活血通络解毒方对脑缺血Wistar大鼠血液流变学的影响*

艾宗耀易燕锋肖梅红嵇冰杨春华陆周翔（.浙江中医药大学附属湖州中医院，浙江湖州33000；.湖州师范学院医学院，浙江湖州33000）

·研究报告·

活血通络解毒方对脑缺血Wistar大鼠血液流变学的影响*

艾宗耀1易燕锋2肖梅红1嵇冰1杨春华1陆周翔1
（1.浙江中医药大学附属湖州中医院，浙江湖州313000；2.湖州师范学院医学院，浙江湖州313000）

目的观察活血通络解毒方对脑缺血Wistar大鼠血液流变学的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分成5组，分别为假手术组、模型组和中药低、中、高剂量组。采用改良Longa法建立大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型，造模成功24 h后，经大鼠尾静脉取血检查血液流变学指标。治疗第7天评估各组神经功能缺损评分。治疗第14天，经大鼠腹主动脉取血再次检测血液流变学指标。结果中药各剂量组治疗后血液流变学指标均有改善（P《0.05），且高剂量组血液流变学指标改善较中低剂量组明显（P《0.05），中剂量组改善较低剂量组明显（P《0.05）。结论活血通络解毒方可改善缺血性Wistar大鼠血液流变学指标，这可能是治疗脑梗死的机制之一。

脑缺血再灌注脑梗死活血通络解毒方血液流变学指标

【Abstract】Objective：To study the influence of Huoxue tongluo jiedu Decoction on hemorheology ofWistar rats with cerebral ischemia.Methods：Sixty male Wistarmice were randomly divided into sham operation group，the model group，low-dose group，middle-dose group，and high-dose group.The middle cerebral artery occlusion modelwas established by Longa and othermethods.After successfulmodeling of 24 h，the blood rheology indexes were examined by blood examination of rat tail vein.The neurological deficit score of each group was evaluated on 7th day after treatment.On fourteenth day after treatment，the blood rheology indexes were detected again by the abdominal aorta of rats.Results：The blood rheology indexes of the drug delivery group were better than those of the model group and the sham operation group，and the larger the dose，the more obvious the improvement of blood rheology index.Conclusion：Huoxue tongluo jiedu Decoction can improve hemorheology indexes ofWistar ratswith cerebral ishcemia，whichmay be one of themechanisms for the treatment of cerebral infarction.

【Key words】Cerebarl ischemia reperfusion；Cerebral infarction；Huoxue tongluo jiedu Decoction；Hemorheology

急性脑梗死是由于脑部供血障碍，引起脑组织缺血性坏死。课题组前期研究表明［1］，活血通络解毒方可通过降低血清炎症细胞因子的水平而达到改善神经功能的作用。本研究旨在探讨活血通络解毒方对脑缺血Wistar大鼠血液流变学的影响。现报告如下。

1　材料与方法

1.1实验动物健康雄性Wistar大鼠60只，体质量（280±20）g，购于浙江中医药大学实验动物中心，合格证号：SCXK（浙）2003-0003，经检疫合格备用。大鼠在24～25℃下分笼饲养，保持相对湿度约为12%、光照明暗比为13∶1。

1.2实验药物活血通络解毒方组成：茯苓15 g，玄参10 g，金银花12 g，当归10 g，赤芍10 g，大黄3 g，栀子10 g，川芎6 g，地龙10 g，红花10 g，全蝎3 g，甘草6 g（中药材由浙江中药材公司提供）、药材经煎煮液浓缩至每毫升含原生药材2 g（高剂量）、1 g（中剂量）/0.5 g（低剂量）备用。

1.3模型制备将Wistar雄性大鼠按照改良Longa［2］法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型。假手术组未建立大脑中动脉阻塞模型，仅做颈部手术切口，钝性分离颈前肌，游离暴露颈总、颈外、颈内动脉。除假手术组外，其余组造模成功后按随机数字表法分组为模型组和中药低、中、高剂量组，每组12只。庆大霉素按照每日35mg/kg大鼠体质量抗感染，腹腔注射3 d。Wistar大鼠在再灌注术后完全苏醒后，参照改良Berdson评分［3］分级法分别观察大鼠神经和行为学改变。评分≥2分者表示模型制作成功，纳入本实验。

1.4给药方法大鼠所用药物的等效剂量按照成人的临床日用量与体质量折算系数比计算，中药低剂量组（约为正常70 kg成人药量的3.5倍）8 g/（kg·d）；中剂量组（约为正常70 kg成人药量的7倍）16 g/（kg·d）；高剂量组（约为正常70 kg成人药量的14倍）32 g/（kg·d）。每日用活血通络解毒方灌胃1次，术后24 h后给药。模型组和假手术组按照相同的方法分别给予相同体积生理盐水灌胃。各组用药时间均为14 d。

