胆固醇酯转移蛋白基因TaqIB多态性与新疆维吾尔族心房颤动患者的相关性研究

郁秀琴，木胡牙提，杨玉春，刘志强

(新疆医科大学第一附属医院综合心脏内科，乌鲁木齐　830054)

胆固醇酯转移蛋白基因TaqIB多态性与新疆维吾尔族心房颤动患者的相关性研究

郁秀琴，木胡牙提，杨玉春，刘志强

(新疆医科大学第一附属医院综合心脏内科，乌鲁木齐830054)

摘要：目的探讨胆固醇酯转运蛋白基因(CTEP TaqIB)T-aqIB多态性与新疆地区维吾尔族心房颤动(房颤)患者的关系。方法选取2014年2月—2015年10月新疆医科大学第一附属医院综合心脏内科收住的维吾尔族非瓣膜性房颤患者100例(房颤组)及在体检中心进行体检的维吾尔族非房颤患者100例(对照组)，从外周静脉血中提取基因组DNA，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-PFLP)进行基因多态性检测，比较两组人群基因多态性分布的差异。结果房颤组与对照组样本CTEP TaqIB基因多态性基因型符合哈迪-温伯格(Hardy-weinberg)平衡(房颤组χ2=0.72，P=0.39；对照组χ2=0.64，P=0.42)。CTEP TaqIB基因位点的测序结果显示其存在GG型、GA型、AA型3种基因型。基因型GG、GA、AA在维吾尔族房颤人群中分别有39例(39%)、50例(50%)、11例(11%)，在对照组人群中分别有24例(24%)、54例(54%)、22例(22%)，两组基因型和等位基因分布差异有统计学意义(χ2=6.57，P=0.037 4；χ2=6.91，P=0.008 5)。结论新疆地区维吾尔族心房颤动的发生与CTEP TaqIB基因多态性有相关性。

关键词：心房颤动； 民族； CTEP； 基因多态性

心房颤动(atrial fibrillation，AF)是临床上最常见的快速性心律失常，由于心房杂乱无序的电活动，使心房丧失有效的收缩和舒张，导致血流动力学改变，可导致一系列严重后果(如脑卒中、心力衰竭、心绞痛、心动过速性心肌病等)，患病率高且是一种增龄性疾病[1]，随着年龄的增长，房颤的发病率也在明显增高，美国成年人房颤的患病率为0.9%，其中年龄>50岁人群患病率为0.5%，>80岁人群患病率接近10%[2]。国内调查研究显示我国房颤患病率为0.77%，>80岁者为7.5%[3]。随着心脏病抢救成功率的提高和死亡率的下降，社会人口的老龄化，房颤的发病率呈现随年龄增长显著增高的趋势，然而房颤确切的发生机制至今尚未完全阐明。近年来，随着分子生物学技术水平的不断提高，单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)与房颤的关系的研究取得了一定的进展[4-5]。多国学者认为房颤的发生和持续与胆固醇酯转移蛋白基因(CETP TaqIB)多态性明显相关，并且还有关于多种族房颤易感基因多态性的研究[6-9]。但目前尚未见新疆维吾尔族房颤的发生与胆固醇酯转移蛋白基因(CETP TaqIB)相关联的研究报道，本研究拟在新疆地区维吾尔族房颤人群与非房颤人群间行CETP TaqIB基因多态性的研究，旨在探讨CETP TaqIB基因多态性与新疆地区维吾尔族房颤发生的相关性。

