鹅不食草油的薄层色谱鉴别及气相色谱含量测定

2016-08-08林伊莉曾华平廖淑彬福建中医药大学药学院福建福州350122

福建中医药 2016年1期

郭，陈　丹，林伊莉，曾华平，廖淑彬（福建中医药大学药学院，福建福州 350122）

·方与药·

目的建立鹅不食草油的质量控制方法。方法用薄层色谱法鉴别鹅不食草油，气相色谱内标法测定鹅不食草油中的乙酸菊烯酯及麝香草酚含量。程序升温：70℃，5℃/m in升至 160℃，再以3℃/m in升至180℃，再以8℃/m in升至240℃，保持10 m in。结果鹅不食草油供试品色谱在与乙酸菊烯酯、麝香草酚对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；乙酸菊烯酯、麝香草酚在0.1305～1.044 mg/m L和0.0630～0.5040mg/m L范围内线性关系良好，标准曲线分别为Y＝7.776X－3.1×10-2r＝0.9997，Y＝9.595X－2.1×10-2r＝0.9994；平均回收率分别为101.4%、100.9%。结论建立的鹅不食草油薄层色谱鉴别法及气相色谱含量测定法，准确度、重复性好，可为鹅不食草油的后续开发利用提供质量控制依据。

鹅不食草油；薄层色谱；气相色谱；乙酸菊烯酯；麝香草酚

鹅不食草是菊科石胡荽属植物鹅不食草［Centipeda minima（L.）A.Br.et Aschers.］的带花全草，具有通鼻窍、止咳喘的功效，主要用于风寒头痛、咳嗽痰多、鼻塞不通等。鹅不食草油是从鹅不食草中提取的挥发油，是鹅不食草治疗过敏性鼻炎、变异性哮喘的有效部位。鹅不食草油中含有乙酸菊烯酯、麝香草酚、棕榈酸、马鞭草烯醇、石竹烯等成分［1-6］，其中乙酸菊烯酯和麝香草酚为鹅不食草油的主要成分，经硅胶柱色谱分离所得含上述2种成分的分离物具有显著的抗炎镇痛活性［7］。为了对鹅不食草油进行质量控制，我们以乙酸菊烯酯和麝香草酚为指标，采用薄层色谱法鉴别鹅不食草油，用气相色谱内标法测定鹅不食草油中乙酸菊烯酯和麝香草酚的含量，为鹅不食草油的后续开发利用提供质量控制依据。

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent 6890N气相色谱仪、氢火焰离子化检测器（FID）、Agilent 6890N色谱工作站（美国安捷伦科技公司）；XS 205十万分之一电子天平、

AR 2140万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；Yoko-PN电动喷雾器（武汉药科新技术开发有限公司）。

1.2试药乙酸菊烯酯对照品（自制，98.33%）；麝香草酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100508-200902）；油酸甲酯（中国食品药品检定研究院，批号：190034-201001）；鹅不食草油（自制，批号：20150510、20150515、20150522）；硅胶 G板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20120604）；石油醚（60℃～90℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇均为分析纯。

2　方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1乙酸菊烯酯对照品溶液的制备精密称取乙酸菊烯酯对照品9.26 mg，置5 m L瓶中，用石油醚溶解并稀释至刻度，制得每1 mL含乙酸菊烯酯1.852 mg的溶液。

2.1.2麝香草酚对照品溶液的制备精密称取麝香草酚对照品5.12 mg，置5 mL瓶中，用石油醚溶解并稀释至刻度，制得每1mL含麝香草酚1.024 mg的溶液。

2.1.3混合对照品溶液的制备精密称取乙酸菊烯酯对照品10.15 mg、麝香草酚对照品3.11 mg，置5mL瓶中，用石油醚溶解并稀释至刻度，制得每1mL含乙酸菊烯酯2.03 mg、麝香草酚0.622mg的溶液。

2.1.4供试品溶液的制备精密称取鹅不食草油25 mg，置5 mL瓶中，用石油醚溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.5薄层色谱分析取乙酸菊烯酯对照品溶液、麝香草酚对照品溶液、供试品溶液各5μL，混合对照溶液10μL，点于同一硅胶G薄层板上。以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯（20∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%香草醛-硫酸试液，于105°C加热5 min，置日光灯下检视。实验结果表明，供试品色谱与对照品色谱在相应的位置上，显相同颜色的斑点，方法重复性良好。结果见图1。

