表皮生长因子受体在不同民族三阴性乳腺癌患者中的表达差异分析

蒋威华，李涌涛，张 杰，张明帅，王晓文，张晨光，伊丽娜，欧江华



·论著·

表皮生长因子受体在不同民族三阴性乳腺癌患者中的表达差异分析

蒋威华，李涌涛，张 杰，张明帅，王晓文，张晨光，伊丽娜，欧江华

830011新疆乌鲁木齐市，新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科二病区

【摘要】目的探讨不同民族三阴性乳腺癌(TNBC)患者表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况，了解其与预后的关系。方法选取2008年5月—2010年5月新疆医科大学附属肿瘤医院住院的TNBC患者184例，其中汉族130例、维吾尔族54例。采用PV-9000免疫组化法测定EGFR的表达情况，采用Spearman秩相关分析探讨EGFR表达与淋巴结转移情况及TNM分期的相关性，同时采用Kaplan-Meier法绘制5年无瘤生存曲线，组间比较采用Log-rank检验。结果汉族TNBC患者EGFR阳性表达率为40.8%(53/130)，维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率为57.4%(31/54)，二者间差异有统计学意义(χ2=4.270，P=0.039)。汉族、维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率与淋巴结转移数均呈正相关(rs值分别为0.370、0.950，P<0.05)。汉族、维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率与TNM分期均呈正相关(rs值分别为0.380、0.371，P<0.05)。通过5年的随访观察，汉族TNBC患者复发转移发生率为24.6%(32/130)，而维吾尔族TNBC患者复发转移发生率为29.6%(16/54)；二者5年无瘤生存曲线间差异无统计学意义(χ2=0.564，P=0.453)。结论不利于肿瘤预后的EGFR在汉族TNBC患者中的阳性表达率低于维吾尔族TNBC患者，但二者5年无瘤生存期间无明显差异，提示维吾尔族TNBC患者可能存在与汉族TNBC患者不同的预后影响因素，建议进一步探讨影响汉族、维吾尔族TNBC患者预后的相关因素。

【关键词】乳腺肿瘤；受体,表皮生长因子；汉族；维吾尔族

蒋威华，李涌涛，张杰，等.表皮生长因子受体在不同民族三阴性乳腺癌患者中的表达差异分析[J].中国全科医学，2016，19(19)：2297-2301.[www.chinagp.net]

JIANG W H,LI Y T,ZHANG J,et al.Differences of the expression of epidermal growth factor receptor among patients with triple negative breast cancer of different ethnic groups[J].Chinese General Practice，2016，19(19)：2297-2301.

三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是目前乳腺癌研究关注的焦点，与非TNBC相比，侵袭性强、远处复发和死亡风险更高、生存期短，临床预后差，在年轻患者和老年患者中有着相似的生存率[1-2]。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是原癌基因C-erbB1的表达产物，参与激活一系列复杂的细胞信号转导途径，在上皮、间质及神经源性组织中都有表达，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用[3]，与TNBC细胞的生长活跃程度密切相关[4]，随着目前不同种族TNBC的差异问题日益受到重视，本研究通过检测中国新疆地区汉族、维吾尔族女性TNBC患者EGFR的阳性表达情况，分析其是否存在差异，并探讨其与预后间的关系，为不同民族TNBC患者的异种亚型分析提供数据[5]，同时也为进一步了解影响TNBC患者的预后因素提供一定的依据。

1对象与方法

1.1研究对象在2008年5月—2010年5月新疆医科大学附属肿瘤医院住院的乳腺癌患者1 003例中，选取雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)表达均阴性即TNBC患者184例，均为女性。纳入标准：(1)在本院首次治疗，且可以手术；(2)汉族、维吾尔族；(3)经本院免疫组化确认标记ER、PR及HER-2表达均阴性。排除标准：临床病理资料不完整者。本研究通过医院伦理委员会审批，患者均知情同意并签署同意书。