1资料与方法

1.1研究对象选取新疆医科大学第一附属医院2014年2月-2015年10月在综合心脏内科住院并经心电图、心脏超声检查确诊为非瓣膜性房颤的维吾尔族患者100例(房颤组)，选择同期在我院体检中心就诊的维吾尔族非房颤患者100例(对照组)。房颤以2006年ACC/AHA/ESC房颤防治指南的诊断标准进行诊断。房颤组纳入标准：经心电图或动态心电图证实为心房颤动，并除外其他心律失常；经心脏超声证实的非瓣膜性心脏病的房颤患者。对照组纳入标准：选择同一医院、同一时期无房颤病史，且其所有心电图检查包括Holter无房颤表现的患者。房颤组和对照组均无瓣膜性心脏病、先天性心脏病、自身免疫性疾病、风湿疾病、恶性肿瘤、血缘关系、肝肾疾病及2 w内外伤史患者。两组患者年龄、性别、吸烟、心力衰竭病史、高血压病史、糖尿病病史、体质指数(BMI)等差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1提取基因组DNA采集所纳入的维吾尔族房颤组和非房颤组各100例血液样本，空腹状态下每人抽取外周静脉血5 mL置乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，-20℃冰箱保存。按步骤说明规范操作使用基因组DNA提取试剂盒(由北京天根生化科技有限公司提供)提取基因组DNA。

1.2.2引物设计参照文献[10]方法设计引物，CETP基因TaqIB引物序列如下：正向引物：5′-CAC TAG CCC AGA GAG AGG CC-3′，反向引物：5′-CTG AGC CCA GCC GCA CAC TAA C-3′。

1.2.3聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-PFLP)分析20 μL PCR反应体系包括：PCR mix 10 μL、上游引物 0.5 μL、下游引物0.5 μL、超纯水(ddH2O)7 μL、基因组DNA2 μL。PCR反应条件：CETP基因TaqIB为预变性95℃ 3 min，变性95℃ 30 s，退火60℃ 30 s，延伸72℃ 45 s，重复30个循环；延伸72℃ 5 min，迅速冷却至4℃。PCR的产物在2%琼脂糖凝胶上电泳观察扩增结果，并照相存储照片。由上海生工生物工程有限公司对PCR产物进行DNA测序，并对突变位点进行定位。

2结果

2.1两组患者CETP TaqIB PCR扩增反应的产物比较CETP TaqIB基因位于第1内含子277位的G→A发生点突变(G277A)，扩增产物片段大小为535 bp，见图1。CETP TaqIB 基因位点的测序结果显示其存在3种基因型：GG型(图2)、GA型(图3)、AA型(图4)(箭头指向突变位点)。

2.2哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)平衡检验结果经检验，CETP TaqIB基因多态性基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，房颤组与对照组P值均>0.05，提示本试验的样本具有代表性(表1)。

2.3房颤组和对照组CETP TaqIB基因频率对比基因型GG、GA、AA在维吾尔族房颤人群中分别有39例(39%)、50例(50%)、11例(11%)，在对照组人群中分别有24例(24%)、54例(54%)、22例(22%)，两组基因型和等位基因分布差异有统计学意义(χ2=6.574，P=0.0374；χ2=6.91，P=0.008 5)(表2)。

M: DNA marker; 1～10: 房颤组10例患者DNA样本

图2　无突变纯合子GG基因型

图3　杂合子GA基因型

图4　突变纯合子AA基因型

表1　房颤组与对照组哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)平衡定律吻合度检验

表2　两组病例CETP TaqIB基因多态性基因型分布和等位基因频率/例(%)

3讨论

胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein，CETP)是一种单链高疏水性糖蛋白，其主要功能是负责协调脂质转运，与体内血脂水平、组成及颗粒的大小密切相关[10]。CETP基因位于人第16染色体长臂，长度约25 kb，含16个外显子和15个内含子[11]，是重要的调脂基因之一，该基因编码产物 CETP 是一种脂质代谢调节蛋白，其在胆固醇逆向转运中起重要作用[12]。CETP影响高密度脂蛋白(High-Density Lipoprotein HDL)和 低密度脂蛋白(Low-Density Lipoprotein LDL)颗粒大小的分布，是参与 HDL 代谢和决定 HDL、LDL 水平的重要因素[13-14]。

