光动力疗法联合紫杉醇对结直肠癌患者淋巴细胞转移增殖的影响

何耀明

光动力疗法联合紫杉醇对结直肠癌患者淋巴细胞转移增殖的影响

何耀明

江门市中心医院胃肠外科，广东 江门 529030

[摘要]目的探讨光动力疗法联合紫杉醇对结直肠癌患者淋巴细胞转移增殖的影响。方法连续选取我院2013年1月至2014年1月收治的结直肠癌患者40例，随机分为对照组和试验组，每组20例。对照组给予单纯的紫杉醇化疗，根据癌症的分级、分期情况合理选择化疗疗程；试验组联合应用光动力疗法和紫杉醇。对比分析两组患者的T淋巴细胞转移率、淋巴细胞凋亡率、IFN-γ增殖水平以及淋巴细胞IL-2表达水平和临床有效率的差异性，同时对两组治疗前后的E-cadherin病理表达情况进行分析。结果试验组患者的T淋巴细胞转移率高于对照组，淋巴细胞凋亡率低于对照组，IFN-γ和IL-2的表达水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组患者的总有效率高于对照组，生存时间较对照组延长，住院时间较对照组缩短，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前，试验组与对照组的E-cadherin阳性表达率分别为10.0%、15.0%，治疗后分别为25.0%和60.0%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论光动力疗法联合紫杉醇治疗结直肠癌能较好地抑制患者淋巴细胞的转移和增殖情况，增强E-cadherin表达，提高有效率。

[关键词]光动力疗法；紫杉醇；结直肠癌；淋巴细胞；转移；增殖

0引言

放化疗是目前临床上用于治疗晚期恶性肿瘤的主要手段，化疗能很好地杀伤或者抑制结直肠癌肿瘤细胞的扩散和转移，对预防术后并发症或者复发有很好的效果[1-3]。同时，相关研究表明，影响结直肠癌预后的主要因素是肿瘤的复发和转移，发生转移的结直肠癌患者的近10年预后总生存率增加尚不足2年。在肿瘤发生转移的机制中，E-钙粘附分子(E-cadherin)有抑制肿瘤浸润转移的功能，其黏附特性的改变也可能导致细胞骨架重排，从而促进肿瘤的浸润转移[4-5]。光动力疗法(Photodynamic thempy,PDT) 基本原理是光动力激光的光化学原理，通过氧化作用来攻击结肠癌肿瘤细胞结构，从而使结肠癌肿瘤细胞死亡[6-7]。本文为了探讨光动力疗效联合紫杉醇对结直肠癌患者淋巴细胞转移增殖的影响，选取2013年1月至2014年1月于我院就诊的结直肠癌患者共40例作为研究对象，并取得较好的临床效果。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料连续选取我院2013年1月至2014年1月收治的结直肠癌患者共40例，排除精神疾病、心脑血管疾病、合并其他严重消化道疾病等患者。所有患者经过肠镜与病理诊断为结直肠癌。将患者随机分为对照组和试验组，每组20例。对照组：男11例，女9例，年龄56～70岁，平均年龄(66.5±7.3)岁，病程1～12年，平均病程(8.0±2.0)年，结肠癌9例，直肠癌11例，Dukes分期C期13例、D期7例；试验组：男10例，女10例，年龄58～71岁，平均年龄(68.0±6.4)岁，病程6个月～10年，平均病程(7.6±2.5)年，结肠癌12例，直肠癌8例，Dukes分期C期10例、D期10例。两组患者的性别、年龄、平均病程、癌症类型、Dukes分期比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。全部病例术前均未经化疗、放疗、生物治疗，无长期服用非甾体抗炎药、皮质激素药物史。

1.2治疗方法对照组患者给予单纯紫杉醇化疗，根据疾病分级分期情况，Ⅰ级患者每周化疗1次，Ⅱ级每周2次，Ⅲ级每周3次。试验组患者联合应用光动力疗法和紫杉醇，使用Photoffin光敏剂时无需做过敏试验，静脉滴注Photoffin光敏剂时，按照Photoffin光敏剂2 mg/kg浓度对50 g/L葡萄糖注射液100 mL进行配置。激光治疗机内设的各种类型癌照射剂量大小应根据患者腔内肿瘤长度的不同而定，每次治疗照射1～3段，照射时间约12 min，能量密度为200 J/cm。行激光照射治疗每段之间应该衔接好，而且须超过肿瘤边界至少0.5 cm，这样才能使光照范围充分覆盖肿瘤区域。