1.2方法

1.2.1EGFR检测方法采用PV-9000免疫组化法测定EGFR的表达：(1)组织经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，蒸馏水冲洗，4 μm 连续切片，并以磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡5 min；(2)清除内源性过氧化物酶活性〔以3%过氧化氢(H2O2)溶液室温孵育5～10 min〕，PBS冲洗2 min×3次；(3)滴加EGFR一抗，37 ℃孵育1.5 h，PBS冲洗2 min×3次；(4)滴加聚合物辅助(polymer helper)试剂1，室温孵育20 min，PBS冲洗2 min×3次；(5)滴加鼠抗过氧化物酶聚合物(polymer peroxidase-anti-mouse)IgG试剂2，室温孵育20 min，PBS冲洗2 min×3次；(6)室温下DAB试剂显色约5 min；(7)自来水冲洗后复染、脱水透明、封固、记录、拍照。

1.2.2EGFR结果判读(1)阴性表达为细胞质或细胞膜无明显染色，分值0分；低度阳性(+)表达为视野中>10%的区域呈现棕色或棕褐色但细胞膜染色不连续，分值1分；中度阳性(++)表达为>10%的区域呈棕色或棕褐色且细胞膜染色连续，但形态不完整，分值2分；强阳性 (+++)表达为>10%区域呈棕色或棕褐色，同时细胞膜染色连续且形态完整，分值3分。而细胞轻度棕色或棕褐色染色计1分；中度棕色或棕褐色染色计2分；重度棕色或棕褐色染色计3分。(2)将分值相加，最后EGFR总分值≤2分为阴性，>3分为阳性(见图1、2)。

注：PV-9000免疫组化法，DAB显色，×200；EGFR=表皮生长因子受体

图1EGFR阳性表达

Figure 1Positive expression of EGFR

注：PV-9000免疫组化法，DAB显色，×200

图2EGFR阴性表达

Figure 2Negative expression of EGFR

1.2.3资料收集记录所有患者的发病年龄、初潮年龄、初产年龄、绝经情况、乳腺癌家族史及腋窝淋巴结转移情况、肿瘤TNM分期等。

1.2.4随访方式采用入院复查和电话等随访方式,将患者术后第1次化疗开始定为随访起始时间，观察所有患者治疗后复发转移情况；发生复发转移为终止事件，随访时间为5年，随访截止日期为2015-05-30。

1.3观察指标包括EGFR阳性表达率、复发转移发生率、5年无瘤生存期。

1.4统计学方法采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验；EGFR表达与淋巴结转移情况及TNM分期的相关性采用Spearman秩相关分析；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间比较采用Log-rank检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1汉族与维吾尔族TNBC患者基本情况比较汉族与维吾尔族TNBC患者发病年龄、初潮年龄、初产年龄、绝经情况、乳腺癌家族史间差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)，具有可比性。

2.2汉族与维吾尔族TNBC患者EGFR表达情况比较汉族TNBC患者EGFR阳性表达率为40.8%(53/130)，维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率为57.4%(31/54)，二者间差异有统计学意义(χ2=4.270，P=0.039)。

2.3汉族、维吾尔族不同淋巴结转移数TNBC患者EGFR表达情况比较汉族、维吾尔族不同淋巴结转移数TNBC患者EGFR阳性表达率间差异均有统计学意义(P<0.05，见表2)。汉族、维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率与淋巴结转移数均呈正相关(rs值分别为0.370、0.950，P<0.05)。

2.4汉族、维吾尔族不同TNM分期TNBC患者EGFR表达情况比较汉族、维吾尔族不同TNM分期TNBC患者EGFR阳性表达率间差异均有统计学意义(P<0.05，见表3)。汉族、维吾尔族TNBC患者EGFR阳性表达率与TNM分期均呈正相关(rs值分别为0.380、0.371，P<0.05)。

2.5汉族与维吾尔族TNBC患者复发转移情况比较通过5年的随访观察，汉族TNBC患者复发转移发生率为24.6%(32/130)，而维吾尔族TNBC患者复发转移发生率为29.6%(16/54)；二者5年无瘤生存曲线间差异无统计学意义(χ2=0.564，P=0.453，见图3)。

3讨论

乳腺癌的发生、发展与遗传、生理及环境因素都有关。自2000年PEROU等[6]提出TNBC的概念以来，由于其预后差、进展快等特点，很快成为乳腺癌研究关注的焦点。TNBC分子生物学特征复杂，与非TNBC相比，有着不同的临床病理特征及预后，鉴于目前关于TNBC的临床报道多限于汉族普通人群，缺乏在不同民族当中的对照研究，且不同种族TNBC分子生物学特性并不相同，本研究对新疆不同民族TNBC患者中的EGFR表达差异做一统计分析，以期更进一步了解影响TNBC的发生发展因素。