已有研究发现CETP TaqIB与非瓣膜性房颤发病显著相关[10]。Barter等[6]研究发现，人类CETP基因TaqIB多态位点A引起血浆中CETP水平降低，使胆固醇酯从HDL-C逆向转运到LDL-C作用减弱，从而使血浆HDL-C升高，LDL-C降低且氧化减少，进而降低血管壁的炎症，CETP G等位基因导致LDL-C升高，引起血管壁炎症及氧化应激。Shen等[15]研究证明糖尿病、高血压、心肌梗死都是非瓣膜性房颤的独立危险因素。国内学者研究显示，汉族人群 CETP TaqlB 遗传多态性与非瓣膜性心房颤动发病可能有相关性[8-9,17]。徐力辛等[16]发现CETP TaqlB、KCNE1 S38G、eNOS-T786C基因多态性之间存在交互作用，能够增加非瓣膜性房颤易感性。目前尚未见新疆地区维吾尔族人群CETP TaqlB与非瓣膜性房颤的相关性研究。本研究基于上述研究基础，对新疆地区维吾尔族人群CETP TaqlB与非瓣膜性房颤的相关性进行研究，研究发现房颤组和对照组的TaqlB 基因型均以GG和GA为主，CTEP TaqIB基因存在GG型、GA型、AA型3种基因型。新疆维吾尔族心房颤动和非心房颤动人群CTEP TaqIB基因多态位点基因频率分布比较，差异有统计学意义；等位基因频率比较，差异有统计学意义，提示CETP TaqlB基因多态性与维吾尔族非瓣膜性房颤的发生有关联。

综上所述，新疆地区维吾尔族CETP TaqlB基因型频率和等位基因频率差异有统计学意义。由于CETP基因TaqlB多态性是位于CETP基因的第1内含子，其附近区域是否存在未知功能的突变位点并不能排除，从而影响CETP含量和活性，导致脂代谢紊乱和心房颤动的发生。因本研究样本量偏小，且新疆是一个多民族聚集的地区，今后还需开展大样本、多民族的广泛深入的研究，为非瓣膜性心房颤动的治疗指引方向。

参考文献：

[1]黄从新, 马长生. 心房颤动:目前的认识和建议—2012[J]. 中华心律失常杂志, 2012, 16(4):246-289.

[2]Nattel S. New ideas about atrial fibrillation 50 years on[J]. Nature, 2002, 415(6868):219-266.

[3]周自强, 胡大一, 陈捷, 等. 中国心房颤动现状的流行病学研究[J]. 中华内科杂志, 2004, 43(7):491-494.

[4]Adeniran I, EI Harchi A, Hancox JC, et al. Proarrhythmiain KCNJ2-linked short QT syndrome:insights from modeling[J]. Cardiovasc Res, 2012, 94(1):66-76.

[5]Tsai CT, Lai LP, Lin JL, et al. Reninangiotensin system gene polymorphisms and atrial fibrillation[J]. Circulation, 2004, 109(13):1640-1646.

[6]Barter PJ, Nicholls S, Rye KA, et a1. Anti-inflammatory properties of HDL[J]. Circ Res, 2004, 95(8):764-772.

[7]Asselbergs FW, Moore JH, van den Berg MP, et al. A role for CETP TaqlB polymorphism in determining susceptibility to atrial fibrillation ;a nested case control study[J]. BMC Med Genet, 2006, 7:39.

[8]Shiroshita-Takeshita A, Brundel BJ, Burstein B, et al. Effects of simvastatin on the development of the atrial fibrillation substrate in dogs with congestive heart failure[J]. Cardiovasc Res, 2007, 74(1):75-84.

[9]吴银, 白怀, 刘瑞, 等. 中国人内源性高甘油三酯血症患者胆固醇酯转运蛋白基因TaqlB和-629C/A多态性[J]. 中华医学遗传学杂志, 2006, 23(6):640-646.

[10]Sandhofer A, Tatarczyk T, Laimer M, et al. The TaqIB-variant in the cholesterol ester-transfer protein gene and the risk of metabolic syndrome[J]. Obesity(Silver Spring), 2008, 16(4):919-922.