2.2气相色谱法含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Agilent DB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；载气：N21 mL/ min，空气流量：300 mL/min，氢气流量：30 mL/min，尾吹气流量：45 mL/min；检测器：FID，检测器温度：240℃；进样口温度：180℃；进样量：1μL，分流进样，分流比为10∶1；柱温：70℃。程序升温：70℃，以5℃/min至160℃，3℃/min升至180℃，8℃/min升至240℃，保持10 min。

2.2.2乙酸菊烯酯对照品溶液的制备精密称取乙酸菊烯酯对照品13.05 mg，置5 mL瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1 mL含2.61 mg乙酸菊烯酯对照品溶液。

2.2.3麝香草酚对照品溶液的制备精密称取麝香草酚对照品6.30 mg，置5 mL瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1 mL中含1.26 mg麝香草酚对照品溶液。

2.2.4内标溶液的制备精密称取油酸乙酯对照品11.24 mg，置10 mL瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1 mL中含1.124 mg油酸甲酯的内标溶液。

2.2.5混合对照品溶液的制备取乙酸菊烯酯、麝香草酚对照品溶液各0.5 mL，置5 mL瓶中，加入内标溶液0.5 m L，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.6供试品溶液的制备与测定精密称定鹅不食草油10 mg，置 1 mL瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密吸取250μL，置 1 mL瓶中，加入内标溶液100μL，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得。

取待测溶液1μL，分别注入气相色谱仪，测定，计算。

2.2.7专属性试验取空白溶剂、混合对照品溶液、含内标供试品溶液各1μL，分别注入气相色谱仪，测定，乙酸菊烯酯、麝香草酚等各色谱峰分离完全，分析时间为42.2min。气相色谱图见图2～图4。

2.2.8标准曲线的制备与线性关系考察精密吸取乙酸菊烯酯、麝香草酚对照品溶液各50、60、80、100、200、300、400μL，置1 mL瓶中，分别加入100 μL内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，得到系列混合对照品溶液。分别吸取系列对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定。以对照品与内标物的峰面积比为纵坐标，对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果见表1，图5。

表1　线性关系测定结果

2.2.9精密度试验取同一混合对照品溶液，连续注入气相色谱仪6次，以对照品与内标物的峰面积比计算相对标准偏差RSD，结果见表2。

2.2.10稳定性试验精密称取鹅不食草油10 mg，制成含内标供试品溶液，4°C放置，在0、2、4、6、 8、12、24 h注入气相色谱仪，测定，分别计算乙酸菊烯酯与麝香草酚的含量及其RSD。结果表明，供试品溶液放置于4℃时在24 h内稳定，结果见表3。

表2　精密度试验结果

表3　稳定性试验结果

2.2.11重复性试验分别精密称取同一批鹅不食草油约10 mg，6份，按2.2.1、2.2.6项操作，测定，分别计算乙酸菊烯酯、麝香草酚的含量及RSD。实验结果表明，方法重复性良好，结果见表4。

2.2.12加样回收率试验精密称取已测含量的同一批鹅不食草油（乙酸菊烯酯含量为8.433%，麝香草酚含量为3.163%）5 mg，6份，分别精密加入乙酸菊烯酯及麝香草酚对照品溶液，按2.2.1、2.2.6项操作，测定乙酸菊烯酯及麝香草酚含量，计算回收率，结果见表5。

2.2.13样品测定称取鹅不食草油10mg，按2.2.1、2.2.6项操作，测定乙酸菊烯酯、麝香草酚的含量，结果见表6。

3　讨论

3.1鹅不食草油薄层色谱鉴别试验，采用硅胶G为固定相，曾比较了石油醚-乙酸乙酯、石油醚-二氯甲烷展开剂系统，但分离效果较差。也曾采用10%硫酸乙醇溶液作为显色剂，显色加热后斑点均呈黑色，较难辨别。经试验比较，最终选择硅胶G薄层板，石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯（20∶10∶1）为展开剂，0.5%香草醛-硫酸试液为显色剂的TLC鉴别方法，鉴别3批样品，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点，方法重复性良好。

3.2鹅不食草油成分复杂，GC法内标物选择试验时曾筛选了水杨酸甲酯、正十五烷、油酸甲酯等，其中水杨酸甲酯、正十五烷与鹅不食草油其它成分未能达到基线分离。油酸甲酯与鹅不食草油中的各成分达到良好分离，分离度大于1.5，且峰形尖锐，故选择油酸甲酯作为GC法同时测定鹅不食草油中乙酸菊烯酯、麝香草酚含量的内标物。