1.3观察指标淋巴细胞检测：在患者接受上述治疗后的第3天，采集患者淋巴细胞作为研究样本，用PBS液洗涤2次，再加入PBS液制成单细胞悬浊液，调整细胞浓度105～106/mL。取样品悬液500 μL，在低温条件下加入试剂FITC，均匀搅拌，再加入PI 5 μL，低温条件下反应0.5 h。应用活淋巴细胞为阴性对照，调整0坐标点，将误差控制在2%以内，上机检测细胞转移增殖情况。记录两组T淋巴细胞转移率、淋巴细胞凋亡率、IFN-γ增殖水平及淋巴细胞IL-2表达水平。

疗效判定：结肠癌分级采用世界通用的标准[4]，即完全效应(CR)：结肠癌肿瘤患者检查时肿瘤应完全消失，在对组织进行病理活检应为阴性，持续至少1个月；明显效应(PR)：结肠癌肿瘤患者检查时，肿瘤最大径和其垂直径或肿瘤高度的乘积至少缩小1/2，且持续1个月；稍有效应(MR)：结肠癌肿瘤患者检查时肿瘤缩小不足1/2，并持续1个月；无效(NR)：结肠癌肿瘤患者检查时肿瘤无变化或增大。

E-cadherin表达检测：选择福州迈新公司的鼠抗人E-cadherin单克隆抗体，治疗前后采集所有患者结直肠癌组织，标本离体后置于4%福尔马林中固定后进行石蜡包埋备用，采用MaxVision法免疫组织化学染色，以已知阳性切片作为阳性对照，阴性对照以PBS替代一抗。病理染色后由2位病理医师分别双盲阅片，每张切片按正常染色的百分率进行评定：0～50%为阴性(-)，51%～80%为阳性(+)，81%～100%为强阳性(++)，同时观察E-cadherin蛋白的定位与分布情况。

2结果

2.1两组患者淋巴细胞转移和增殖情况比较试验组患者的T淋巴细胞转移率高于对照组，淋巴细胞凋亡率低于对照组，IFN-γ、IL-2的表达水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2E-cadherin表达情况E-cadherin主要表达于正常黏膜上皮的细胞膜上，多呈强阳性表达；在结直肠癌组织中，其表达明显下降。经过免疫组织化学染色分析，治疗前，试验组与对照组的E-cadherin阳性表达率分别为10.0%、15.0%，治疗后分别为25.0%、60.0%，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1　两组患者淋巴细胞转移和增殖情况

表2　两组患者E-cadherin阳性表达情况(例,%)

2.3两组患者的疗效比较试验组的总有效率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患者的生存时间较对照组延长，住院时间较对照组缩短，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3　两组患者临床效果比较(例)

3讨论

结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤之一。近年来我国结直肠癌的发病率及死亡率呈明显上升趋势。恶性肿瘤的侵袭转移是其主要症状和致死原因。肿瘤浸润包括粘附、溶解、移动3个步骤[8]，并且，其进展、侵袭与癌细胞运动性增加及肌动蛋白细胞骨架结构改变密不可分[9]。

紫杉醇是一种新型化疗药物，广泛应用于结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌及非小细胞肺癌等疾病的治疗中，其对免疫细胞的影响是重要的研究方向。体外实验发现，紫杉醇治疗可明显降低患者T淋巴细胞及体内IFN-γ的表达量，并且可以明显降低正常人和肿瘤患者T细胞的杀伤活性，抑制患者淋巴细胞的转移、增殖，促进其成熟、分化，其活化之后释放出的大量细胞因子能促进患者体内CD8细胞及巨噬细胞的活化成长，增强癌症患者体内CD8 T淋巴细胞和NK细胞的抗肿瘤活性[10]。CD16是NK细胞的表面标志物，是一种淋巴细胞表面具有低亲和力的IgG Fe受体，当这种受体导入患者淋巴细胞的ADCC中产生作用时，可以直接杀死癌细胞。郭志琴等[11]报道，紫杉醇作为一种淋巴细胞抑制剂，对癌细胞患者化疗后细胞转移、增殖的控制效果更明显。该研究表明，紫杉醇作用72 h的淋巴细胞、CD3、CD4、CD8等的相对含量没有明显变化，但NK细胞非常敏感，其中CD16的表达率明显降低。相关实验表明，紫杉醇作用淋巴细胞的微管系统和微管系统聚集成微管束，能降低淋巴细胞溶解靶细胞的动力学和淋巴细胞的再生能力[12]。