1.5标本采集与检测分别于术后当日，术后第1日、第7日、第14日进行神经行为学评分。评分方法与造模后的神经行为学的评分方法相同。术后24 h检测血液流变学指标，采用大鼠尾静脉取血，大鼠置于小笼内，固定尾巴，取之前用酒精擦洗，使血管充盈，用注射器抽取血1mL。术后14 d再次检测血液流变学指标，经腹主动脉取血。动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉暴露清楚，用注射器吸取血液1mL，取血完毕后处死动物。

1.6统计学处理应用SPSS13.0统计软件分析。计量资料以（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用配对t检验和重复方差分析。P《0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1死亡分析到实验结束，假手术组无大鼠死亡，模型组死亡3只，分别死于术后第2天、第5天，中药高剂量组死亡2只，分别死于术后第4天和第7天，中、低剂量组未见动物死亡。

2.2各组大鼠治疗前后血液流变学指标比较见表1。中药低、中、高剂量组治疗后血液流变学指标均有改善，且高剂量组改善较中、低剂量组明显，中剂量组改善较低剂量组明显，差异有统计学意义（P《0.05）。

3讨论

急性脑梗死是脑血管闭塞引起支配区域的脑血流减少或中断，组织进入缺血、缺氧状态而发生一系列病理生理及生化反应，如乳酸堆积、自由基释放、兴奋性氨基酸毒性、细胞内钙超载等引起的脑组织坏死性疾病［4］。脑梗死是世界范围内致死率和致残率排名第3的疾病［5］，有研究表明急性脑梗死患者血液黏度异常增高，血液处于浓、黏、凝、聚状态［6-7］。蒋氏等［8］研究发现，急性脑梗死患者各项血液流变学指标均高于对照组，突出表现为高黏滞血症和高凝血症。而血液的高黏滞、高凝状态又导致局部微循环持续恶化而诱发神经元凋亡，是梗死扩大和迟发神经元损伤的重要机制，也是再发脑死的危险因素。因此急性脑梗死的治疗不仅要及早恢复闭塞血管的血液流通，保护神经功能，也要兼顾到高血黏度的治疗，预防梗死、神经元损伤扩大，预防脑梗死的再发。本实验发现急性脑缺血大鼠灌服活血通络解毒方后能明显改善神经功能缺损症状，降低脑缺血再灌注大鼠神经症状评分，对神经功能的恢复有显著的促进作用；而且能明显降低血黏度，改善血液的高黏滞、高凝状态，血液流变学的各项指标均有所下降。

表1　各组治疗前后血液流变学指标比较（±s）

表1　各组治疗前后血液流变学指标比较（±s）

与本组治疗前比较，*P＜0.05；与低剂量组治疗后比较，△P＜0.05；与中剂量组治疗后比较，▲P＜0.05。

组别时间中药低剂量组治疗前（n=12）治疗后中药中剂量组治疗前全血高切黏度（mPa·s）全血低切黏度（mPa·s）血浆黏度（mPa·s）红细胞比积（%）8.59±0.70 17.00±1.02 2.99±0.60 48.00±3.69 7.59±0.61*14.63±0.89*2.60±0.42*46.08±2.35*8.60±0.69 16.96±0.94 3.00±0.59 47.83±3.30 （n=12）治疗后7.30±0.57*△13.96±0.69*△2.34±0.43*△44.92±2.57*△中药高剂量组治疗前8.59±0.73 16.97±1.01 2.99±0.59 48.10±3.48 （n=10）治疗后7.02±0.70*▲13.53±0.83*▲2.10±0.48*▲43.30±2.75*▲模型组治疗前8.58±0.81 17.06±1.03 2.97±0.62 48.22±3.53 （n=9）治疗后8.48±0.71 16.87±1.14 2.89±0.47 47.56±3.00假手术组治疗前7.82±0.63 15.11±0.94 2.78±0.56 47.06±3.14 （n=12）治疗后7.76±0.59 15.01±0.87 2.63±0.42 46.52±2.98

