高效液相色谱法同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱含量

李　静，钱　江

（1.江苏省扬州市食品药品检验检测中心，江苏扬州　225009；2.扬州大学医学院，江苏扬州　225001）



高效液相色谱法同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱含量

李静1，钱江2

（1.江苏省扬州市食品药品检验检测中心，江苏扬州225009；2.扬州大学医学院，江苏扬州225001）

摘要：目的建立同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.4%磷酸溶液-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为35℃，进样量为10 μL。结果芍药苷和盐酸小檗碱的进样质量浓度分别在1.496 1～187.016 0 μg/mL（r=0.999 9）和1.788 1～223.512 6 μg/mL （r=0.999 9）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为100.58%（RSD=1.29%，n=6）和101.58%（RSD=1.76%，n=6）。结论该法简便准确，可用于同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱的含量。

关键词：高效液相色谱法；复方黄连素片；芍药苷；盐酸小檗碱

复方黄连素片由盐酸小檗碱、木香、吴茱萸和白芍组方，具有清热燥湿、行气止痛、止痢止泻的功效，收载于2015年版《中国药典（一部）》［1］。笔者根据文献［2-4］，简化原标准中的实验操作，并采用高效液相色谱法同时测定该制剂中芍药苷和盐酸小檗碱的含量，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

LC-20AB型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；XS205DU型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2试药

芍药苷对照品（批号为110736-201438，含量为96.4%），盐酸小檗碱对照品（批号为110713-201212，含量为86.7%），使用前均不需干燥处理，均购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用；复方黄连素片（市售品，批号分别为1402004，1409015，140501）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：以0.4%磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱（见表1）；进样量：10 μL；柱温：35℃；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min。在此条件下，色谱图见图1。

表1　流动相梯度洗脱程序表

2.2溶液制备

称取芍药苷、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，置同一50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得混和对照品贮备液（含芍药苷187.016 0 μg/mL和盐酸小檗碱223.512 6 μg/mL）。取本品10片，除去糖衣，研细，取0.1 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。按处方工艺制备不含芍药苷、盐酸小檗碱的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

线性关系考察：精密量取混合对照品贮备液各2 mL，分别置250，200，100，50，25，10，5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成不同质量浓度的混合对照品溶液。取混合对照品贮备液和上述不同质量浓度的混合对照品溶液依法测定。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X，μg/mL）为横坐标进行线性回归，得芍药苷的回归方程为Y=6 394.2 X + 109.35，r=0.999 9（n=8）；盐酸小檗碱为Y=47 212 X-32 442，r=0.999 9（n=8）。结果表明，芍药苷和盐酸小檗碱质量浓度分别在1.496 1～187.016 0 μg/mL和1.788 1～223.512 6 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1　高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积。结果芍药苷和盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.26%和0.17%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为1402004），分别于制备0，2，4，6，8 h后进样，测定峰面积。结果芍药苷和盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.19%和0.33%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为1402004），依法平行制备6份供试品溶液，进样测定含量。结果芍药苷和盐酸小檗碱含量的RSD分别为1.44%和0.99% （n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取芍药苷对照品12.15 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷对照品溶液。精密称取盐酸小檗碱对照品60.40 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为盐酸小檗碱对照品溶液。取已知含量的样品（批号为1402004）6份，每份约0.05 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，分别精密加入芍药苷和盐酸小檗碱加样对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，平行2份，依法测定，计算回收率。结果见表2。

表2　加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算样品中芍药苷和盐酸小檗碱的含量。结果见表3。

表3　3批样品每片含量测定结果

3　讨论

2015年版《中国药典（一部）》采用高效液相色谱法分别测定芍药苷和盐酸小檗碱的含量，溶液制备过程较烦琐，尤其是盐酸小檗碱的测定方法，增加了对结果的影响因素［1］。参考文献［2-4］，对对照品和样品制备过程进行改进，直接采用甲醇超声处理，操作简便、快速，结果重复性好。

由二极管阵列检测器获得的芍药苷和盐酸小檗碱紫外吸收光谱可知，芍药苷峰于230 nm波长处有最大吸收，盐酸小檗碱于231，265，351 nm波长处有最大吸收。综合考虑，两种物质于230 nm波长处均有较高吸收，且干扰峰较少，峰形良好，故选择230 nm作为检测波长。

综上所述，采用高效液相色谱法同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱的含量，方法简便、准确，可用于对复方黄连素片的质量控制。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：1 243.

［3］李茂森.复方黄连素片中盐酸小檗碱含量测定方法改进［J］.中国药业，2013，22（14）：68-69.

［4］张采琼，王秀萍，宋雨.HPLC法测定清热宁肾胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.成都大学学报：自然科学版，2014，33（2）：118-120.

Content Determination of Paeoniflorin and Berberine Hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets by HPLC

Li Jing1，Qian Jiang2
（1.Yangzhou Municipal Food and Drug Inspecting and Testing Center，Yangzhou，Jiangsu，China 225009；2.Yangzhou University Medical Academy，Yangzhou，Jiangsu，China 225001）

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the content determination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets.Methods The chromatographic column was Phenomenex Luna C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；the mobile phase was composed of 0.4%phosphoric acid-acetonitrile；the flow rate was 1.0 mL/min；the detection wavelength was 230 nm；the column temperature was 35℃and the injection volume was 10 μL.Results The linear ranges of paeoniflorin and berberine hydrochloride were 1.496 1-187.016 0 μg/mL（r=0.999 9）and 1.788 1-223.512 6 μg/mL（r=0.999 9）respectively，and their average recovery rates were 100.58%（RSD=1.29%，n=6）and 101.58%（RSD was 1.76%，n=6）respectively.Conclusion The method is simple，accurate and suitable for determining the contents of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Compound Huangliansu Tablets.

Key words：HPLC；Compound Huangliansu Tablets；paeoniflorin；berberine hydrochloride

中图分类号：R284.1；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0061-03

作者简介：李静（1985-），女，主管药师，主要从事药品检验工作，（电子信箱）lijing320323@163.com。

收稿日期：（2015-09-14）