光动力疗法的基本原理是光动力激光的光化学原理，采用特定波长的激光来激活肿瘤组织内滞留的光敏剂，使其与肿瘤组织内的氧发生作用，产生单态氧及一些活泼的自由基。通过氧化作用攻击结肠癌肿瘤细胞结构而使其死亡。如今光动力疗法在治疗结直肠癌方面已取得较好的效果，已逐渐成为治疗结直肠癌的常规手段之一。肿瘤光动力疗法的体内外试验、新型光敏剂的合成及其光动力疗法治疗肿瘤的作用机制等方面的研究快速进展，使得肿瘤光动力疗法取得了较大的进步[13-14]。

E-cadherin是钙依赖粘附素家族中的重要成员之一，广泛分布于上皮细胞相连接的细胞膜上，是Wnt传导通路上重要的组成部分，可以介导并维持上皮细胞之间的紧密连接及正常的细胞形态[15]。E-cadherin主要表达于正常黏膜上皮的细胞膜上，多呈强阳性表达；在结直肠癌组织中，其表达明显下降。当肿瘤细胞E-cadherin发生基因突变、转录抑制时，其功能发生障碍，致肿瘤细胞浸润性生长[16]。本研究中，治疗前试验组与对照组的E-cadherin阳性表达率分别为10.0%、15.0% (P>0.05)，治疗后分别为25.0%、60.0% (P<0.05)，提示E-cadherin可能在肿瘤进展、转移的发生中共同起作用，能有效反映疾病的预后状况。

本研究观察光动力疗法和紫杉醇联合应用对结直肠癌患者淋巴细胞转移、增殖的影响，结果显示，与单用紫杉醇组比较，联合应用光动力疗法和紫杉醇的患者，其T淋巴细胞转移率较高，淋巴细胞凋亡率较低；IFN-γ、IL-2表达水平较高；总有效率较高；生存时间显著延长，住院时间缩短。表明联合应用光动力疗法和紫杉醇可以更好地增强淋巴细胞的抗肿瘤特性，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进其凋亡。

综上所述，光动力化疗和紫杉醇联合应用于结直肠癌的治疗，能抑制淋巴细胞的转移、增殖，增强E-cadherin表达，值得在临床推广。

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Effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer

HE Yao-ming

(Department of Gastrointestinal Surgery,Jiangmen Central Hospital,Jiangmen 529030,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer.MethodsConsecutive 40 cases diagnosed as colorectal cancer from January 2013 to January 2014 in our hospital were enrolled and divided randomly into control group and experiment group,20 cases in each group.All the patients received standard chemotherapy according to grading and staging of the cancer,and control group was given paclitaxel treatment,while experiment group was given photodynamic combined with paclitaxel.The transferation rate and apoptosis rate of T lymphocyte,proliferation level of IFN-γ,expression level of IL-2 and clinical efficiency of the two groups were compared.The expression of E-cadherin pathology was analyzed before and after treatment.ResultsCompared with control group,the transferation rate of T lymphocyte in experiment group was significantly higher with lower apoptosis rate (P<0.05);the expression levels of IFN-γ and IL-2 in experiment group were higher (P<0.05);the total effective rate in experiment group was higher with longer survival time and shorter in-hospital time (P<0.05).No significant difference was found in the E-cadherin positive expression between experimental group and control group (10.0% vs.15.0%,P>0.05) before treatment,while there was significant difference after treatment (25.0% vs.60.0%,P<0.05).ConclusionPhotodynamic therapy combined with paclitaxel can greatly inhibit the metastasis and proliferation rate of lymphocytes,enhance E-cadherin positive expression,and improve the clinical efficacy in patients with colorectal cancer.

Key words：Photodynamic therapy;Paclitaxel;Colorectal cancer;Lymphocyte;Metastasis;Proliferation

收稿日期：2015-09-07

基金项目：江门市科技计划项目(2014020)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201605009