容量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，在吸收波长为327nm的紫外分光光度计中测定标准品溶液的吸光度，以浓度为横坐标x，吸光度为纵坐标y，作绿原酸标准曲线，见表1。

表1　标准曲线数据

2.3精密度实验取同一浓度的标准品溶液，在紫外分光光度计中测定其吸光度，平行测定5次，考察吸光度的变化情况，相对标准偏差R S D为0.144%，精密度良好。

2.4供试品溶液制备金银木幼叶中绿原酸提取。从山东中医药大学长清校区摘取一定数量的金银木幼叶，经烘干后粉粹，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇50mL，称定质量，50℃下超声处理30分钟，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足质量，摇匀，滤过［3］，滤液另存于250mL具塞容量瓶中，滤渣加50%甲醇50mL，称定质量，超声处理30分钟，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足质量，摇匀，滤过，合并滤液，精密量取1.25mL置于25m L棕色容量瓶中，用浓度50%的甲醇溶液定容，放于冰箱内待用，平行制备3次。

金银木茎1（与幼叶同时期）、茎2（与花蕾同时期）、叶2（与花蕾同时期）、全开花及花蕾中绿原酸提取操作同“2.4.1”项，最后茎取5mL定容至25mL，全开花及花蕾取2mL定容至25mL。

2.5绿原酸含量测定根据文献［3］选定吸收波长为327nm，以50%甲醇溶液为空白对照，在紫外分光光度计中测定各供试品溶液的吸光度，平行进样3次，然后根据标准曲线计算绿原酸的含量。取3份金银木茎1（与幼叶同时期）的粉末各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇50mL，称定质量，于50℃下分别超声提取1、2、3次，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足质量，摇匀，滤过，分别精密量取3种滤液各5mL，置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得，于327nm波长处分别测定其吸光度。幼叶、全开花及花蕾分别超声提取1、2、3次，操作如茎1（与幼叶同时期），最后幼叶精密量取3种滤液各1.25mL，置25mL棕色容量瓶中，全开花及花蕾精密量取3种滤液各2mL，均用50%甲醇定容至刻度，摇匀，即得，于327nm波长处分别测定其吸光度，见表2—4。

表2　各供试品溶液绿原酸含量测定

表3　茎1（与幼叶同时期）不同提取次数绿原酸含量测定

表4　幼叶、全开花及花蕾不同提取次数绿原酸含量测定

2.6线性关系考察计算绘制出标准曲线为：Y=64.65X-0.072，相关度R2=0.999（n=5），表明绿原酸在4.0～20.0μg/m L浓度范围内线性关系良好，见图1。

图1　绿原酸标准曲线

2.7最佳提取次数的确定由表4—5可知，茎1（与幼叶同时期）提取1次所得含量比提取2次所得含量在数值上少0.2652，而提取2次比提取3次少0.0374，可以认为提取2次就可将材料中的绿原酸提取完全，并且可以节省能源。

3　讨论

3.1超声提取法金银木中绿原酸的提取方法主要有以下几种：浸渍法、渗漉法、热回流法、超声波法、微波法和酶法［4］，理论分析认为在绿原酸的化学结构中含有不稳定的基团，因此不可采取热提，另外从省时、操作简单易行，提取效率高方面考虑，本实验采用了超声提取法［5-8］。

3.2紫外分光光度检测法紫外分光光度法测定绿原酸含量，方法简便易行，但准确度不高。因为金银木中主要有效成分为绿原酸、异绿原酸，紫外吸收图谱最大吸收波长均为（327±1）nm。因此紫外分光度法所测数据为绿原酸、异绿原酸的总含量。高效液相法可将两者分开，并能分别进行测定［2］。

3.3不同部位绿原酸含量本研究结果表明：金银木各部位中都有一定的绿原酸，但含量高低不同，同时期的含量依次为叶＞花＞花蕾＞茎，且花、花蕾及叶中的绿原酸含量较高，由此可推断金银木的花和叶是一种可开发的新的药用植物资源。

目前金银木多为城市的绿化树种，其花和叶目前都被废弃，我国金银木资源十分丰富。通过本实验可为金银木的花和叶的药用开发提供理论依据，使之得到合理应用。

［1］于加平，李海燕，孙博.HPLC法测定金银木花和叶中绿原酸的含量［J］.吉林农业科技学院学报，2009，18（1）:1-2.

［2］肖文平，李娟.金银花中绿原酸的提取和含量测定［J］.安徽农业科学，2011，39（35）:21675-21676.

［3］任贻军，周菁丽，李纪元，等.HPLC法测定清血糖浆中绿原酸的含量［J］.中医药导报，2009，15（8）:71-72.

［4］于俊林，孙仁爽，吕红，等.金银忍冬和黄花忍冬花及花蕾中绿原酸的HPLC法测定［J］.中草药，2008，39（11）:1738-1739.

［5］史克莉，许蜡英.不同提取方法对金银花中绿原酸含量测定的影响［J］.中华中医药学刊，2007，25（4）:820-822.

［6］何钢，刘贤桂，李樊，等.金银花叶片绿原酸提取及工艺参数优化的研究［J］.江西农业大学学报，2008，30（1）:136-143.

［7］肖怀秋，李玉珍，兰立新.超声波辅助乙酸乙酯萃取金银花中绿原酸［J］.食品与发酵科技，2009，45（2）:48-50.

［8］曹渊，李创举，夏之宁，等.金银花中绿原酸的超声提取工艺优化［J］.时珍国医国药，2008，19（12）:2857-2858.

Content Determination ofChlorogenic Acid Contained in Different Partsof Amur Honeysuckle

ZHU Chengjiao1，CHEN Fei1，YAOMeiyue1，ZHOU Zhiyan2，ZHOU Changzheng1△
1 Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 College of OralMedicine of Jilin University

Objective:To compare the contents of chlorogenic acid in the stem s，leaves，flow ers and buds in differentperiods by extracting and determ ining chlorogenic acid contained in amur honeysuckle［Lonicera maackii（Rupr.）Maxim.］.Methods:By taking amur honeysuckle as the material，chlorogenic acid in the stems，leaves，flowers and buds of amur honeysuckle could be extracted by ultrasound extraction method，and the contents of chlorogenic acid were determ ined by ultravioletspectrophotometry.Results:The contents of chlorogenic acid in the young leavesheld 3.366%，itwas1.016%in the stem No.one（in the same period of young leaves），6.175%in the buds，7.471%in thewhole flowers，2.416%in the stem No.two（in thesame period of thebuds），and 10.735%in the leavesNo.two（in thesame period of thebuds）.Conclusion:The contentsof chlorogenic acid in the stemsand leaves in different periods are different，they increased as they grew up，therefore，the stems，leaves，flow ers and buds of amurhoneysucklepossessahigh valueofdevelopmentand utilization.

amurhoneysuckle；ultrasound extraction；chlorogenic acid；ultravioletspectrophotometry

R284.1

A

1004-6852（2016）03-0035-03

2015-02-17

朱成姣（1990—），女，在读硕士研究生。研究方向：药物新剂型与制药新技术。

△周长征（1966—），男，硕士学位，教授。研究方向：药物新剂型与制药新技术。