填精补髓、活血化痰开窍法对血管性痴呆大鼠海马组织单胺类神经递质的影响

徐云龙李 肖赵建军



填精补髓、活血化痰开窍法对血管性痴呆大鼠海马组织单胺类神经递质的影响

徐云龙1李 肖2赵建军1

【摘要】目的 观察填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织单胺类神经递质含量的影响。方法 建立双血管阻塞（2VO）改良法复制VD大鼠模型；采用酶联免疫法（ELISA）检测海马组织内去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量。结果 与假手术组比较，模型组大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量减少（P＜0．05）；与模型组比较，阳性对照组，中药高剂量组、中药中剂量组海马组织DA、5-HT含量均增加（P＜0．05），阳性对照组，中药高剂量组海马组织NE含量增加（P＜0．05）。结论 填精补髓、活血化痰开窍法改善大鼠学习记忆功能障碍，其作用机制可能与提高海马组织内NE、DA、5-HT含量相关。

【关键词】填精补髓；活血化痰开窍法；血管性痴呆；单胺类神经递质

Objective To observe the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiaofa （TJBSHXHTKQF） on the contents of monoamine neurotransmitter in hippocampus of vascular dementia（VD）rats． Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model． The contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus were determined with Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISE）． Results Compared with sham group，the contents of NE，DA and 5-HT were decreased（P＜0．05） in model group． Compared with model group，the contents of DA and 5-HT were clearly increased（P＜0．05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of NE were increased（P＜0．05） in the high dose of TCM groups and the donepezil group． Conclusion The TJBSHXHTKQF could improve the learning and memory capability of VD rats，the mechanism may be closely related with increasing the contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus．

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiaofa，Vascular dementia，Monoamine neurotransmitter

血管性痴呆（vascular dementia，VaD）是指由各种脑血管病引起的获得性智能损害及认知障碍综合征，在痴呆常见病因中仅次于阿尔茨海默病，位居第二［1］。研究显示，我国65岁及以上老年人中痴呆患病率约为7.8%，而VD患病率为1.1%，目前针对血管性痴呆的预防及治疗已成为医学基础研究和临床研究的迫切的任务。本文通过观察填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织单胺类神经递质含量的影响，进一步验证填精补髓、活血化痰开窍法对VD可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 血管性痴呆大鼠模型制备

选用健康Wistar大鼠75只，体重为（250±30）g，雌雄各半，由长春中医药大学实验动物中心提供及喂养。随机分为假手术组（正常对照组）、模型组、阳性对照药组、中药高、中、低剂量组，经饲养及筛选后各组选取10只大鼠。参照文献制备模型［2］，术前12 h禁食水，应用10%水合氯醛（0.3 g/kg）麻醉大鼠，仰卧固定，常规消毒后颈部正中切开，充分暴露双侧颈总动脉，并对其进行结扎。假手术组大鼠仅分离动脉，但不结扎。各给药组剂量为中药高剂量组2 g/（kg•d）、中剂量组1 g/（kg•d）、低剂量组0.5 g/（kg•d）。阳性对照组盐酸多奈哌齐片0.77 mg/（kg•d），连续灌胃28 d。假手术对照组、模型组给予同体积生理盐水。

1.2 实验药物与试剂

盐酸多奈哌齐片（安理申）：每片5 mg，卫材（中国）药业有限公司生产，批准文号：国药准字H20050978。填精补髓、活血化痰开窍方（石菖蒲、郁金、山药、山萸肉、龟板胶、川芎、红花、肉苁蓉、益智仁）由长春中医药大学附属医院制剂室制成。去甲肾上腺素（NE）测定试剂盒、多巴胺（DA）测定试剂盒、5-羟色胺（5-HT）测定试剂盒，以上试剂均为美国R＆D公司产品，批号：20151001A。

1.3 检测指标及方法

各组大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量水平，处死大鼠后冰盘上快速取脑，加入冰生理盐水，电动匀浆机匀浆，并于镜检下未见完整细胞。制备好浓度为10%的匀浆液，3 500 r/min离心10 min，提取上清。后采用ELISA法检测海马组织NE、DA、5-HT含量，检测严格按照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学处理

