化疗联合DC-CIK治疗晚期胃癌疗效及对免疫功能的影响

马　易，李雨欣，孙　哲

(中国医科大学附属第一医院，辽宁 沈阳 110001)



化疗联合DC-CIK治疗晚期胃癌疗效及对免疫功能的影响

马易，李雨欣，孙哲

(中国医科大学附属第一医院，辽宁 沈阳 110001)

[摘要]目的观察化疗联合DC-CIK治疗晚期胃癌的疗效及对免疫功能的影响。方法将180例诊断为晚期胃癌的患者随机分为观察组90例与对照组90例。2组均给予奥沙利铂+5-氟尿嘧啶化疗，观察组在化疗基础上给予DC-CIK免疫细胞治疗，统计2组治疗后的临床疗效、不良反应发生情况，检测治疗前后免疫功能及血清细胞因子IL-12、IFN-γ水平。结果治疗后观察组疾病控制率明显高于对照组(P<0.05)，骨髓抑制发生率明显低于对照组(P<0.05)，2组发热、高热伴寒战、皮疹发生率比较差异无统计学意义。治疗后观察组外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明显高于治疗前及对照组(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明显低于治疗前及对照组(P均<0.05)；而对照组外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明显低于治疗前(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前(P均<0.05)。结论化疗联合DC-CIK能改善晚期胃癌患者的免疫功能，提高疾病控制率，且不良反应较少。

[关键词]晚期胃癌；化疗；DC-CIK；细胞因子；免疫功能

我国胃癌发病率很高，85%的患者诊断明确时已经处于晚期，传统方案如手术、化疗、放疗等虽有一定临床疗效，但术后发生转移率高达60%，5年生存率仅为25%[1]。目前胃癌大多倾向于联合治疗。近年来出现了安全、可靠、有效、不良反应少的免疫细胞晚期胃癌治疗法，且推广较快，其中体外培养的树突状细胞(dendritic cell，DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killers，CIK)免疫疗法最为常见，且取得了较好的临床疗效[2]。但是关于DC-CIK联合传统化疗对于晚期胃癌患者免疫功能及外周血细胞因子的影响研究较少，为此笔者进行了相关研究，现将结果报道如下。

1临床资料

1.1一般资料收集本院普通外科2012年3月—2014年12月(随访时间为1年)根据医学影像学(CT或MRI)检查与患者临床表现诊断为晚期胃癌的患者180例，年龄33～76岁，患者预计生存期均超过6 个月，Karnofsky评分在70分以上。排除有严重肝肾等重要器官功能障碍者；血清学生化指标、凝血、血常规严重异常者；胸腔、腹腔大量积液者；神经、大血管浸润者。研究得到医院伦理委员会批准，均取得患者本人或其法定代理人知情同意，并签署知情同意书。将患者随机分为观察组与对照组，每组90例，2组性别、年龄、病理分型、转移部位、胃癌部位比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，有可比性。见表1。

表1　2组一般资料比较　例(%)

1.2治疗方法对照组给予奥沙利铂120 mg/(m2·d) 第1天静滴，5-氟尿嘧啶(5-Fu)500 mg/(m2·d)第1—5天静滴，治疗过程中根据患者的耐受情况调整治疗剂量，21 d为1个周期，连续治疗2个周期。观察组在化疗前2 d采血进行DC-CIK细胞培养,第3天开始给予与对照组相同的化疗，细胞培养成熟后静脉回输给患者，每次回输细胞数量为(4～5)×109个，第1，2次回输时间分别为化疗结束后1 周的上午、下午，第3，4次回输时间分别为化疗结束后2 周的上午、下午，21 d为1个周期，连续治疗2个周期。治疗期间给予充足的营养支持。

1.3观察指标

1.3.1治疗后的临床疗效及不良反应发生情况参考文献[3]，并根据影像学检查及患者临床表现判定肿瘤的体积及其是否出现浸润来判定近期临床疗效，可以分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病变稳定(SD)、病变进展(PD)，CR+PR为客观有效率(ORR)，CR+PR+SD为疾病控制率(DCR)。监测治疗过程中不良反应发生情况。