[11]Dullaart RP, Sluiter WJ. Common variation in the CETP gene and the implications for cardiovascular disease and its treatment:an updated analysis[J]. Pharmacogenomics, 2008, 9(6):747-763.

[12]Barter PJ, Kastelein JJ. Targeting cholesterol ester transfer protein for the prevention and management of cardiovascular disease[J]. J Am Coll Cardiol, 2006, 47(3):492-499.

[13]Barter PJ, Brewer HB Jr, Chapman MJ, et al. Cholesterol ester transfer protein:a novel target for raising HDL and inhibiting atherosclerosis[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003, 23(2):160-167.

[14]Wang J, Qiang H, Chen D, et al. CETP gene mutation(D442G)increases low density lipoprotein particle size in patients with coronary heart disease[J]. Clin Chim Acta, 2002, 322(1 /2):85-90.

[15]Shen J, Johnson VM, Sullivan LM, et al. Dietary factors and incident atrial fibrillation:the Framingham Heart Study1, 2, 3[J]. Am J Clin Nutr, 2011,93(2):261- 266.

[16]徐力辛, 杨炜宇, 张怀勤, 等. CETP TaqIB、KCNE1 S38G和eNOS T-786C基因多态性与非瓣膜性心房颤动的关联研究[J]. 中华流行病学杂志,2008, 29(5):486-492.

[17]杨炜宇, 徐力辛,张怀勤,等.汉族人群胆固醇酯转运蛋白基因和C反应蛋白基因多态性与非瓣膜性心房颤动的关联研究[J].中华医学遗传学杂志,2008, 25(2):225-229.

(本文编辑杨晨晨)

The correlation on polymorphism of cholesterol ester transfer protein gene TaqIB and atrial fibrillation Uyghur patients in Xinjiang

YU Xiuqin, Muhuyati, YANG Yuchun, LIU Zhiqiang

(Heart Interal Medicine Center，the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the association between polymorphism of cholesterol ester transfer protein gene (CTEP) TaqIB and atrial fibrillation (AF) Uyghur patients in Xinjiang. Methods100 cases Uyghur patients with atrial fibrillation (AF group) and 100 cases Uyghur patients with non-atrial fibrillation (control group) admitted by Heart Center of the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from February 2014 to October 2015 were selected to extract DNA samples from the peripheral blood to monitor gene polymorphism of TaqIB by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique and to compare polymorphism distribution between the two groups. Res-ultsCTEP TaqIB gene polymorphisms genotypes in AF group and control group samples was in the balance of Hardy-Weinberg equilibrium (AF group χ2=0.72, P=0.39; control group χ2=0.64, P=0.42), CTEP TaqIB loci sequencing results showed the existence of GG, GA and AA genotypes. GG, GA and AA in Uighur with AF were 39 cases (39%), 50 cases (50%) and 11 cases (11%), while that in the control group were 24 cases (24%), 54 cases (54%) and 22 cases (22%), in which genotype and allele distribution differences of the two groups were statistically significant (χ2=6.574, P=0.037 4; χ2=6.91, P=0.008 5). ConclusionTaqIB polymorphism had a quite significant correlation to the atrial fibrillation Uyghur patients in Xinjiang.

Keywords:Atrial fibrillation; Ethnic; CTEP; Gene polymorphism

基金项目：国家自然科学基金(81260036)

作者简介：郁秀琴(1977-)，女，在读硕士，主治医师，研究方向：电生理临床研究，心血管介入治疗与基础研究。 通信作者：木胡牙提，男(哈萨克族), 博士，教授，主任医师，博士生导师，研究方向： 电生理临床研究，心血管介入治疗与基础研究，E-mail：muhuyati@163.com。

中图分类号：R541.7

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)07-0845-04

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.07.008

[收稿日期：2016-06-02]

·基础医学研究·