吡罗昔康注射液的有关物质及含量分析

陈敬苏 薛 薇

（锦州市中医医院，辽宁 锦州 121000）



吡罗昔康注射液的有关物质及含量分析

陈敬苏 薛 薇

（锦州市中医医院，辽宁 锦州 121000）

【摘要】目的 高效液相法测定吡罗昔康注射液含量及有关物质方法。方法 色谱柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 µm）；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0 mL/min；检测波长：338 nm；柱温：30 ℃。结果 吡罗昔康在7.8～192.9 μg/mL范围内呈良好线性关系y=66724x-172143（r=0.9999）。回收率：准确度试验测得高中低三个浓度的总平均回收率为101.01%，精密度试验RSD为0.11%（n=8）。结论 本法方便、简单，准确，适于吡罗昔康注射液含量及有关物质的测定。

【关键词】高效液相；吡罗昔康注射液；含量测定；有关物质

吡罗昔康是一种非甾体类抗炎药物［1］，主要用于类风湿，风湿性关节炎和急性肌肉骨骼疾患等［2］。2010年版中国药典采用容量法测定吡罗昔康含量［3-8］，但对吡罗昔康注射液的有关物质尚未见报道，故此本文对HPLC法测定吡罗昔康注射液的含量和有关物质进行研究，报道如下。

1 仪器与试药

XS205型电子天平（瑞士梅特勒公司，精密度：0.01 mg），岛津LC-20AT高效液相色谱仪，LabSolution（Lab工作站）。

吡罗昔康对照品（中国药品生物制品检定所，批号201403）；吡罗昔康注射液（浙江尖峰药业有限公司，规格为2 mL∶20 mg）；甲醇（色谱纯），冰乙酸（AR天津市东区红岩试剂厂），二甲基亚砜（AR天津市科密欧化学试剂有限公司），水（超纯水）。

2 方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 µm）；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0mL/min；检测波长：338 nm；柱温：30 ℃，进样量：20 µL。

2.2干扰试验：精密称取吡罗昔康对照品12.19 mg，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液，精密量取储备液5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；另按处方比例同法配制空白辅料溶液，分别测定，可见在该色谱条件下，吡罗昔康能达到基线分离且峰形稳定，试剂及辅料不影响吡罗昔康含量测定。

2.3线性试验：精密量取储备液1，5，10，15，20 mL，分别置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，同时取储备液，分别测定。以吡罗昔康对照品浓度C（μg/mL）为横坐标，峰面积A为纵坐标绘制标准曲线。线性范围7.9～132.1 μg/mL，回归方程为：y=66724x-172143 （r=0.9999，n=6），表明吡罗昔康在进样浓度7.9～132.1 μg/mL范围

通过载气可以把其放入到原子化器中进行检测。对比以前的检测方法，因为许多基体没有办法进入到原子化器中，无法发挥出降低基体的作用，背景校正是没有任何效果的。而且，仪器结构不难被设计成同时测定多种元素的模式。目前，这种方法是原子荧光法在生物样品理化检验中应用范围最广的一种形式。除此之外，在国家标准、检验检疫行业标准、地方标准中，它都发挥着一定的作用。

内呈良好线性关系。

表1　含量及有关物质测定结果（%，n=3）

2.4精密度试验：精密量取储备液10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后测定；峰面积的RSD为0.23%（n=5）。

2.5稳定性试验：取精密度试验项下测试液，在0，2，4，6，12，24 h分别测定，6次测定，峰面积的RSD为0.31%，稳定性良好。

2.6回收率试验：按处方比例（80%，100%，120%）模拟吡罗昔康注射液，精确配制200 mL，混合均匀，精密量取2 mL置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后测定，将所得峰面积代入回归方程计算回收率（每个浓度做三份），结果3种浓度的总平均回收率为101.12%，RSD为0.13%，n=9。