1.3.2治疗前后免疫功能指标水平①CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+检测：治疗前后分别抽取患者静脉血，用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血中有核细胞，有核细胞染色标记30 min，溶血10 min，以3 000 r/min离心10 min，弃去上清液，PBS液冲洗2次，随后上机检测，并采用Cellquest软件进行样本检测。②IgG、IgM、IgA检测：治疗前后分别抽取患者静脉血5 mL，注入玻璃试管中，静置10 min，以3 000 r/min离心10 min，分离血清在-70 ℃超低温冰箱内保存待测，用免疫散射比浊法按照试剂盒说明进行检测。

1.3.3细胞因子IL-12、IFN-γ水平治疗前后分别抽取患者静脉血3 mL，注入玻璃试管内，常温下静置10 min，以3 000 r/min离心10 min，分离血清立即放于-70 ℃的超低温冰箱内保存，采用微粒子酶免疫分析法依照试剂盒说明检测。

2结果

2.12组治疗后近期临床疗效比较观察组DCR明显高于对照组(P<0.05)，2组CR、PR、SD、PD及ORR比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2　2组近期临床疗效比较　例(%)

2.22组不良反应发生情况2组治疗中均未发现严重不良反应；对照组发生发热50例(63.41%)，高热伴寒战17例(18.89%)，皮疹6例(6.67%)，骨髓抑制14例(15.56%)；观察组发生发热52例(57.78%)，高热伴寒战16例(17.78%)，皮疹8例(8.89%)，骨髓抑制6例(6.67%)。2组发热、高热伴寒战、皮疹发生率比较差异均无统计学意义(2=0.056，P>0.05)，观察组骨髓抑制发生率明显低于对照组(2=5.178，P<0.05)。

2.32组治疗前后细胞免疫及体液免疫相关指标水平比较治疗后观察组外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA均明显高于治疗前及对照组(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明显低于治疗前及对照组(P均<0.05)；而对照组外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA水平均明显低于治疗前(P均<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前(P均<0.05)。见表3及表4。

2.42组治疗前后血清细胞因子水平比较治疗后观察组外周血IL-12、IFN-γ水平均明显高于治疗前(P均<0.05)及对照组，对照组外周血IL-12、IFN-γ水平均明显低于治疗前(P均<0.05)。见表5。

表3　2组治疗前后细胞免疫功能比较±s)

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

表4　2组治疗前后体液免疫功能比较±s，g/L)

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

表5　2组治疗前后外周血IL-12、IFN-γ水平比较

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

3讨论

化疗是治疗晚期胃癌最常用的方法，但存在着毒副反应大、患者不易耐受、停止治疗率较高等弊端，影响临床疗效；且化疗在抑制肿瘤细胞增殖的情况下会抑制机体的免疫功能，降低机体自身对肿瘤细胞的杀伤力，同时普通化疗只能杀灭一定数量的肿瘤细胞，但是机体针对于微小病灶的杀灭功能却依赖于激动自身免疫系统来完成。T淋巴细胞参与机体的细胞免疫应答反应，T细胞亚群主要包括CD3+、CD4+、CD8+等。IgG、IgM、IgA是机体内重要的免疫球蛋白，参与体液免疫应答[4]。研究发现，恶性肿瘤患者免疫功能严重受到抑制，白细胞、免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+数量均明显减少，炎性细胞因子IL-12、IFN-γ水平降低[5]。故寻求既能杀灭肿瘤细胞，又能改善机体免疫功能的治法方法成为研究的热点。

近年细胞免疫疗法受到重视，该方法是通过从体外补充具有诱导功能的生物活性因子来激活体内本来固有的免疫应答或直接补充具有改善机体免疫功能的细胞来使机体具有免疫杀伤力[6]。其中DC-CIK免疫治疗既能直接杀伤肿瘤细胞又能调节机体免疫功能，因此受到广大医务工作者的重视[7-8]。DC细胞主要通过以下途径起作用[9-10]：①诱导机体产生大量的T淋巴细胞；②使效应T细胞趋向于肿瘤细胞；③诱导机体产生IL-12、IFN-γ等细胞因子；④抑制肿瘤细胞血管的生成；⑤激活自然杀伤细胞(NK)和自然杀伤T细胞(NKT)。CIK细胞抗肿瘤主要通过以下3条途径来完成：①在DC细胞诱导与趋化下，CIK细胞抗肿瘤的靶向性及其抗肿瘤活力均明显增强；②增加了自身IL-12、IFN-γ等细胞因子的分泌量；③DC细胞增强了CIK细胞的免疫原性；④激活机体B淋巴细胞产生非特异性体液免疫。

