马尾藻多糖的最佳提取工艺

张文清（福建卫生职业技术学院附属福建省级机关医院，福建 福州350003）

马尾藻多糖的最佳提取工艺

张文清
（福建卫生职业技术学院附属福建省级机关医院，福建 福州350003）

马尾藻多糖；提取工艺；正交试验

（褐藻胶、褐藻糖胶等）、氨基酸、微量元素以及甘油糖脂、甾醇、萜、多酚等多种营养成分，具有抗氧化、

抗肿瘤、抗微生物、改善心血管疾病、调节免疫等多种生理活性。笔者通过考察提取时间、提取温度、料液比、提取次数，用正交试验设计优化马尾藻多糖的最佳提取工艺，为马尾藻的开发应用提供实验依据。

1　材料与仪器

1.1药材马尾藻采自福建省莆田市湄洲岛海域，经福建中医药大学黄泽豪副教授鉴定为马尾藻

Sargassum horneri。

1.2试剂分析纯葡萄糖 （上海卓康生物科技有限公司）；硫酸（汕头市西陇化工股份有限公司）；苯酚（国药集团化学试剂有限公司）。

1.3仪器HH-S恒温水浴锅（上海普渡生化科技有限公司）；AL104电子天平 （瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；S22PC型紫外-可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；XL-30C粉碎机（广州旭朗机械有限公司）。

2　方法

2.1葡萄糖标准溶液的配制精密称取在105℃、干燥6 h、除去结晶水的葡萄糖100 mg，定容至100 mL瓶中，用超纯水配成1 mg/mL的葡萄糖母液，再用超纯水稀释10倍得到100μg/mL的葡萄糖标准溶液。

2.2标准曲线的测定参考文献［3］，精密吸取葡

萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至试管中，用蒸馏水补至1 mL，依次加入6%苯酚溶液1 mL、浓硫酸5 mL，加试管塞摇匀后，室温放置10 min冷却进行显色；以1 mL超纯水取代葡萄糖标准溶液同上法操作作为空白对照，用紫外可见分光光度计，在620 nm处测定吸光度。

2.3供试品溶液的制备① 提取原料预处理：取马尾藻，晒干，用粉碎机粉碎，过40目筛，备用。②供试品溶液的制备：取马尾藻提取过滤后，定容至250 mL，取1 mL用超纯水稀释定容至50 mL，用紫外-可见分光光度计在620 nm处测定并计算。

2.4单因素实验

2.4.1提取时间对多糖提取量的影响称取样品10 g，加200 mL超纯水，80℃搅拌提取，于1、2、3、4 h取样检测，考察提取时间对多糖提取量的影响。

2.4.2提取温度对多糖提取量的影响称取样品10 g，4份，加200 mL超纯水，于70℃、80℃、90℃、100℃搅拌提取3 h取样检测，考察提取温度对多糖提取量的影响。

2.4.3料液比对多糖提取量的影响称取样品10 g，4份，按10、15、20、25倍量加入水，于90℃搅拌提取3 h取样检测，考察料液比对多糖提取量的影响。

2.4.4提取次数对多糖提取量的影响称取样品10 g，按20倍量加入超纯水，于90℃搅拌提取3 h后，过滤，残渣再进行提取。同法操作2次，考察提取次数对多糖提取量的影响。

2.5正交试验设计考察提取时间、提取温度、料液比、提取次数4个因素，每个因素选取3水平，以马尾藻多糖的提取量为指标，选用L9（34）设计表格进行正交实验，因素水平见表1。

表1　因素水平表

2.6验证实验取马尾藻粉末3份，按确定的提取工艺进行提取，按照2.3项方法，制备成供试品溶液，测定多糖的含量。

3　结果与分析

3.1标准曲线及回归方程以吸光度（A）为纵坐标，葡萄糖的浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，进行线性回归，建立回归方程，其线性回归方程为：

3.2单因素实验

3.2.1提取时间对马尾藻多糖提取量的影响称取样品10 g，加入200 mL超纯水，于80℃搅拌提取，分别于1、2、3、4 h时取样检测，结果见图1。

由图1可知：随着提取时间增加，马尾藻提取量增大，当提取时间增加到3 h后，马尾藻提取量基本保持稳定，再延长提取时间，提取量几乎没有变化。因此，选择提取时间为3 h。