表1　汉族与维吾尔族TNBC患者一般情况比较〔n(%)〕

注：TNBC=三阴性乳腺癌

表2汉族、维吾尔族不同淋巴结转移数TNBC患者EGFR表达情况比较〔n(%)〕

Table 2Comparison of EGFR expression in Han and Uygur TNBC patients with different number of lymph node metastasis

淋巴结转移数(个)例数EGFR阳性表达χ2值P值汉族20.490<0.001 05012(24.0) 1～34918(36.7) ≥43123(74.2)ab维吾尔族8.4470.015 0207(35.0) 1～31710(58.8) ≥41714(82.4)a

注：与0个淋巴结转移数比较，aP<0.017；与1～3个淋巴结转移数比较，bP<0.017；EGFR=表皮生长因子受体

表3汉、维吾尔族不同TNM分期TNBC患者EGFR表达情况比较〔n(%)〕

Table 3Comparison of EGFR expression of Han and Uygur TNBC patients at different TNM stages

TNM分期例数EGFR阳性表达χ2值P值汉族27.710<0.001 Ⅰ期478(17.0) Ⅱ期5020(40.0)a Ⅲ期3325(75.8)ab维吾尔族7.4520.024 Ⅰ期134(30.8) Ⅱ期2212(54.5) Ⅲ期1915(78.9)a

注：与I期比较，aP<0.017；与Ⅱ期比较，bP<0.017

注：TNBC=三阴性乳腺癌

图3汉族与维吾尔族TNBC患者5年无瘤生存曲线比较

Figure 3Comparison of 5-year disease-free survival curves between Han and Uygur TNBC patients

3.1EGFR在汉族、维吾尔族TNBC患者中的表达情况EGFR是生长因子受体家族成员之一，EGFR信号通路对细胞的增殖、分化、生长有重要调节作用，作为原癌基因C-crb编码的跨膜蛋白，其表达于正常上皮细胞。有研究发现，在肿瘤的进展过程中，EGFR的异常表达和活化，与肿瘤血管生成、侵袭、转移等一系列生物学行为密切相关[7]。也是与乳腺癌关系最为密切的一类生长因子受体，其受体与相应配体结合导致其酪氨酸磷酸化，进而激活一系列信号转导通路，如表皮生长因子(EGF)通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路，活化原癌基因c-fos 刺激细胞恶性增殖，引起TNBC细胞的激素非依赖性生长[3],针对其分子靶向治疗的代表性药物是吉非替尼(Gefitinib)，主要作用于EGFR胞内酪氨酸激酶，与ATP竞争并抑制其功能。有研究认为，TNBC患者中EGFR和p53高表达、磷酸酶与张力蛋白同源基因(PTEN)低表达，三者协同导致TNBC疾病的发生发展[8]。本研究中EGFR阳性表达率为45.7% (84/184)；与国外报道的EGFR在TNBC患者中的阳性表达率为45%～70%的结论基本一致[9]。但本研究发现，汉族TNBC患者EGFR阳性表达率明显低于维吾尔族TNBC患者。分析原因，考虑新疆地区乳腺癌防治工作较为欠缺，部分偏远山区农牧患者自我保健及筛查意识落后，其就诊时病期已偏晚，此类患者的病期情况(肿瘤组织学分级、腋窝淋巴结转移及TNM分期)均有可能影响到EGFR在不同民族间的表达情况。

3.2EGFR阳性表达率与汉族、维吾尔族TNBC患者淋巴结转移数、TNM分期的相关性分析本研究发现，汉族TNBC患者5年内复发转移发生率为24.8%，而维族TNBC患者复发转移发生率为29.6%，二者5年无瘤生存曲线间无明显差异。

