南京医科大学第一附属医院2014年临床常见革兰阴性菌分布及耐药分析

鲁科峰，许雨乔，王　珏，夏文颖，孙鹏飞，文 怡，陈友华，梅亚宁



南京医科大学第一附属医院2014年临床常见革兰阴性菌分布及耐药分析

鲁科峰1 ，2，许雨乔1，王珏1，夏文颖1，孙鹏飞1，文 怡1，陈友华1，梅亚宁1

摘要：目的 分析南京医科大学第一附属医院2014年临床分离革兰阴性菌的分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法 细菌鉴定采用API系统或VITEK-2 Compact自动鉴定仪；细菌药物敏感试验采用纸片扩散法（K-B法）或稀释法；数据统计分析用WHONET 5.6软件。结果 2014年共分离出各类细菌共7 931株，其中革兰阴性菌5 088株，占64.2 %，排名前3位的是大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌。共分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌195株，占肠杆菌科的6.9 %；多重耐药鲍曼不动杆菌613株，占鲍曼不动杆菌的66.5 %；多重耐药铜绿假单胞菌197株，占铜绿假单胞菌的28.7 %。结论 2014年该院革兰阴性菌耐药主要为耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌、多重耐药鲍曼不动杆菌和多重耐药铜绿假单胞菌，进行细菌耐药监测有利于指导临床合理用药。

关键词：革兰阴性菌； 耐药监测； 多重耐药菌

革兰阴性菌是引起医院感染的主要病原菌。近10年临床对广谱抗菌药物的广泛使用，使耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）、多重耐药鲍曼不动杆菌和多重耐药铜绿假单胞菌数量不断增加［1-3］，细菌耐药已成为我们面临并急需解决的一大挑战。流行病学调查显示细菌耐药性具有地域性，不同地区不同医院细菌的耐药性不全相同，南京医科大学第一附属医院是江苏省规模最大的三级甲等医院之一，患者覆盖南京及周边地区。为了解本地区细菌耐药情况，本文分析了2014年我院临床分离的革兰阴性菌耐药性监测数据，为指导临床合理用药提供依据。

1　材料与方法

1.1菌株来源

5 088株革兰阴性菌分离自我院2014年1—12月临床标本，包括呼吸道标本、泌尿道标本、伤口脓性分泌物、血液、无菌体液和粪便等。

1.2菌株鉴定及药敏试验

细菌鉴定采用API鉴定系统或VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪。细菌药物敏感试验采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪或纸片扩散法（K-B法）。药敏结果按照美国CLSI 2014年版标准判读。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853和金黄色葡萄球菌ATCC 25923。

本研究中多重耐药（MDR）菌株定义为：该菌株对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、氟喹诺酮类和氨基糖苷类中的3类或以上抗菌药物不敏感［4］。

1.3统计方法

采用世界卫生组织细菌耐药监测网推荐的WHONET 5.6软件进行数据分析。

2.1细菌构成及标本来源

2.1.1 细菌 2014年1—12月全院共收集细菌7 931株，其中革兰阴性菌5 088株，占64.2 %。本院革兰阴性菌排名前5位的依次是大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、克雷伯菌属、铜绿假单胞菌和肠杆菌属，见表1。

2.1.2 标本来源 标本主要来自呼吸道、泌尿道、伤口脓性分泌物、血液、粪便、无菌体液和脑脊液等，排名前3的是呼吸道标本、泌尿道标本和伤口脓性分泌物，分别占59.8 %、18.3 %和10.4 %。呼吸道标本分离菌主要是鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌；泌尿道标本分离菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌为主；伤口脓性分泌物分离菌主要是大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。

2.2革兰阴性菌药物敏感性分析

2.2.1 肠杆菌科细菌 2014年共分离到肠杆菌科

2 　结果

细菌2 843株，占革兰阴性菌的55.9 %。表2为肠杆菌科主要属的细菌耐药情况，大肠埃希菌对头孢他啶的耐药率为39.8 %，对头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为30.3 %、1.5 % 和0.8 %。克雷伯菌属对美罗培南的耐药率为8.2 %，对亚胺培南耐药率为13.6 %。肠杆菌属和枸橼酸杆菌属对亚胺培南和美罗培南的耐药率均＜8 %。变形杆菌属对美罗培南的耐药率为0.6 %。沙雷菌属对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率均＜10 %，对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为13.8 %和5.0%。2014年共分离5株沙门菌属、1株志贺菌属和17株摩根菌属，因样本量太少不予统计药敏结果。

表1　革兰阴性菌分布及构成比Table 1 Distribution of gram-negative bacterial species in 2014

2014年共分离195株CRE，主要是肺炎克雷伯菌，占53.3 %，其次为大肠埃希菌，占12.3%。黏质沙雷菌、变形杆菌属和肠杆菌属中碳青霉烯类耐药菌株有增多趋势。2.2.2 不发酵糖革兰阴性菌 临床该类菌占革兰阴性杆菌的32.4 %，以鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌为最多。其中鲍曼不动杆菌921株，占18.1 %；87.4 %鲍曼不动杆菌来自痰液标本；药敏结果显示，鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为67.6 %和68.4 %，其中MDR有613株，占66.5 %；MDR鲍曼不动杆菌主要分布在ICU，占全院的59.8 %。铜绿假单胞菌683株，占13.4 %，其中74.1 %的菌株来自痰液标本，对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为29.9 %和24.0 %，2014年共分离MDR铜绿假单胞菌197株，占28.7 %。嗜麦芽窄食单胞菌203株，对米诺环素、甲氧苄啶-磺胺甲唑和左氧氟沙星的耐药率为4.1%～15.5 %。洋葱伯克霍尔德菌42株，对头孢他啶和美罗培南的耐药率分别为36.1 %和44.3%，对甲氧苄啶-磺胺甲唑和左氧氟沙星的耐药率则分别为12.9 % 和18.8 %，见表3。

