高效液相色谱法测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量

汪杨丽

（重庆市食品药品检验所·重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆　401121）



高效液相色谱法测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量

汪杨丽

（重庆市食品药品检验所·重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆401121）

摘要：目的建立测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55），流速为1.0 mL/min，检测波长为355 nm。结果芦荟苷进样量在0.134 5～4.307 5 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9），加样回收率为101.12%，RSD=1.12%（n=6）。结论该法简便、准确，重复性好，可作为丽康宝胶囊中芦荟苷的含量测定方法。

关键词：高效液相色谱法；丽康宝胶囊；芦荟苷

丽康宝胶囊是猴头菇、灵芝、芦荟、珍珠粉4味中药加工制成的复方制剂。猴头菇和灵芝主要含蛋白质、多糖、核苷酸、微量元素等成分，能增强免疫力、促进肠胃功能。现代研究表明［1］，芦荟具有抗癌、抗炎、增加免疫力、润肠通便、保护皮肤等功效，其主要生物活性成分是芦荟苷。笔者建立了测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量的高效液相色谱法，以期为其质量标准制订提供依据。

1　仪器与试药

1.1仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪（沃特世公司）；Agillent 1100型高效液相色谱仪（安捷伦公司）；Bp221s型电子天平（万分之一，德国赛多利斯公司）；Mettler Toledo型电子天平（十万分之一，瑞士）。

1.2试药

芦荟苷对照品（批号为110787-201206，纯度95.0%，中国药品生物制品检定所）；丽康宝胶囊样品（新西兰安发保健品有限公司，批号为HPK23814，HPK18214，HPK24514）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55）；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：355 nm；进样量：5 μL。

2.2溶液制备

精密称取芦荟苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为0.861 5 g/L的对照品贮备液。取装量差异项下的内容物，研细，混匀，取约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率450 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取按处方及工艺制备的缺芦荟阴性样品0.3 g，照供试品溶液制备方法处理，得阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5 μL，注入色谱仪，按拟订色谱条件进行测定，记录色谱图，见图1。可见，在与芦荟苷对照品相应的保留时间处无色谱峰，说明阴性对照品溶液无干扰。

线性关系考察：精密吸取质量浓度为0.861 5 g/L的芦荟苷对照品贮备液5.0 mL，置10 mL容量瓶中，摇匀，逐级稀释，分别得质量浓度为0.430 8，0.215 4，0.107 7，0.053 8，0.026 9 g/L的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件测定，记录峰面积，用最小二乘法进行线性回归，得线性回归方程Y=2×106X-12 683，r=0.999 9（n=5）。结果表明，芦荟苷进样量在0.134 5～4.307 5 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液（质量浓度为0.215 4 g/L）5 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果的RSD为0.8%（n=6），表明仪器精密度良好。

图1　高效液相色谱图

重复性试验：取同批样品（批号HPK18214），按供试品溶制备方法制备6份溶液，依法测定并计算含量。结果芦荟苷平均含量为44.7 mg/g，RSD为0.5%（n=6），表明方法重复性好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为HPK18214），分别于0，2，4，6，8，10，12 h时进样5 μL，测定峰面积。结果的RSD分别为1.0%（n=7），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密称取芦荟苷对照品适量，加甲醇制得质量浓度为0.135 6 g/L的对照品溶液。精密称取0.15 g已测定含量的样品（批号为HPK18214，芦荟苷含量为44.7 mg/g），共6份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL芦荟苷对照品溶液，按2.2项下方法制备供试品溶液，测定含量并计算回收率。结果见表1。

表1　芦荟苷加样回收试验结果（n=6）

耐用性试验：采用Agilent 1100型色谱仪、Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Waters 2695型色谱仪、Waters C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），按拟订色谱条件，分别测定同批样品（批号为HPK18214）。结果供试品溶液各组分色谱峰均得到很好的分离，芦荟苷的含量为44.7 mg/g。

2.4样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果批号为HPK18214，HPK23814，HPK24514的样品中芦荟苷含量分别为44.7，45.7，45.8 mg/g。

3　讨论

本试验中采用甲醇［2］、稀乙醇、乙醇、无水乙醇4种提取溶剂对样品进行超声提取，结果甲醇提取效果好。还比较了提取10，20，30，45，60 min的效果，结果超声30 min时提取完全，随着超声时间增加，芦荟苷对热不稳定，含量降低。

试验中曾选用了乙腈-水（25∶75）［3］、甲醇-水（45∶55）［2］和甲醇-1%冰醋酸（45∶55）［4］等流动相，结果甲醇-1%冰醋酸（45∶55）系统使样品芦荟苷色谱峰的对称性好，分离度好，且保留时间适宜。

试验中曾用甲醇、45%甲醇、水配制芦荟苷对照品溶液，随着时间的推移，芦荟苷峰面积逐渐减少，出现1个色谱峰并且其峰面积逐渐增加。参考文献［5］，芦荟苷是以互为同分异构体的芦荟苷A和芦荟苷B两种形式存在，在一定条件下可以相互转化。芦荟苷在强酸性环境下稳定［6］，故最终选择以流动相甲醇-1%冰醋酸（45∶55）溶解芦荟苷对照品，芦荟苷稳定性较好。

参考文献：

［1］卢朝国，王红专，李燕红，等.高效液相色谱法同时测定芦荟中芦荟苷和芦荟大黄素的含量［J］.郑州大学学报：医学版，2008，43（3）：584-586.

［2］刘桂花，何承辉，邢建国，等.HPLC法同时测定复方苏润江滴丸中秋水仙碱、芦荟苷及芦荟大黄素的含量［J］.药物分析杂志，2013，33（3）：409-413.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：152.

［4］黄丽英，陈敬华，林水森，等.RP-HPLC测定复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素、靛蓝的含量［J］.中国中药杂志，2006，31（15）：1 289-1 290.

［5］晏正，陈双喜，寇正福，等.芦荟苷在水中稳定性的研究［J］.河南大学学报：自然科学版，2010，40（3）：287-290.

［6］潘虹，焦玉果，林颖慧.芦荟甙提取方法及稳定性研究［J］.中央民族大学学报：自然科学版，2008，17（2）：52-57.

Content Determination of Alion in Likangbao Capsules by HPLC

Wang Yangli
（Chongqing Institute For Food and Drug Control，Chongqing Engineering Technology Research Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing 401121）

Abstract：Objective To establish a HPLC method for simultaneous determination of alion in Likangbao Capsules.Methods The samples were separated on Waterst C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）by methanol-1%acetic acid solution（45∶55）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 355 nm.Results The calibration curve showed good linearity in the range of 0.134 5-4.307 5 μg（r=0.999 9）.The average recovery rate was 101.12%（RSD=1.12%，n=6）.Conclusion The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be conducive to the determination of Aloe in Likangbao Capsules.

Key words：HPLC；Likangbao Capsules；alion

中图分类号：R284.1；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0059-02

作者简介：汪杨丽，女，主管中药师，硕士研究生，主要从事中药分析工作，（电话）023-86072753（电子信箱）wangyangli81@163.com。

收稿日期：（2015-10-14）