新疆和田维、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的分布

于　倩，克热木·阿巴司，徐　隽，姜　涵

(新疆医科大学第一附属医院1牙体牙髓科·新疆维吾尔自治区口腔医学研究所，2颌面肿瘤外科，3牙周黏膜科, 乌鲁木齐　830054)

新疆和田维、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的分布

于倩1，克热木·阿巴司2，徐隽3，姜涵3

(新疆医科大学第一附属医院1牙体牙髓科·新疆维吾尔自治区口腔医学研究所，2颌面肿瘤外科，3牙周黏膜科, 乌鲁木齐830054)

摘要：目的分析新疆和田维吾尔族和汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中不同牙周致病菌的分布情况。方法选择慢性牙周炎患者124例，维吾尔族80例，汉族 44例，采集龈下菌斑，用16sRNA PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌和中间普氏菌的分布。结果新疆和田维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌和中间普氏菌的检出率分别为25.0%、60.0%、50.0%和43.2%、93.2%、52.3%，维吾尔族、汉族患者牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌的检出率差异具有统计学意义(P<0.05)。新疆和田不同性别慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出率差异无统计学意义(P均>0.05)。 结论新疆和田维吾尔族和汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙周致病菌的分布不同，但福赛坦氏菌在维、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中均为优势菌。

关键词：慢性牙周炎； 牙龈卟啉单胞菌； 福赛坦氏菌； 中间普氏菌

慢性牙周炎是最为常见的一类牙周炎，约占牙周炎患者的95%[1]。菌斑生物膜是其主要致病因素，牙龈卟啉单胞菌(Pg)、福赛坦氏菌(Tf)、中间普氏菌(Pi)是与牙周炎发生、发展密切相关的菌群[2]。新疆地域辽阔，各民族人群杂居，而南疆与北疆聚居民族各有差异，新疆不同民族之间慢性牙周炎中可疑致病菌的检出是否具有差异尚未有相关研究。本研究利用16s RNA PCR技术检测新疆和田维吾尔、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌、中间普氏菌，旨在了解新疆和田维吾尔族和汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中不同牙周致病菌的分布情况。

1材料和方法

1.1病例选择选择诊断为慢性牙周炎患者124例，其中维吾尔族80例，汉族44例，年龄28～53岁，每位患者至少有20颗天然牙，至少有2颗牙的牙周袋深度>4 mm。纳入标准：3个月内未接受过牙周治疗或至少1个月内未服用过抗生素及激素；无任何影响牙周炎进程或治疗的全身性疾病；妇女无妊娠。

1.2微生物学检测

1.2.1龈下菌斑的收集对患者的全口牙周状况进行全面检查后，选取每位受试者4个临床附着丧失(CAL)≥3 mm的位点收集龈下菌斑样本，先用无菌手工刮治器去除龈上菌斑及牙结石，棉卷隔湿、干燥后使用无菌龈下刮治器于龈沟底采集龈下菌斑，放入无菌Eppendorf管中，-20℃保存，备用。

1.2.2模板DNA的提取菌斑样本中加入150 μL 25%Chelex-100后漩涡混匀10 min，56℃孵育3 h，煮沸10 min，然后将样本在 4℃条件下离心(15 000 r/min)5 min，去除未破裂的细胞及大块杂质，取上清于-20℃下保存，用作PCR扩增中的 DNA模板。

1.2.3PCR循环参数PCR反应的温度条件：预变性95℃2 min，变性 95℃ 30 s，退火温度见表1，延伸至72℃ 1 min，36个循环，循环结束后于72℃延伸 2 min，4℃保存。

表1　3种牙周致病菌的特异性引物信息

1.2.4PCR对照设置超离子水代替模板为空白对照，Tf ATCC 43037、Pg ATCC 33277、Pi ATCC 25611标准株为阴性对照(由新疆医科大学微生物实验室提供)，复苏Tf ATCC 43037、Pg ATCC 33277、Pi ATCC 25611标准株，常规CDC培养基厌氧培养5 d,将混悬有单个菌落的离心管煮沸5 min,离心5 min,取上清液做PCR。

2结果

2.1PCR产物电泳结果Tf、Pg PCR产物电泳图中泳道2、3分别为汉族和维吾尔族T.f检出阳性，泳道5、6分别为汉族和维吾尔族Pg检出阳性(图1)；Pi PCR产物电泳图中泳道2、3分别为维吾尔族和汉族，泳道2为Pi检出阳性(图2)。

M：Marker; 1: Tf阳性对照; 2:汉族组Tf阳性; 3:维吾尔族组Tf阳性; 4: Pg阳性对照; 5:汉族组Pg阳性;6:维吾尔族组Pg阳性; 7:空白对照

图1Tf、Pg PCR产物电泳结果

M :Marker；1: Pi阳性对照；2:维吾尔族组Pi阳性；3:汉族组Pi阳性；4:空白对照

图2Pi PCR产物电泳结果

2.2新疆和田维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出情况维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌和中间普氏菌的检出率为25.0%、60.0%和50.0%，维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中可疑致病菌检出率为78.8%；汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌和中间普氏菌的检出率为43.2%、93.2%和52.3%，汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中可疑致病菌检出率为97.7%，维吾尔族、汉族患者牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌的检出率差异具有统计学意义(P均<0.05)，见表1。

表1维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出情况/例(%)

族别牙龈卟啉单胞菌福赛坦氏菌中间普氏菌维吾尔族20(25.0)48(60.0)40(50.0)汉族19(43.2)*41(93.2)*23(52.3)