本研究结果显示，治疗后观察组疾病控制率明显高于对照组，骨髓抑制发生率明显低于对照组，2组发热、高热伴寒战、皮疹发生率比较差异无统计学意义。治疗后观察组外周血CD3+、CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明显高于治疗前及对照组，CD4+、CD4+/CD8+均明显低于治疗前及对照组；而对照组外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、CD56+/CD3+、CD16+/CD3+、IgG、IgM、IgA及IL-12、IFN-γ水平均明显低于治疗前，CD4+、CD4+/CD8+均明显高于治疗前。提示DC、CIK细胞具有一定的免疫功能调节作用，与蔡俊霞等[1]报道一致。

综上所述，DC-CIK联合传统化疗治疗晚期胃癌是一种安全可靠的治疗方案，能改善晚期胃癌患者的免疫功能，提高疾病控制率，且不良反应少，为广大中晚期胃癌患者提供了福音。但本研究未对患者的远期临床疗效进行统计分析，需进一步随访研究。且治疗过程中需注意以下几点：①需要严格把握治疗适用人群。本研究入选者均为增强CT/MRI平扫结果显示肿瘤无侵蚀纵隔重要血管及其神经，因侵蚀较严重时，化疗造成肿瘤组织坏死易出现大出血。②治疗过程中应让患者保持充足的营养供给，提高机体免疫力[11]。③治疗前后可以皮下注射IL-2，因化疗联合IL-2在小鼠模型实验中能很好地抑制肿瘤细胞生长[12]。

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[7]文洽先,朱娅,许彬,等. DC-CIK联合化疗在晚期胰腺癌治疗中的应用[J]. 现代中西医结合杂志,2013,22(36):4065-4066

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[12] Fagnoni FF,Zerbini A,Pelosi G,et al. Combination of radiofrequency ablation and immunotherapy[J]. Front Biosci,2008,13(2):369-381

[作者简介]马易，女，主要从事胃癌的相关治疗。 [通信作者]孙哲，E-mail:750036087@qq.com

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.007

[中图分类号]R735.2

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)21-2303-03

[收稿日期]2016-01-15

Study on clinical efficacy of chemotherapy combined with DC-CIK on the patients with advanced gastric cancer and its influence on immune function

MA Yi, LI Yuxin, SUN Zhe

(The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China)

Abstract:Objective It is to observe the clinical efficacy of chemotherapy combined with DC-CIK on the patients with advanced gastric cancer and its influence on the immune function. Methods 180 patients with advanced gastric cancer were randomly divided into observation group (90 cases) and control group (90 cases). Two groups of patients were treated with chemotherapy (oxaliplatin + 5-fluorouracil), and plus DC-CIK treatment of self-immune cells on the basic of chemotherapy in observation group. The clinical efficacy, adverse reactions, immune function were observed before and after treatment in two groups. Results After treatment, the disease control rate of the observation group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the incidence of bone marrow suppression was significantly lower than that of the control group (P<0.05), there was no significant difference in the incidence of fever, chills combined fever, rash in the two groups (P>0.05). After treatment, the levels of IL-12, IFN-γ in the peripheral blood were higher in the observation group (P<0.05) but lower in the control group than before treatment (P<0.05); the levels of CD3+, CD8+, CD56+/CD3+, CD16+/CD3+, IgG, IgM, IgA in peripheral blood were increased (P<0.05) but CD4+ and CD4+/CD8+ lower than before treatment in the observation group (P<0.05), however, the levels of CD3+, CD8+, CD56+/CD3+, CD16+/CD3+, IgG, IgM, IgA, IL-12, IFN-γ in peripheral blood were lower but CD4+ and CD4+/CD8+ were higher than before treatment in the control group (all P<0.05). Conclusion Chemotherapy combined with DC-CIK can improve the immune function, and increase the disease control rate, and with little adverse reactions.

Key words:advanced gastric cancer; chemotherapy; DC-CIK; cytokine; immune function