EGFR在TNBC患者中过度表达，与淋巴结转移数、TNM分期有一定相关性，EGFR过度表达的患者，容易早期复发、转移，通常预后较差[10]。本研究显示，EGFR阳性表达率与汉族、维吾尔族TNBC患者淋巴结转移数、TNM分期均呈正相关，EGFR阳性表达随着淋巴结转移数及TNM分期的增高而逐渐升高，说明EGFR在TNBC的进展过程中起到了一定作用。淋巴结转移和TNM分期是临床判断预后的重要依据，而两者也是制定个体化综合治疗方案的重要参考依据，EGFR与淋巴结转移情况和TNM分期的相关性也进一步提示，应高度重视不同民族TNBC患者中EGFR高度表达差异，作为TNBC分子靶向治疗的突破口及新靶点，其临床意义重大，应针对不同民族患者中的TNBC生物学特征，采取不同的个体化治疗策略，以期进一步改善患者的预后情况。

综上所述，本研究结果显示，汉族与维吾尔族TNBC患者5年无瘤生存曲线间无差异，但EGFR阳性表达率间有差异；同时EGFR阳性表达率与淋巴结转移数、TNM分期均呈正相关。有研究表明，EGFR作为判断TNBC预后的独立因素，当其在乳腺癌患者中高表达时，往往提示预后较差[11]。本研究发现EGFR在汉族TNBC患者中的阳性表达率低于维吾尔族TNBC患者，但二者的5年无瘤生存曲线间无差异，因此，本研究认为维吾尔族TNBC患者可能存在与汉族TNBC患者不同的预后影响因素，建议进一步研究影响汉族、维吾尔族TNBC预后的相关因素。由于本研究的样本量较小，在后续的研究中将扩大样本并加以完善，以期进一步探讨新疆地区不同民族TNBC患者的EGFR表达情况。

作者贡献：蒋威华负责课题设计与实施、资料收集与整理，撰写论文、成文并对文章负责；李涌涛、张杰、张明帅、王晓文、张晨光、伊丽娜进行课题实施、评估、资料收集；欧江华进行质量控制及审校。

本文无利益冲突。

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(本文编辑：崔沙沙)

Differences of the Expression of Epidermal Growth Factor Receptor Among Patients With Triple Negative Breast Cancer of Different Ethnic Groups

JIANGWei-hua,LIYong-tao,ZHANGJie,etal.

TheSecondWardofBreastSurgeryDepartment,theAffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) in patients with triple negative breast cancer (TNBC) of different ethnic groups and its relation with prognosis.MethodsFrom May 2008 to May 2010,184 TNBC patients who were admitted into the Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University were enrolled,including 130 Han patients and 54 Uygur patients.PV-9000 immunohistochemistry method was used to determine the expression of EGFR,and Spearman correlation analysis was performed to explore the correlation between EGFR expression and lymphatic metastasis as well as TNM staging.Kaplan-Meier method was employed to draw 5-year tumor-free survival curves,and intergroup comparison was performed by Log-rank test.ResultsThe positive expression rate of EGFR was 40.8%(53/130) for Han TNBC patients and 57.4%(31/54)for Uygur TNBC patients,and there was significant difference between them (χ2=4.270，P=0.039).There was positive correlation between the positive rate of EGFR and the number of lymph node metastasis (rs values were 0.370 and 0.950 respectively，P<0.05).There was positive correlation between the positive rate of EGFR and TNM staging (rs values were 0.380 and 0.371 respectively，P<0.05).By 5-year follow-up observation,the incidence of recurrence and metastasis of Han TNBC patients was 24.6%(32/130),and that of TNBC Uygur patients was 29.6%(16/54);the two groups were not significantly different in 5-year disease-free survival curve (χ2=0.564，P=0.453).ConclusionThe positive expression rate of EGFR which is unfavorable to the prognosis of tumor is lower among Han TNBC patients than Uygur TNBC patients,but they have no marked difference in the 5-year disease-free survival curve,which suggest that the influencing factors for the prognosis of Uygur TNBC patients may be different from those of Han TNBC patients.We suggest that the relevant influencing factors for the prognosis of Han and Uygur patients should be further investigated.

【Key words】Breast neoplasms;Receptor,epidermal growth factor;Han nationality;Uygur nationality

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81260390)——中度风险易感基因CHEK2、PALB2、CDH1 筛查在多民族地区BRCA1/2 突变阴性遗传性乳腺癌中的作用

通信作者：欧江华，830011新疆乌鲁木齐市，新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科二病区；E-mail:oujianghua@hotmail.com

【中图分类号】R 737.9

【文献标识码】A

DOI：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.19.015

(收稿日期：2016-03-18；修回日期：2016-05-09)