高效液相色谱法测定重感灵胶囊中安乃近含量

张芳，张波

（内蒙古医科大学第一附属医院，内蒙古呼和浩特　010050）



高效液相色谱法测定重感灵胶囊中安乃近含量

张芳，张波

（内蒙古医科大学第一附属医院，内蒙古呼和浩特010050）

摘要：目的建立测定重感灵胶囊中安乃近含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱采用Eclipse Plus-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），ODS预柱；流动相为甲醇-0.5%庚烷磺酸钠醋酸溶液（取庚烷磺酸钠2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀释至400 mL，V∶V=60∶40），检测波长264 nm，流速1.0 mL/min。结果安乃近进样量在0.2～1.2 μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 98，n=6），加样回收率为100.53%，RSD为1.17%（n=9）。结论该法结果准确，可用于测定重感灵胶囊中安乃近含量。

关键词：重感灵胶囊；安乃近；含量；高效液相色谱法

重感灵胶囊是由毛冬青、葛根、马鞭草、板蓝根、青蒿、羌活、石膏、安乃近及马来酸氯苯那敏与适量辅料加工而成的中西药复方制剂，具有解表清热、疏风止痛的作用，用于表邪未解、郁里化热引起的重症感冒，症见恶寒、高热、头痛、四肢酸痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。该制剂处方成分较为复杂，安乃近｛［（1，5-二甲基-2-苯基-3-氧代-2，3-二氢-1H-吡唑-4-基）甲氨基］甲烷磺酸钠盐一水合物｝为方中西药成分，是本品发挥药效的主要成分之一［1］。笔者按照国家药品标准重感灵片（WS3-B-3641-98-2003）自制重感灵胶囊质量标准进行了研究，建立了测定方中安乃近含量的高效液相色谱法，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦科学仪器有限公司），包括四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、VWD检测器；HP化学工作站。

1.2试药

安乃近对照品（中国食品药品检定研究院，批号为0002-9504，供含量测定用）；重感灵胶囊样品（自制，批号为130201，130202，130203）；乙腈为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件［2-5］

色谱柱：Eclipse Plus-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），ODS预柱；流动相：甲醇-0.5%庚烷磺酸钠醋酸溶液（取庚烷磺酸钠2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀释至400 mL，V∶V=60∶40）；检测波长：264 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：10 μL。

2.2溶液制备［2-3］

供试品溶液：取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0.4 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加冰醋酸2 mL和流动相43 mL，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）15 min，用流动相稀释至刻度，摇匀，移至具塞离心管中，离心10 min（转速3 000 r/min），用注射器吸取上清液，注入经预处理的Sep-Pak C18微柱（微柱预处理，分别用甲醇和水各10 mL冲洗，再注入空气，尽量将残留的水驱除，备用），流出速度为2～3 mL/min，弃去前10 mL的流出液，收集第11～15 mL的流出液，精密量取1 mL，置25 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，在25℃以上室温放置3 h，即得。

对照品溶液：取安乃近对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含40 μg的溶液，在25℃以上室温放置3 h，即得。

阴性对照品溶液：按处方量制备缺安乃近的阴性样品，取约0.4 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.3方法学考察

系统适用性试验：取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液，在拟订色谱条件下进样10 μL，记录色谱图，见图1。可见，阴性对照品溶液色谱在安乃近峰位置无相应峰出现，且安乃近和其他组分色谱峰可很好地分离，对安乃近的测定无干扰；在与安乃近对照品峰相对应的位置上供试品溶液具有相应色谱峰，且与相邻峰的分离度大于1.5；安乃近峰理论板数（n）超过4 000，拖尾因子（T）为1.03。

图1　高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取安乃近对照品溶液（质量浓度为0.04 g/L）5，10，15，20，25，30 μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，以峰面积值（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程A=2 555.535 6 C-9.894 8，r=0.999 98（n=6）。结果表明安乃近进样量在0.2～1.2 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积。结果的RSD为0.073%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号130202），分别于制备0，2，4，6，8 h时进样。结果的RSD为0.74% （n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号130201），依法制备6份供试品溶液，分别进样，测定峰面积并计算含量。结果平均含量为91.2%，RSD为0.31%（n=6），表明方法的重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为130201）约0.2 g，共9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别按低、中、高量级加入安乃近对照品溶液（质量浓度4 g/L），按供试品溶液制备方法操作，制备加样回收供试品溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1　安乃近加样回收试验结果（n=9）

2.4样品含量测定

取3批样品，依法测定样品含量，结果见表2。

表2　重感灵胶囊中安乃近的含量测定结果（n=3）

3　讨论

在供试品溶液制备时，曾分别按原重感灵片国家标准（WS3-B-3641-98-2003）和2010年版《中国药典（二部）》安乃近有关物质项下方法试验，确定了文中的样品制备方法。

选择流动相时，参照2010年版《中国药典（二部）》安乃近有关物质测定方法及原标准方法，考察了甲醇-0.5%庚烷磺酸钠醋酸溶液（取庚烷磺酸钠2.0 g，加冰醋酸10 mL，用水溶解并稀400 mL，V∶V=60∶40），磷酸盐缓冲液［（磷酸二氢钠6.0 g，加水1 000 mL，加三乙胺1 mL，用氢氧化钠调节pH至7.0）-甲醇（75∶25）］，结果前者各成分可得到较好分离。

通过对精密度、稳定性、重复性、回收率试验及样品中安乃近的含量测定，证明本方法作为该药品的含量测定方法，能够保证药品检测时数据的真实性、可靠性，可作为保证药品质量的检测依据。

参考文献：

［1］阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用［M］.北京：学苑出版社，1993：626.

［2］WS3-B-3641-98-2003，卫生部颁药品标准·中药成方制剂第（十九册）［S］.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：286.

［4］杨兴明，李娟.HPLC法测定安乃近滴鼻液中安乃近的含量［J］.中国药师，2004，7（11）：907.

［5］张红，王早斌.高效液相色谱法测定安乃近片的含量［J］.中国药业，2008，17（15）：33.

中图分类号：R927.2；R971+.1

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0041-03

收稿日期：（2015-10-14）