2.7重复性试验：取一样品，按回收率项下方法制备测试液，测得平均含量为99.1%，RSD=0.19%（n=3）。

2.8样品测定

2.8.1含量测定：精密量取吡罗昔康注射液2 mL置100 mL容量瓶中，按回收率项下方法操作，计算含量（n=3）。

2.8.2有关物质的测定。供试品溶液的制备：取本品4 mL，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，既得。对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。阴性空白试验：按处方配制吡罗昔康的阴性空白溶液。专属性试验：将本品置不同条件下进行加速破坏，考察破坏后的产物与主药的色谱分离情况：取吡罗昔康储备液5 mL，置4500 Lx光强度下10 d后，加甲醇至10 mL；作为光破坏样品溶液。取吡罗昔康储备液10 mL，水浴加热30 min，放冷后加甲醇至10 mL，作为热破坏样品溶液。取吡罗昔康储备液5 mL，加入1 mol/L的盐酸溶液，放置1 h后，加1 mol/L的氢氧化钠溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作为酸破坏样品溶液。取吡罗昔康储备液5 mL，加入1 mol/L的氢氧化钠溶液，放置1 h后，加1 mol/L的盐酸溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作为碱破坏样品溶液。取吡罗昔康储备液5 mL，加入10%双氧水溶液2 mL，水浴30 min后，放冷，加甲醇至10 mL作为氧化破坏样品溶液。取上述破坏性试验所得溶液，分别测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

3 结 果

在酸和碱以及热、光照和氧化条件下均有不同程度的降解，各降解产物峰与主成分峰均能达到较好的分离。光破坏时间越长，有关物质越多，主成分越少；热破坏生成的有关物质数量多；强氧化剂10%双氧水可以把吡罗昔康完全氧化为有关物质，其中保留时间为3.802 min的占84.1%。

样品中吡罗昔康有关物质检查：取供试品溶液和对照溶液各20 µL，分别测定，记录供试品溶液的色谱图至主成分峰保留时间的3倍，以自身对照法计算杂质含量，结果见表1。

4 结 论

本次选择高效液相色谱法，线性关系良好，精密度好，准确性高，该方法可以用于吡罗昔康的有关物质和含量测定；吡罗昔康注射液有关物质结果表明，易被热，光，酸，碱，氧化物质破坏，储存宜密封避光。

参考文献

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2.2微波消解-原子荧光光谱法：微波消解法主要是指：把特定酸以及样品一起存放至消解罐之后，盖好盖子，并且放置到微波消解仪中，根据特定的程序使得生物样品溶解。这与过去的消解方法相比，具备如下优势：①样品可以被彻底消解掉，并且不易造成易挥发元素的过度损失，回收情况较好；②消化的速度相对较快，空白值不高、没有元素损失并且没有污染；③不易造成试剂的浪费，给环境造成的影响比较小。

2.3液相色谱-原子荧光光谱法：这种方法相对复杂，它主要由两个部分连接组成，即色谱分离系统和光谱检测系统。所谓色谱分离系统，指的是把待测的元素的多种形态按照停留时间的差异进行排序。换句话说，就是使其达到形态分离。而接口装置把色谱分离出来之后，其有机态元素能够通过一系列的转化反应变成无机态；光谱检测系统则会将待测的元素转化成一种光谱信号。在这个过程中，要将保留的时间、光谱波长等，当作定性的参考资料，光强度峰高、峰面积则是用来作为定量的依据。这种方法的优点是，能够使得元素的形态分析更加准确，缺点是其仪器的组成部位过于复杂，应用范围相对狭窄。

3 展 望

使用荧光法检测生物样品，仪器方便操作，并且它的性能相对较好，价格比较便宜等，现已经被广泛地应用到生物样品检测标准中来。调查发现，当下的荧光检测研究方向集中表现为：①参照不同的基质、目标化合物，选择最为合理的提取方式以及净化方法。比如固相萃取小柱净化等；②依据研发反应活性高、量子产量大等特点，使得检测领域得以扩宽；③研究荧光检测器，与别的分离装置之间的联用接口技术。最近几年，由于电学的不断进步，原子荧光法也得到了一定层次的发展。在目前出现的新型光源中，如激光、发光二极管等，使得光强度不断提升；小型化乃至微型化成为主要发展趋势；在联用技术方面，都得到了不同层次的发展。

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中图分类号：R9

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）04-0046-02