ZEB1在散发性伯基特淋巴瘤中的表达及意义

张守华　　黄慧　　徐红艳　　吴艳　　曾松涛　　黄传生　　杨文萍★



ZEB1在散发性伯基特淋巴瘤中的表达及意义

张守华1，2黄慧1徐红艳1吴艳1曾松涛1黄传生3杨文萍1★

［摘要］目的探讨ZEB1表达与散发性伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）临床病理参数之间的关系。方法收集33例BL患者临床病理资料，免疫组化检测Bcl⁃6、MUMl、ZEB1、E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白的表达，原位杂交检测EB病毒编码RNA（epstein⁃barr virus RNA，EBER）。结果33例BL 中Bcl⁃6、MUMl、ZEB1和EBER阳性率分别为90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3%（10例）。所有病例均不表达E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白。ZEB1表达与临床分期、MUMl表达和生存状态无关（P>0.05），与Bcl⁃6和EBER表达也无统计学意义（P=0.067、0.057）。结论BL不存在经典上皮间质转化现象，ZEB1表达可能与EB病毒感染有关，其具体机制有待进一步研究。

［关键词］伯基特淋巴瘤；免疫组织化学；ZEB1蛋白

伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）是儿童最常见的淋巴瘤［1］，虽然治愈率逐步提高，但仍有少部分患者复发而死亡［2］，因此了解其发病机制将有助于开展靶向治疗。转录因子ZEB1与上皮间质转化（epithelial⁃to⁃mesenchymal transition，EMT）有关，在多种肿瘤中表达，与预后有关［3］，其在弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）和套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）中已有报道［4⁃5］，与BL临床病理参数之间的关系不清楚。本实验收集33例BL患者临床资料，应用免疫组化检测Bcl⁃6、MUMl、ZEB1、E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白的表达，原位杂交检测EB病毒编码RNA （epstein⁃barr virus RNA，EBER），探讨ZEB1表达与散发性BL临床病理参数之间的关系。

1　资料与方法

1.1病例来源

收集江西省儿童医院病理科和江西省肿瘤医院病理科2000年1月至2013年12月术后进行化疗的33例BL患者临床病理资料，诊断标准参考第四版世界卫生组织淋巴造血系统肿瘤分类标准［6］。33例BL中男孩27例、女孩6例；就诊年龄为2~13岁，平均年龄5.8岁；发病部位为腹腔（30例）、颈部淋巴结（2例）、睾丸（1例）；临床分期为Ⅰ+Ⅱ期（12例）、Ⅲ+Ⅳ期（16例）、未分期（5例）。采用电话或查阅病例形式进行随访，随访截止时间为2014年8月31日。

1.2免疫组化和原位杂交

免疫组化检测采用链霉菌抗生物素蛋白⁃过氧化物酶连结法（streptavidin⁃perosidase，SP），Bcl⁃6、 MUMl、ZEB1、E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白表达试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。根据Bcl⁃6和MUMl的表达，将BL分为生发中心型（germinal center，GC）（Bcl⁃6+/MUMl⁃）、晚生发中心型（late⁃GC）（Bcl⁃6+/MUMl+）、后生发中心型（post⁃GC）（Bcl⁃6-/MUMl+）和套细胞样型（mantle cell⁃like）（Bcl⁃6-/MUMl-）［7］。EB病毒编码RNA（EB⁃ER）原位杂交检测试剂购自福建泰普国际生物学集团有限公司。操作按照说明书进行，当肿瘤阳性细胞>30%时判断为阳性。

1.3统计学方法

应用SPSS 17.0统计学分析软件，率的比较采用c2检验，不满足c2检验时用Fisher确切概率法。

2　结果

2.1随访结果

33例BL患者随访时间为4~120个月，其中生存27例、死亡6例（均为Ⅲ或Ⅳ期，病例4和5未完整切除且未做骨髓穿刺）（表1）。

表1　6例死亡患者的临床资料和免疫表型及EBV感染状态Table 1　Clinical data，immunotype and EBV infect status in 6 died cases

2.2免疫组化和原位杂交结果

33例BL中肿瘤细胞Bcl⁃6（图1）、MUMl（图2）、ZEB1（图3）和EBER（图4）阳性率分别为90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3% （10例）。所有病例均不表达E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白。根据Bcl⁃6和MUMl的表达，生发中心型24例、晚生发中心型6例、后生发中心型1例和套细胞样型2例。ZEB1表达与临床分期、MUMl表达和生存状态无关（P>0.05），与Bcl⁃6和EBER表达也无统计学意义（P=0.067、0.057）。6例死亡患者的临床资料和免疫表型及EBV感染状态见表1。ZEB1表达与临床病理参数之间的关系见表2，因有5例无临床分期而未纳入统计分析。