注：与维吾尔族比较，*P<0.05。

2.3新疆和田不同性别慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出情况新疆和田不同性别慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出率差异无统计学意义(P均>0.05)，见表2。

表2不同性别慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出情况/例(%)

性别牙龈卟啉单胞菌福赛坦氏菌中间普氏菌男性23(35.9)50(78.1)31(48.4)女性16(26.7)39(65.0)32(53.3)

3讨论

牙周炎是造成我国人群牙齿丧失的首要原因[3]，在不同地区、不同种族中牙周疾病的患病率、疾病程度和疾病进展的规律也不同, 在美国人口中黑种人牙周疾病状况重于白种人[4]。菌斑生物膜是其发生、发展的重要因素，其中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌为第一复合体，是与牙周炎紧密相关的菌群，中间普氏菌为第二复合体，是与牙周炎紧密相关的核心群[1]。新疆是一个多民族聚居的典型地区,有研究表明新疆牧区维吾尔、哈萨克、汉族牙周病检出率是不同的[5]。因此为了解新疆不同民族慢性牙周炎患者中可疑致病菌的检出是否亦具有差异，本课题组进行了系列研究。

本研究结果显示，维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌和中间普氏菌的检出率是不同的，分别为25.0%、60.0%、50.0%和43.2%、93.2%、52.3%，其中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌的检出率差异具有统计学意义。可推测维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中可疑致病菌分布有所不同，可能为其慢性牙周炎患病率不同的原因之一。冯向辉等[6]研究发现慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌的检出率为93.8%和97.9%；van Winkelhoff等[7]发现牙周炎病人福赛坦氏菌检出率为87.6%; 肖刚等[8]发现慢性牙周炎龈下菌斑中中间普氏菌的检出率为14.3%;本研究发现新疆和田维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌检出率较国内报道的低，其中福赛坦氏菌检出率与国外相比亦较低，中间普氏菌检出相对较高；而汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌检出率较低，但福赛坦氏菌检出率差异不大，中间普氏菌相对较高。国内有关研究显示牙龈卟啉单胞菌的检出较高[9-11]，而本研究中维吾尔族、汉族慢性牙周炎患者中牙龈卟啉单胞菌的检出均较低，福赛坦氏菌和中间普氏菌的检出率相对较高，可知新疆和国地区慢性牙周炎患者龈下菌斑中可疑致病菌的分布与其他地区有所差异。

本研究显示不同性别慢性牙周炎患者龈下菌斑中3种可疑致病菌的检出率差异无统计学意义。有研究显示男、女间牙周炎患病率差异无统计学意义，男、女间牙龈卟啉单胞菌检出率差异无统计学意义[11-12]。本研究结果与其一致。

综上，新疆和田维吾尔族和汉族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙周致病菌的分布不同，但福赛坦氏菌在龈下菌斑中均为优势菌。本课题组将继续对新疆其他民族及地区慢性牙周炎患者进行系列研究，为建立新疆不同区域、不同民族慢性牙周炎可疑致病菌检测数据库奠定基础。

参考文献：

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[7]van Winkelhoff AJ, Loos BG, van der Reijden WA, et al. Porphyromonas gingivalis, bacteroides forsythus and other putative periodontal pathogens in subjects with and without periodontal destruction[J]. J Clin Periodontol,2002,29(11):1023-1028.

[8]肖刚,吴坚,陈月燕.慢性牙周炎相关菌群分析[J].实用医技杂志,2006,13(18):3239-3240.

[9]袁杰,王少果,周建业,等. 慢性牙周炎唾液牙龈卟啉单胞菌的定量PCR检测[J].口腔医学研究, 2015,31(2):133-136.

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(本文编辑王艳)

Distribution of 3 periodontal pathogens in dental plaque with chronic periodontitis between the Uighur and Han in Hetian of Xinjiang

YU Qian1, Keremu Abasi2，XU Jun3，JIANG Han3

(1Department of Endodontology, the Xinjiang Uygur Autonomous Region Institute of Oral Medicine,2Department of Oral & Maxillofacial Surgery,3Department of Periodontal & Mucosal,the First Affiliated Hospital,Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China)

Abstract:ObjectiveTo analysis the distribution of 3 periodontal pathogens from the subgingival plaque with chronic periodontitis (CP) between Uighur and Han in Hetian of Xinjiang. MethodsSubgingival plaque samples were collected from 80 Uighur CP patients and 44 Han CP patients in Hetian. Three periodontal pathogens: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis), Tannerella forsythia (T. forsythia) and Prevotella intermedia (P. intermedia) were detected by 16SrRNA polymerase chain reaction. ResultsThe detectable rate of the Uighur and Han about P. gingivalis, T. Forsythensis and P. Intermedia were 25%, 60%, 50% and 43.2%, 93.2%, 52.3% respectively, in which the detectable rates of P. Gingivalis and T. Forsythensis have statistical differences between Uighur and Han (P<0.05). ConclusionThe three periodontal pathogens in Uighur and Han who lived in Hetian were different distribution, and T. Forsythensis was the predominant bacteria in subgingival plaque both in Uighur and Han of Hetian.

Keywords:chronic periodontitis; porphyromonas gingivalis; tannerella forsythia; prevotella intermedia

基金项目：新疆医科大学第一附属医院院内自然科学基金-青年基金(2014ZRQN08)

作者简介：于倩(1988-)，女，硕士，住院医师，研究方向：龋病学。 通信作者：姜涵，女，硕士，主治医师，研究方向：牙周疾病，E-mail：jianghan1205@163.com。

中图分类号：R781.4

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)07-0885-03

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.07.018

[收稿日期：2015-11-23]