乌头碱类生物碱的含量测定方法概述

陆燕萍，巩晓宇，陈秋燕，邱凤邹

（1.广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳　518172；2.广东医学院，广东东莞　523808）



乌头碱类生物碱的含量测定方法概述

陆燕萍1，巩晓宇1，陈秋燕2，邱凤邹1

（1.广东省深圳市龙岗区人民医院，广东深圳518172；2.广东医学院，广东东莞523808）

摘要：总结概括目前川乌、草乌、附子等乌头碱类药物的单酯型生物碱、双酯型生物碱及总生物碱的含量测定方法，主要有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、液-质联用方法、双波长薄层扫描法、高效毛细管电泳法和分光光度法。该文根据不同的流动相对高效液相色谱法和反相高效液相色谱法进行分类，同时根据不同的展开剂对双波长薄层色谱法进行了分类。

关键词：乌头碱类生物碱；含量测定；高效液相色谱法；反相高效液相色谱法；液-质联用方法

乌头碱类药物的主要成分是生物碱，包括单酯型生物碱、双酯型生物碱、氨醇型生物碱和其他类型化合物。其中双酯型生物碱既是有效成分，也是毒性较强的物质，但经转化成单酯型生物碱后毒性大大降低，疗效仍然存在。2010年版《中国药典（一部）》规定总双酯型生物碱质量分数≤0.04%，总单酯型生物质量分数0.02%～0.07%［1］。因此，准确快速地测量生物碱的含量非常重要，笔者概述了目前可以用于测定这些生物碱含量的方法。现报道如下。

1　高效液相色谱（HPLC）法

HPLC法具有对设备要求较低，样品较容易处理，所得样品中的杂质含量较少，检测的精密度高、准确性好等优点。其中，紫外光（UV）检测器是HPLC法中最常用的检测器，分离测定乌头碱类生物碱的条件见表1。HPLC法测定乌头类药物中生物碱的含量，方法学考察显示其具有线性关系、精密度、重现性、稳定性和加样回收率良好等优点，专属性强、结果准确，能够对乌头类药物进行有效的质量评价和质量控制。

表1　HPLC法UV检测器测定乌头及其制剂总碱含量的条件

2　反相高效液相色谱（RP-HPLC）法

色谱条件见表2。

表2　RP-HPLC法UV检测器测定乌头及其制剂总碱含量的条件

3　液-质联用方法

马芳等［14］建立了同时检测附子水提液中新乌头碱、次乌头碱含量的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法，Agilent Zorbax SB C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相A为水（0.05%FA），B为乙腈，采用梯度洗脱［A-B（72∶28），0～2 min时28%～34%B，2～6 min 时34%～35%B，6～10 min时35%～100%B］，流速0.35 mL/min；柱温40℃；正离子模式，MRM，新乌头碱m/z632.3～572.3，次乌头碱m/z 616.3～556.2。

另外，李铮等［15］建立了测定乌头饮片中生物碱含量的液-质联用方法，并测得了25批乌头不同饮片中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量。色谱柱采用Inertsil ODS-3色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相［16-18］为乙腈-醋酸铵缓冲液（2.5%冰醋酸，用浓氨水调节pH至10.5左右，60∶40），流速0.2 mL/min，柱温30℃；质谱采用电喷雾电离离子源，源电压4.5 kV，毛细管温度为270℃，毛细管电压20 V，鞘气流速50 arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用选择离子模式检测。该法具有灵敏、专属性强的特点，适用于微量生物碱的检测。

4　双波长薄层扫描法

检测条件见表3。

表3　各样品的薄层条件与扫描条件

5　高效毛细管电泳法

于燕莉等［22］采用高效毛细管电泳法测定痹痛宁贴剂中东莨菪碱、乌头碱的含量。电泳介质为50 mmol/L pH=6.0的磷酸盐缓冲液（含20%无水乙醇），分离通道为未涂层石英毛细管（50 μm×32 cm，有效长度23.5 cm），压力进样（2 kPa×5 s），分离电压8 kV，检测波长200 nm，操作温度30℃。结果东莨菪碱加样回收率为98.4%，乌头碱为96.6%，RSD分别为1.61%和1.17%（n=5）。

6　分光光度法

郑来丽等［23］依据乌头类总生物碱与溴甲酚绿在pH=3.5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中反应生成离子对化合物的光谱特征，利用分光光度法于412.5 nm波长处测定吸光度并计算含量。结果表明，乌头碱质量浓度在10.12～22.77 μg/mL范围内与吸光度线性关系良好（r=0.999 6，n=6），平均加样回收率为99.27%。

7　小结

乌头类生物碱尤其是双酯型生物碱毒性较大，而且其毒性用量范围与有效治疗用量范围很接近，因此准确、快速地检测到这些生物碱的含量具有重要的临床意义。HPLC法因具有柱效高、分离好、稳定方便，能同时测定几种乌头碱的含量等优点而被广泛研究和利用；RP-HPLC法则操作简便、可行，结果稳定；液-质联用方法具有灵敏、专属性强的特点，适用于微量生物碱的检测；双波长薄层扫描法方法精密度高，回收率、重现性好，斑点清楚圆整，比较适合新乌头碱的含量测定，但最近几年应用较少；高效毛细管电泳法则具有快速简便、灵敏度高，重现性好的优点；分光光度法用于测定乌头类总生物碱的含量准确可靠、简便易行、专属性强。

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Determination Method of Aconitum Alkaloids

Lu Yanping1，Gong Xiaoyu1，Chen Qiuyan2，Qiu Fengzou1
（1.People′s Hospital of Longgang District，Shenzhen，Guangdong，China 518172；2.Guangdong Medical College，Dongguan，Guangdong，China 523808）

Abstract：The content determination methods of single ester alkaloids，diester alkaloids and total alkaloid in radix aconiti，kusnezoff monkshood，aconite and other aconitine drugs are described in this article including HPLC，RP-HPLC，LC-MS，TLCS，High Performance Capillary Zone Electrop-horesis and Spectrophotometry.Based on different mobile phase，HPLC and RP-HPLC is classified.At the same time，the classification of TLCS is carried out studied according to different deployment agents.

Key words：aconitum alkaloids；assay；HPLC；RP-HPLC；LC-MS

中图分类号：R282.41；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0001-03

作者简介：陆燕萍，女，主任中药师，主要研究方向为中药鉴定与中药炮制，（电话）0755-28932833-8131（电子信箱）luyanp317@163.com。

收稿日期：（2015-10-14）