T.f和P.g在慢性牙周炎和冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的分布

李丹+钟良军+张睿

[摘要] 目的 采用聚合酶链反应（PCR）技术，比较福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）在慢性牙周炎（CP）和冠心病伴慢性牙周炎（CHD+CP）患者龈下菌斑中的分布，探讨其检出率与CP和CHD的关系。方法 整群选择2014年1—12月该院收治的132例患者为研究对象，CP 62例，CHD+CP 70例，收集位点龈下菌斑，提取DNA，用PCR法检测T.f、P.g分布。 结果 两组中，T.f检出率分别是66.67%、71.43%、92.5%和85.71%、70.37%、80.95%；T.f在CP中分布差异有统计学意义（Z= -2.982， P=0.003﹤0.05）。P.g在两组中，在轻、中、重度CP检出率分别是22.23%、52.38%、35.00%和21.43%、55.56%、42.86%。在（CP+CHD组）中，T.f与P.g有相关性（r= -0.306， P=0.012﹤0.05）。结论 Tf可能与冠心病发病有相关性。

[关键词] 慢性牙周炎；冠心病；龈下菌斑 牙周致病菌

[中图分类号] R781 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）01（b）-0047-03

[Abstract] Objective To compare the distribution of T.f and P.g in the subgingival plaque of patients with chronic periodontitis and coronary heart disease with chronic periodontitis by PCR technology， and discuss the correlation between the test rate and CP and CHD. Methods 132 cases of patients admitted from January 2014 to December 2014 were group selected as the research objects， including 62 cases with CP and 70 cases with CHD+CP， and the DNA was extracted， and the distribution of T.f and P.g was tested by the PCR method. Results The test rate of T.f was respectively 66.67%，71.43%，92.5% and 85.71%，70.37%，80.95%， and the difference in the distribution of T.f had statistical significance（Z= -2.982， P=0.003<0.05）， and the test rate of mild， moderate and severe degrees of CP was respectively 22.23%，52.38%，35.00%和21.43%，55.56%，42.86%， and in the CP+CHD group， the T.f is correlated with P.g（r= -0.306，P=0.012<0.05）. Conclusion Tf may be correlated with the incidence of coronary heart diseases.

[Key words] Chronic periodontitis； Coronary heart disease； Subgingival plaque； Periodontal pathogen

牙周病是我国成人失牙的主要原因，现有研究表明，牙周病能够增大冠心病的发病风险，而牙周病是几种细菌聚集而产生的慢性炎症。其中，牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）、福赛斯坦纳菌（Tannerella forsythensis， T. f） 是目前公认的牙周可疑致病菌，也是近些年牙周炎与冠心病相关性研究的主要细菌[1]。該实验整群选择2014年1—12月该院收治的132例冠心病伴慢性牙周炎患者作为研究对象并对其龈下菌斑中2种牙周致病菌进行检测，研究其在冠心病伴慢性牙周炎患者中分布情况及冠心病患者龈下菌斑中牙周致病菌的分布与慢性牙周炎病变程度之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验组整群选取在新疆医科大学第一附属医院心血管医院就诊患者，经病史、X线和选择性冠状动脉造影结果分为：冠心病伴慢性牙周炎患者共70例为研究对象，年龄48～74岁，平均（60.44±9.04）岁。对照组选取该院口腔科同一阶段接诊的并经X线片诊断为慢性牙周炎的初诊患者，共62例。纳入标准：身体健康，无遗传性病史及其他系统性疾病，近3个月内未接受牙周治疗，近 1个月内未服用任何抗菌药物，所需标本和临床指标均在患者知情同意下进行采集和检查。冠心病纳入标准[2]，冠脉造影判断阳性标准：前降支、回旋支、右冠脉或左主干存在≥50%直径的固定性狭窄或阻塞性病变。对照组选口腔科就诊CP患者62例。慢性牙周炎纳入标准[3]。

1.2 菌斑采集

选择4个区中切牙和第一恒磨牙共8个位点取样。用无菌刮治器取龈下菌斑，置EP管中，-20℃保存。

1.3 DNA模板的制备

室温解冻牙菌斑标本15 min→加入 50 g/L chelex-100液150 μL（无菌去离子水加20 mg/mL的蛋白酶K 4 μL）→漩涡混匀10 min→6℃水浴3 h→100 ℃水浴 10 min→立刻冰浴1 min→4℃14 000 r/min离心5 min→取上清液，-20℃保存备用。