3.2.2提取温度对马尾藻多糖提取量的影响称取样品10 g，4份，分别加入200 mL超纯水，分别于70、80、90、100℃下搅拌提取3 h时取样检测，结果见表2。

表2　提取温度对马尾藻多糖提取量的影响

由表2可得，随着提取温度的增加，马尾藻提取量也逐渐增大，当到90℃后，提取量增加缓慢。因此，选择提取温度为90℃。

3.2.3料液比对马尾藻多糖提取量的影响称取样品10 g，4份，按10、15、20、25倍量加入超纯水，于90℃下搅拌提取3 h时取样检测，结果见表3。

表3　料液比对马尾藻多糖提取量的影响

由表3可得，随着料液比的增加，马尾藻多糖的提取量也跟着增加，当料液比达到1：20后，增加缓慢，因此，选择料液比为1：20。

3.2.4提取次数对马尾藻多糖提取量的影响称取样品10 g，按照料液比为1∶20加入超纯水，于90℃下搅拌提取3 h后，过滤，残渣再进行提取，同法操作2次，结果见表4。

表4　提取次数对马尾藻多糖提取量的影响

由表4可得，提取3次共获得马尾藻多糖78 mg，提取第 1、2、3次占总提取量的 80.51%、16.28%、3.21%。因马尾藻为低值原料，从提取效率、成本考虑，选择提取1次为宜。

3.3正交试验结果按照正交试验设计的方法提取，测定马尾藻提取液中多糖的含量，计算马尾藻多糖提取量，试验结果见表5。

表5　正交实验结果

由表5可得，提取温度对马尾藻多糖提取量影响最显著，提取次数次之，提取时间与料液比对马尾藻多糖提取量影响比较小。综合实验结果得出4个因素对多糖提取量的影响程度大小为：提取温度＞提取次数＞料液比＞提取时间。综合以上结果，最佳提取工艺为：料液比1∶25，在90℃下提取3 h，提取3次。在实际生产及应用上，考虑到成本、效率等问题，采用料液比为1∶20，在90℃下提取3 h，提取1次为最佳条件。

3.4验证试验取马尾藻粉末3份，按照确定的最佳提取工艺进行提取，按照2.3项供试品溶液制备的方法，制备成供试品溶液，测定多糖的含量，结果见表6。

在选取的最佳提取工艺条件下，马尾藻多糖的平均提取量为64.8 mg/g，相对标准偏差3.17%，实验结果表明，该提取工艺操作简单、稳定可行。

表6　验证实验结果

4　讨论

马尾藻多糖作为免疫调节剂已被国内外大多数学者所认可，其抗肿瘤作用主要是通过激活免疫细胞，提高机体免疫力，从而达到有效控制癌细胞的增殖。卢虹玉等［4］考查马尾藻多糖对S180小鼠瘤质量、胸腺等免疫器官的影响，分别测定小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX），丙二醛（MDA）的活性，结果表明马尾藻多糖可通过提高机体免疫功能和抗氧化能力，从而抑制肿瘤的生长。本研究用热水提取法考察马尾藻多糖的最佳提取工艺，在该提取工艺下，马尾藻多糖的平均提取量为64.8 mg/g。本工艺操作简单，稳定可行，可为马尾藻的进一步开发应用提供实验依据。

［1］王一兵，柯珂，张荣灿.马尾藻多不饱和脂肪酸提取、分离及成分分析［J］.海洋科学，2014，38（7）：57-63.

［2］陈震，刘红兵.马尾藻的化学成分与生物活性研究进展［J］.中国海洋药物杂志，2012，31（5）：41-51.

［3］原泽知，程开明，黄文，等.海带多糖的提取工艺及降血脂活性研究［J］.中药材，2010，33（11）：1795-1798.

［4］卢虹玉，刘义，吉宏武，等.全缘马尾藻褐藻多酚的抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用研究 ［J］.现代食品科技，2013，29（4）：702-705.

R284.2

B

1000-338X（2016）01-0018-03据文献［1-2］报道，马尾藻中含有马尾藻多糖

2015-10-12

张文清（1970—），女，副主任中药师，副教授，主要从事药学临床研究。