应用SPSS 13.0统计软件对本次的研究数据进行处理分析，结果用（均数±标准差）（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量减少（P＜0.05），与模型组比较，阳性对照组，中药高剂量组、中药中剂量组海马组织DA、5-HT含量均增加（P＜0.05），而阳性对照组，中药高剂量组海马组织NE含量增加（P＜0.05）。结果见表1。

3 讨论

现代中医学者在长期临床实践中不断发现，VD的发病与“毒邪”致病有着密切联系。王永炎院士［3］提到痰、虚、瘀互结为VD发病的病理基础，病久痰瘀互阻，毒自内生，毒害脑髓、脑络而发展为痴呆。而任继学教授则认为“髓虚毒损”是本病的关键病机，认为痴呆就病性而言，多以虚为本，实为标，虚实夹杂是该病特点。虚则责其年老体衰，脏气亏虚，真水不足，无以聚精生髓，故髓减脑消；而实则责其卒中后血损而成瘀，而“血液者，痰之本也”，有瘀必有痰，痰瘀互结，则生毒邪，更伤脑髓。故以此病机为指导，确立“填精补髓、活血化痰开窍法”治疗本病。

表1 填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量的影响（±s，n=10）

表1 填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织NE、DA、5-HT含量的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较：*P＜0．05

?

单胺类神经递质是记忆形成及存储中不可或缺的环节之一，主要包括NE、DA、5-HT等［4］。脑内缺血缺氧时，脑组织内单胺类神经递质代谢发生紊乱，导致神经功能障碍，促使VD的发生发展。有研究证实，认知能力下降与单胺类神经递质的下降程度是一致的［5］。由此可见，单胺类神经递质对认知功能有着直接关系。本研究提示脑缺血时脑组织内NE、DA、5-HT含量下降，对学习记忆功能产生了影响。因此提高脑组织内的单胺类神经递质，可改善学习记忆能力。

本实验表明填精补髓、活血化痰开窍法高剂量组、中剂量组、阳性对照药盐酸多奈哌齐组能提高VD大鼠海马组织DA、5-HT含量，且高于模型组，证实填精补髓、活血化痰开窍法高剂量组、中剂量组能增加VD大鼠海马组织内DA、5-HT的含量，使其记忆力及学习能力得到改善。而填精补髓、化痰开窍法高剂量组和阳性对照药盐酸多奈哌齐组可提高VD大鼠海马组织NE的含量，且高于模型组，促进了VD大鼠学习记忆功能恢复。因此，填精补髓、活血化痰开窍法改善VD大鼠认知功能的机制可能是通过提高脑内海马组织中NE、DA、5-HT含量水平而得到改善，为填精补髓、活血化痰开窍法在临床防治VD中提供了科学依据。

参考文献

［1］ Lobo A，Launer LJ，Fratiglioni L，et al． Prevalence of dementia an major subtypes in Europe：A collaborative study of population-base cohorts． Neurologic Diseases in the Elderly Research Group［J］Neurology，2000，54：S4-S9．

［2］ 徐叔云，卞如濂，陈修，等． 药理实验方法学［M］． 北京：人民卫生出版社，2002：1060．

［3］ 王永炎，张伯礼． 血管性痴呆现代中医临床与研究［M］． 北京：人民卫生出版社，2003：49．

［4］ Blom K，Emmelot-Vonk M H，Koek H L． The influence o vascular risk factors on cognitive decline in patients with dementia：systematic review［J］． Maturitas，2013，76（2）：113-117．

［5］ 方之勇，彭汉光，张茂林． 清脑灵对拟血管性痴呆大鼠脑海马内5-HT、DA、NA的影响［J］． 中医药学刊，2002，20（3）：304-305．

【中图分类号】R285．5

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）06-0189-03

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．06．140

作者单位：1 长春中医药大学附属医院脑病科，吉林 长春130021 ；2 长春中医药大学，吉林 长春 130117

通讯作者：赵建军，E-mail：zhaojianjun8777@163．com

Effect of Tianjingbusui Huoxuehuatankaiqiaofa on the Contents of Monoamine Neurotransmitter in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LI Xiao2ZHAO Jianjun11 Department of Encephalopathy，Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130117，China

【Abstract】