1.4 PCR反应体系

使用PCR仪扩增，反应体系如表1。

2 结果

2.1 临床标本

T.f和P.g阳性对照和空白对照PCR结果见图1。

2.2 T.f和P.g在两组不同程度牙周炎龈下菌斑中细菌的检出情况

T.f和P.g在两组不同程度牙周炎龈下菌斑中细菌的检出情况，见表2。

3 讨论

目前我国正处于老龄化社会，随着老年人数的与日俱增，老年口腔疾病和心脑血管疾病的患病率呈上升趋势。牙周病作为全球普遍蔓延的一种慢性病，多发于中老年人群，是引起成人牙齿的丧失的重要原因[4]。国外的流行病学方面研究已证明，牙周病与心血管疾病之间具有很大程度的关联性。更有研究表明，CP可能是引起CHD的风险因素之一[5-7]。已有证据表明[8]，牙周致病菌与CHD患者的心血管壁存在关联。Chen等[9]研究发现，血小板活化因子在炎性牙周组织中高表达，同时也很大程度上影响着冠心病的发生和发展，由此可见，牙周炎和冠心病相互关联。

马丽等[10]对在160例糖尿病患者龈下菌斑检测中发现，T.f在轻、中、重度度牙周炎组检出率为47.82%，48.71%和67.39%。重度牙周炎组的检出率明显高于轻、中度组。从而得出结论T..f与牙周病程度及糖尿病病程有关。与该实验的研究结果一致。在该实验两组中，T.f检出率在轻、中、重慢性牙周炎伴冠心病患者中检出率分别是66.67%、71.43%和92.50%。检出率随牙周病严重程度而增加。并且这种趋势与单纯牙周炎组分布相似，表明该细菌也是糖尿病肾病伴牙周病的主要致病菌。另外，T.f检出率在不同程度CP中分布不同，有统计学差异，表明T.f对细菌在不同程度CHD的分布有影响，且呈正相关。该研究證实CP可增加CHD发生危险，并且T.f可能对CHD的发展发挥很大的作用。但该菌详尽的生物学及免疫学特性尚待研究，其对冠心病的影响机制也需要深入研究。

[参考文献]

[1] Nonnenmacher C， Stelzel M， Susin C. Periodontal microbiota in patients with coronary artery disease measured by real-time polymerase chain reaction： A case-control study[J].Periodontol，2007，78（9）：1724-1730.

[2] 陆再英，钟南山.内科学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2008：300-302.

[3] Armitage GC， Wu Y， Wang HY， et al. Low prevalence of a periodontitis associated interleukin-1 composite genotype in individuals of Chinese heritage[J].Periodontol，2000， 71（2）：164-171.

[4] 孙晓菊.老年牙周病与心脑血管疾病[J].中国实用口腔医学，2014，7（2）：65-68.

[5] Williamg，Haynes，Clark Stanford.Periodontal disease and atherosclerosis： from dental to arterial plaque.arteriosclerosis thronbosis[J].Vascular Biology，2003，23（8）：1309-1311.

[6] 李伟，胡红梅，秦翠，等.冠心病与慢性牙周炎相关性的系统评价[J].中国老年学杂志，2013，33（20）：4955-4957.

[7] 戴晓玮，钟良军，朱涛.伴慢性牙周炎冠心病患者动脉粥样.硬化斑块中牙龈卟啉单胞菌牙龈素基因片段检测[J].中国实用诊断与治疗杂志，2013，27（7）：673-675.

[8] Li xiao jing，Kristin M，Leif tronstad，et al.Systemic disease caused by oral infection[J].Clinical Microbiology Reviews，2010，13（4）：547-548.

[9] Chen H，Zheng P. Platelet-activating factor levels of serum and gingival crevicular fluid in nonsmoking patients with periodontitis and/or coronary heart disease[J].Clin Oral Invest，2010，14：629-636.

[10] 马丽，张建全，潘亚萍.福赛斯坦纳菌在2型糖尿病患者龈下菌斑中的分布[J]华西口腔医学杂志，2011，29（1）：57-61.