2.2.3 其他革兰阴性菌 2014年全年共分离了48株流感嗜血杆菌，对氨苄西林敏感率为42.9 %，对亚胺培南和美罗培南的敏感率分别为95.7 %和92.0 %，见表4。本实验室还分离了布鲁菌属、巴斯德菌属、希瓦菌属、金黄杆菌属和艾肯菌属等，均在10株以内，不作统计分析。

表2　肠杆菌科细菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 2 Susceptibility of Enterobacteriaceae species to antimicrobial agents

.表3　不发酵糖革兰阴性菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 3 Susceptibility of the non-fermenting gram-negative bacteria to antimicrobial agents

表4　流感嗜血杆菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 4 Susceptibility of Haemophilus infuenzae isolates to antimicrobial agents

3　讨论

2014年我院临床共分离出细菌7 931株，以革兰阴性菌为主，占64.2 %。革兰阴性菌中检出率最高的是大肠埃希菌，其次为克雷伯菌属和鲍曼不动杆菌，与2013年江苏地区革兰阴性菌分离情况相似［5］。从标本来源分析，2014年分离自呼吸道标本的细菌占59.8 %，较2013江苏地区平均水平39%明显上升［5］，痰液临床价值有限，比例过高，来自尿液、血液等无菌体液的比例则相对较低。

革兰阴性菌对抗菌药物耐药问题日益严重。2014年我院临床分离的肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素的耐药率为34.5 %，高于2013年全国平均水平27.6%［6］。肠杆菌科细菌对美罗培南的耐药率为3.3%，低于2013年江苏地区的8.1%和全国平均水平6.7%，对亚胺培南的耐药率为5.8%，高于全国水平的5.1%，但比江苏地区平均水平8.4%低［5-6］。2014年本院CRE的分离率为6.8 %，与2013年江苏地区平均水平8%相比有所下降［4］，主要集中于ICU患者。与前几年相比，除克雷伯菌属和埃希菌属，变形杆菌属和肠杆菌科等CRE菌株有上升趋势。CRE治疗目前正面临着无药可用的困境，有研究表明，2种或2种以上抗菌药物联合用药优于单一用药，碳青霉烯类协同氨基糖苷类或替加环素能够降低CRE感染患者病死率［7］。

不发酵糖革兰阴性杆菌耐药也是近年来临床抗感染的难点，尤其是在ICU。2014年本院分离的鲍曼不动杆菌占革兰阴性菌的18.1 %，高于2013年江苏地区分离率［4］；MDR株的分离率为66.5 %，耐药率高于2013年江苏地区平均水平［4］，表明鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药有重新上升趋势。鲍曼不动杆菌分离自痰液标本，主要集中在ICU，因此，区分感染病原菌还是定植菌尤为重要。本次分离的铜绿假单胞菌占13.4 %，与2013年江苏地区相比略有下降，其对碳青霉烯类的耐药率无明显变化。

医院感染仍以革兰阴性菌为主，细菌耐药问题较为突出的是CRE、MDR鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。需加强医院感染防控和细菌耐药监测，指导临床合理使用抗生素。

参考文献：

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中图分类号：R378

文献标识码：A

文章编号：1009-7708（2016）03-0323-04

DOI：10.16718/j.1009-7708.2016.03.012

收稿日期：2015-06-11 修回日期：2015-11-29

基金项目：江苏省实验诊断学重点实验室重大基金项目（XK201114）。

作者单位：1.南京医科大学第一附属医院检验科，南京 210000；2.常州市第二人民医院检验科。

作者简介：鲁科峰（1980—），男，本科，主治医师，主要从事细菌耐药性研究。

通信作者：许雨乔，E-mail：joe8165@163.com。

Distribution and antimicrobial resistance of clinical gram-negative bacteria in the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University during 2014

LU Kefeng， XU Yuqiao， WANG Jue， XIA Wenying， SUN Pengfei， WEN Yi， CHEN Youhua， MEI Yaning. （Department of Laboratory Medicine， the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210000， China）

Abstract:Objective To investigate the distribution and antimicrobial resistance profile of clinical gram-negative bacterial isolates in the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University during 2014. Methods Bacteria identifcation was performed by API system or the VITEK-2 Compact automatic identifcation system. Disk diffusion susceptibility testing or VITEK-2 Compact automatic identification system was used to determine the susceptibility to antimicrobial agents. All data were analyzed using WHONET 5.6 software. Results Among the total 7 931 clinical isolates in 2014， gram-negative bacteria accounted for 64.2% （5 088/7 931）. The top three pathogens were E. coli， A. baumannii and K. pneumoniae. Notably， during the year 2014， 195 strains of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae were isolated， about 6.9% of all the Enterobacteriaceae isolates. Meanwhile， 613 （66.5%） strains of multiple drug resistant A. baumannii and 197 （28.7%） strains of multiple drug resistant P. aeruginosa were isolated. Conclusion During the year 2014， the resistance of the gram-negative bacteria in this hospital is mainly characterized by carbapenem-resistant Enterobacteriaceae， multiple drug resistant A. baumannii and multiple drug resistant P. aeruginosa. Surveillance of antimicrobial resistance is benefcial for rational use of antibiotics.

Key words:gram-negative bacterium； bacterial resistance surveillance； multiple drug resistant bacterium