百花含片的急性毒性试验

林伊莉，陈　丹，曾华平，郭，廖淑彬（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

百花含片的急性毒性试验

百花含片；最大给药量；急性毒性试验；小鼠

百花含片系由中药药对百合Lilimu brownie F. E.Brown var.viridulum Baker及款冬花Tussilago farfara L.制成的中药复方制剂，具有润肺止咳功效。为评价百花含片的安全性，本实验依据中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则［1］，采用最大给药量试验法，即通过最大给药浓度及最大小鼠灌胃体积给药，观察小鼠的急性毒性反应［2］，评价百花含片的口服用药安全性。

1　仪器与材料

1.1仪器ARA520百分之一电子天平 （梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；AR2140万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

1.2试药百花含片（自制，0.6 g/片），蒸馏水。

1.3动物健康4～5周龄昆明小鼠40只，清洁级，雌雄各半，体质量24～29 g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：SCXK（泸）2007-0005。实验前在福建中医药大学实验动物中心适应性饲养3 d。

2　方法与结果

2.1药液的配制取百花含片42.25 g，充分研磨成粉，用蒸馏水50 mL配制成浓稠混悬液，并以灌胃针测试至吸取较难，但不至无法吸取的浓稠度为百花含片的最大浓度药液（0.845 g/mL）。

2.2预实验取昆明小鼠20只，雌雄各半，给药前禁食不禁水16 h，灌胃给药玳玳果黄酮降脂滴丸药液1次（0.4 mL/10 g，最大灌胃体积），连续观察7 d，找出100%死亡率（Dm值）。结果小鼠状况良好，无动物死亡，无数据计算玳玳果黄酮降脂滴丸LD50，故实验选择采用测定百花含片的最大耐受量（MTD）法试验。

2.3最大耐受量试验取40只，雌雄各半，随机分为给药组和空白组，每组20只，雌雄各10只，给药前禁食不禁水12 h。空白组灌胃蒸馏水0.4 mL/ 10 g，给药组0.4 mL/10 g，按最大体积灌胃百花含片最大浓度药液。连续观察14 d，观察记录动物外观、行为、分泌物、排泄物、中毒症状及死亡情况，同时称量给药前、给药后第1、2、3、4、6、7、9、11、14 d体质量，观察小鼠体质量变化，第14天处死2组小鼠，对其主要脏器进行肉眼观察比较，称取各脏器湿重，计算脏器指数。小鼠反应症状指标见表1。

2.4观察给药后症状给药后当天密切观察6 h 内2组小鼠灌胃后的症状。结果表明，给药后15～30 min，小鼠行动缓慢，对外界刺激反应迟钝，但过后均逐渐恢复正常活动，饮食饮水正常，观察期内无动物死亡。

2.5体质量变化小鼠给药后连续观察14 d，称取2组动物体质量。结果表明，给药组和空白组体质量变化无显著性差异，结果见表2。

表2　2组体质量比较（±s）g

表2　2组体质量比较（±s）g

给药后/d组别　性别2 1 3 4 6 7 9空白组给药组雌性雄性雌性雄性给药前25.67±0.94 29.67±1.07 26.64±1.28 25.48±1.16 27.33±1.83 30.65±1.10 27.94±1.04 26.26±1.20 25.94±1.38 30.03±1.19 25.87±1.30 25.89±0.74 25.92±1.54 29.64±1.51 26.76±1.59 25.95±0.72 28.25±1.30 32.47±1.19 29.02±2.28 27.72±0.85 25.64±1.54 30.17±0.43 26.74±1.90 25.98±1.10 29.13±1.08 34.65±0.96 30.73±2.20 29.73±1.35 29.91±1.32 35.52±0.99 31.65±2.11 30.89±1.76 11 30.86±1.98 36.73±1.20 31.09±1.20 31.95±2.05 14 31.23±2.49 35.28±1.19 31.11±1.26 31.16±1.84

2.6小鼠脏器指数小鼠给药后第14天，脱颈处死，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胃、胸腺，称取各脏器湿重，计算脏器指数。

脏器指数＝脏器湿重（mg）/体质量（g）

结果表明，2组各脏器的颜色、质地无差异，脏器指数无显著性差异，结果见表3。

表3　小鼠脏器指数（±s）

表3　小鼠脏器指数（±s）

组别空白组心肝脾肺肾胃给药组性别雌性雄性雌性雄性4.52±0.72 5.57±0.64 4.66±0.33 5.27±0.85 40.38±4.84 41.74±1.45 40.55±4.47 43.20±3.48 3.30±0.46 2.22±0.15 3.43±0.55 2.72±1.02 6.60±1.12 7.15±1.12 7.19±0.99 5.93±0.30 9.90±1.16 13.90±1.17 10.37±1.10 13.92±1.52 10.40±1.06 8.07±1.13 9.73±0.98 7.68±0.35胸腺3.85±0.17 2.38±0.51 4.45±0.72 2.84±0.44

3　讨论

3.1百花含片基于百花丸为模型复方，保留古方含服的给药方式，以中药百合和款冬花的提取物为制剂原料，改进剂型为中药口含片，具有润肺止咳的功效，用于津少咽干，虚烦潮热，咳喘痰少，痰中带血。百花含片初步安全性预实验，以最大给药浓度、最大给药体积小鼠1次口服灌胃，无Dm值。

3.2小鼠给药后第1～3天，给药组小鼠体质量略为减轻或增加缓慢，其主要原因为满负荷灌胃操作所致，随着时间推移，体质量恢复正常。

3.3根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》进行MTD法的测定，采用小鼠最大耐受药量倍数计算，以耐受人临床用量的100倍以上为安全，根据百花含片人临床用量9 g/d计算，结果表明最大耐受量相当于临床用量的187倍。小鼠急性毒性实验结果表明，百花含片毒性低，口服用药安全。

［1］国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则［S］.北京：中国医药科技出版社，2006：209-216.

［2］连赟芳，陈丹，郑利，等.玳玳黄酮滴丸的急性毒性试验［J］.福建中医药大学学报，2014，24（1）：24-26.

R285.5

B

1000-338X（2016）01-0024-02

2015-11-18

福建省科技计划项目（2010Y2004）

林伊莉（1990—），女，2013级药物分析学专业硕士研究生，主要从事中药制剂与质量分析研究。

陈丹（1961—），女，教授。E-mail：gscd2@163.com