3　讨论

恶性淋巴瘤发病率占儿童肿瘤第3位［8］，伯基特淋巴瘤为主要病理学类型，大约占儿童非霍奇金淋巴瘤（non⁃Hodgkin lymphoma，NHL）的30%~ 50%［6］，其特征是恶性度高、进展快、具有高度的侵袭性，常伴有中枢神经系统及骨髓的累及；传统治疗方案多采用高强度的化疗，但骨髓抑制及毒副作用常导致治疗失败。因此，亟待阐明高度侵袭性的分子调控机制，探寻新的治疗策略。EMT是指上皮细胞在特定的生理与病理情况下失去极性和细胞间的连接性，向具有间质表型细胞转化的现象，促使细胞获得较强侵袭能力，同时EMT也被认为是影响肿瘤化疗疗效的一个新的重要机制［9］。ZEB1是ZEB转录因子家族一员，含有2个锌指结构簇和一个同源结构域其通过与E⁃cadherin启动子区保守的E2盒结合，抑制E⁃cadherin的表达，从而促进EMT的发生［10］。Lemma等［4］研究发现EMT相关转录因子ZEBl、Twist和Slug在DLB⁃CL中存在异常表达，且与预后有关；同时有学者［5］证实在MCL中ZEB1激活增殖和抗凋亡基因，抑制促凋亡基因，与肿瘤细胞的侵袭性及化疗耐药有关。早期的研究也证明ZEB在淋巴细胞造血细胞的生成和功能成熟起着重要的作用［11］，由此可见在淋巴造血系统肿瘤中可能存在EMT（样）的调控机制，ZEB起着关键作用。我们对33例BL进行研究，发现中ZEB1在BL中的阳性表达率为42.4% （14例），所有病例均不表达E⁃钙粘蛋白和N⁃钙粘蛋白。因此，我们推测在BL中可能不存在经典的EMT现象，是否与内皮间质转化（endothelial⁃mes⁃enchymal transition，EndMT）有关有待进一步研究。

表2　ZEB1表达与临床病理参数之间的关系（例）Table 2　The relationship between ZEB1 expression and clinicopathologic parameters（case）

ZEB1的表达与多种肿瘤预后有关，然而其在不同的肿瘤中的作用与表达部位有关，如在DLB⁃CL中，ZEB1表达于肿瘤细胞核、内皮细胞和组织细胞中，无细胞质阳性病例，核强阳性者预后较弱阳性者差［4］。在食管鳞状细胞癌中，ZEB1在肿瘤细胞核、细胞质和肿瘤间质中均有表达，细胞质ZEB1弱阳性者预后更好［12］。本实验也发现，ZEB1除了表达于肿瘤细胞外，在血管内皮细胞和间质中的一些细胞也呈现阳性。遗憾的是，本组未发现ZEB1的表达部位和表达强度与肿瘤预后有关，可能与病例较少或化疗方案不统一有关，有待积累更多病例来阐述ZEB1在BL中的表达意义。

Bcl⁃6和MUMl是肿瘤细胞起源的标记物，在DLBCL中Bcl⁃6和MUMl表达与预后的关系较大。有学者将BL分为生发中心型、晚生发中心型、后生发中心型和套细胞样型。虽然Bcl⁃6和MUMl表达与BL的预后关系不明显［2］，但本实验发现3例Bcl⁃6阴性BL均表达ZEB1，其意义有待进一步研究。

BL中存在与EBV相关的miRNA⁃127表达［13］，同时存在Wnt信号通路的异常［14］。ZEB受EBV相关miRNAs的调控，在EBV阳性鼻咽癌中，通过抑制miRNA⁃200a和miRNA⁃200b的表达，上调EMT介导靶基因ZEB1和ZEB2，使肿瘤细胞的侵袭性和转移性增强［3］。本课题组前期工作中也证实了EBV感染相关的BL与miRNA⁃127、miRNA⁃155相关［15］，本实验发现ZEB1表达与EBV感染状态有一定的关系，BL中ZEB1的表达是否与miRNA⁃127、miRNA⁃200a或Wnt信号通路等有关有待进一步研究。

参考文献

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2.江西省儿童医院普外科，江西，南昌330006

3.江西省肿瘤医院病理科，江西，南昌330029

★通讯作者：杨文萍，E⁃mail：ywp07912000@163.com

基金项目：江西省卫生和计划生育委员会课题项目（20155603）；江西省自然科学基金（20132BAB205047）

作者单位：1.江西省儿童医院病理科，江西，南昌330006

Expression of ZEB1 in sporadic Burkitt lymphoma and its clinical significance

ZHANG Shouhua1，2，HUANG Hui1，XU Hongyan1，WU Yan1，ZENG Songtao1，HUANG Chuansheng3，YANG Wenping1★
（1.Department of Pathology，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；2.Department of General Surgery，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；3.Department of Pathology，Jiangxi Provincial Cancer Hospital，Nanchang，Jiangxi，China，330029）

［ABSTRACT］ObjectiveTo study the relationship between expression of ZEB1 and clinicopathologi⁃cal features of sporadic Burkitt lymphoma(BL).MethodsThe clinicopathological data of 33 patients with BL were retrospectively analyzed.The expressions of Bcl⁃6,MUMl,ZEB1,E⁃cadherin and N⁃cadherin were detected by immunohistochemistry and EBER by in situ hybridization.ResultsIn 33 cases,the positive rates of Bcl⁃6,MUMl,ZEB1 and EBER were 90.9%(30 cases),21.2%(7 cases),42.4%(14 cases)and 30.3%(10 cases) respectively,and negative for E⁃cadherin and N⁃cadherin.There were no significant differences between ZEB1 expression and clinical stage.Bcl⁃6,MUM1 and prognosis were poorly associated with EBV infection status(P= 0.057).ConclusionZEB1 expression is associated with EBV infection status.Its mechanism requires further study.

［KEY WORDS］Burkitt lymphoma;Immunohistochemistry;ZEB1 protein