中医认为中风病的基本病机［9］总属阴阳失调，气血逆乱。近年来提出的“毒损脑络”病机假说认为毒邪损伤脑络，络脉破损，或络脉拘挛瘀闭，营卫失和，卫气壅滞而化生火毒，终致气血渗灌失常，脑神失养，神机失守，形成神昏闭厥、半身不遂的病理状态［10］。“急则治其标”，活血通络解毒方针对急性脑梗死“毒损络瘀”的病机，以活血化瘀、解毒通络为大法，方中金银花、大黄、栀子具有清热解毒的作用，栀子清三焦之热从小便而去，大黄导躯体之热、毒从大便而出，热清毒解，火热得去，脑络受损减轻，上逆之血得复，脑神失用减轻；红花、桃仁、当归、赤芍、川芎有活血的功效，全蝎、地龙有搜风、祛痰、通络作用，共奏祛风化痰、活血化瘀之效，脑络、经脉得通，则脑神失用、肢体偏枯不用得复，患者神经功能缺损症状自然得到改善，清热解毒、活血化瘀、祛风化痰的作用更是祛除了血中之瘀、热、毒，活血，血液的高黏滞、高凝状态得以改善。现代中药作用机理研究显示：川芎含阿魏酸及川芎嗪，具有清除氧自由基及促进纤维蛋白溶解，改善微循环，对引发卒中的黏附分子有明显的抑制作用，降低缺血后脑组织中Ca2+的含量，提高Ca2+-Na+-ATP酶活性，拮抗Ca2+内流，有扩张血管作用［11］。有报道，阿魏酸能拮抗ET受体和ET效应，抑制血小板聚集，使已聚集的血小板解聚率提高，从而降低血液黏度，改善微循环［12］。红花中的红花黄色素可减少TXA2、ET1的含量，且增加PGI2、NO的释放，起到扩张血管，改善微循环，抗血小板聚集的作用［13］。桃仁提高血小板内CAMP水平，从而抑制TXA2合成，抑制血小板聚集，改善微循环［14］。地龙含有效蚓激酶，具有抗凝、降纤、降脂，抑制血小板聚集，降低血液黏度作用［15］。全蝎纯化液对血小板最大聚集率有明显抑制作用，使纤维蛋白原含量和优球蛋白溶解时间明显减少［16］。诸药物共同起到降低血黏度的作用，而且本实验显示，药物的剂量越大降低血黏度的作用越强，但对于改善神经功能缺损的作用却是以中剂量组效果最佳。活血通络解毒方可改善缺血性Wistar大鼠血液流变学指标、改善大鼠神经功能缺损症状，并且与剂量呈相关性。

［1］贾芸，易燕锋，艾宗耀，等.活血通络解毒方对脑缺血Wistar大鼠炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的影响［J］.中国中医急症，2015，24（12）：2079-2081.

［2］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversiblemiddle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］. Stroke，1989，20（1）：84-91.

［3］Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M，et al.Rat middle cerebral arteryocclusion：evaluation of themodeland developmentofa neurologic examination［J］.Stroke，1986，17（3）：472-476.

［4］任金生.急性脑梗死脑损害的病理机制和中西疗效观察［J］.中国实用神经疾病杂志，2010，13（5）：14-16.

［5］Donnan GA，Fisher M，Macleod M，etal.Stroke［J］.Lancet，2008，371（9624）：1612-1623.

［6］陈立杰，金咏华，梁庆成.急性脑梗死患者凝血纤溶状态及血粘度检测的临床意义［J］.中国微循环，2002，6（1）：40-41.

［7］魏巍.浅谈脑梗死患者黏度及血脂改变［J］.中国伤残医学，2010，18（4）：102-103.

［8］蒋翡翎，邓碧兰，韩永.脑梗死患者血液流变学及血小板参数的变化及意义［J］.山东医药，2012，50（20）：58-59.

［9］周仲瑛.中医内科学［M］.北京：中国中医药出版社，2007.

［10］李澎涛，王永炎，黄启福．“毒损脑络”病机假说的形成及其理论与实践意义［J］．北京中医药大学学报，2001，24（1）：1-6.

［11］胡国荣，王建平．川芎嗪的药理作用及临床应用进展［J］．中国药物与临床杂志，2006，10（6）：773-774．

［12］王晓君．心血康治疗椎动脉型颈椎病的疗效观察［J］．疑难病杂志，2007，6（4）：214-215．

［13］夏成霞，陆曙.中药改善高血压病血管内皮功能的研究进展［J］.中国中西医结合杂志，2008，28（4）：378-381．

［14］沈映君.活血化瘀药［M］.上海：上海科学技术出版社，1997：124-137．

［15］孙顺成，刘国超，刘俊超.疏血通联合盐酸法舒地尔治疗频发短暂性脑缺血发作疗效观察［J］.中国实用神经疾病杂志，2009，12（5）：49-50．

［16］舒宇，曾良，齐迅捷，等.益气活血化瘀方治疗气虚血瘀型中风的血液流变性观察［J］.微循环学杂志，2012，22（2）：51-52.

The Effect of Huoxue Tongluo Jiedu Decoction on Hemorheology ofW istar Ratsw ith Cerebral Ischem ia

Ai Zongyao，YIYangfeng，Xiao Meihong，et al.Huzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Huzhou 313000，China.

·研究报告·

R285.5文献标志码：A

1004-745X（2016）07-1288-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.07.007

浙江省中医药科技计划项目（2013ZB126）

2016-03-24）