新疆地区不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物分布对比分析

朱玥洁， 张峰波， 胡　泊， 赵　静， 王　鹏， 李绍昱， 腊晓琳， 陈　艳

(新疆医科大学1公共卫生学院， 乌鲁木齐　830011； 2第一附属医院检验科； 3第一附属医院生殖助孕中心， 乌鲁木齐　830054;4附属肿瘤医院检验科， 乌鲁木齐　830011; 5浙江省嘉兴学院医学院， 浙江　嘉兴　314000)



新疆地区不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物分布对比分析

朱玥洁1， 张峰波2， 胡泊3， 赵静3， 王鹏3， 李绍昱4， 腊晓琳3， 陈艳5

(新疆医科大学1公共卫生学院， 乌鲁木齐830011；2第一附属医院检验科；3第一附属医院生殖助孕中心， 乌鲁木齐830054;4附属肿瘤医院检验科， 乌鲁木齐830011;5浙江省嘉兴学院医学院， 浙江嘉兴314000)

摘要：目的探讨不同民族输卵管性不孕症患者生殖道微生物的分布特点。方法选择新疆医科大学第一附属医院生殖助孕中心就诊的输卵管性不孕患者558例，采用质谱分析对不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物检测，荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测不孕症患者宫颈液中解脲支原体和衣原体，阴道分泌物进行细菌培养和阴道清洁度检测。比较分析不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物分布特点。结果汉族、哈萨克族、维吾尔族、蒙古族和回族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱图谱存在明显差别，图谱中峰值主要集中于100～200质荷比，不同民族图谱差异主要集中于0～100质荷比。哈萨克族支原体阳性率为56.52%，在5个民族中最高(P<0.05)。不同民族输卵管性不孕患者生殖道清洁度差异有统计学意义(P<0.05)。不同民族输卵管性不孕患者生殖道优势生长菌差异有统计学意义(P<0.05)。菌哈萨克族、维吾尔族和蒙古族输卵管性不孕患者优势菌乳酸杆明显低于汉族和回族，并且大肠埃希菌和凝固酶阴性葡萄球菌检出率明显增高。结论输卵管性不孕患者微生物分布的差异可能与不同民族不孕有关，新疆地区不同民族输卵管性不孕可能与生殖道微生物分布不同有关

关键词：慢性输卵管炎症不孕； 微生物； 解脲支原体

人体各个环境内聚居着庞大而复杂的正常微生物群，与人体健康和疾病关系密切[1-4]。健康女性生殖道内存在着多种正常的微生物群落，与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调动态的微生态平衡,这些女性生殖道菌群在维持生殖道微生态平衡、发挥占位性保护作用和定植抗力等方面发挥着重要的作用，是宿主抵御致病菌或条件致病茵的一道重要的生物学屏障．但由于受环境变化、药物刺激及宿主自身，女性生殖道内的微生态菌群多样性可发生变化，使宿主生殖道内的微生态平衡被打破，其由生理性组合转变为病理性组合状态，从而引起女性生殖道微生态失衡，导致疾病的发生[5-7]。输卵管炎症是引起不孕症最常见因素。本研究旨在探讨新疆地区输卵管性不孕患者阴道菌群的分布特点，为防治该病提供试验依据。

1对象与方法

1.1研究对象选择2015年1- 5月新疆医科大学第一附属医院生殖助孕中心就诊的输卵管性不孕患者548例，均经输卵管碘油造影确诊为输卵管性不孕。其中汉族418例，维吾尔族68例，回族30例，哈萨克族23例，蒙古族19例。

1.2方法

1.2.1阴道分泌物采集使用无菌棉棒围绕阴道上中 1/3 刮取阴道分泌物,置于无菌试管，每例实验对象取材4管。

1.2.2阴道细菌质谱测定1 μL BTS(标准品)滴加到靶板上，室温干燥后，滴加基质液。取不同民族输卵管性不孕患者生殖道棉签微生物点到靶板上，室温干燥后，滴加基质液。用标准品进行系统误差校正。然后检测样本，读取峰值和质荷比，按照试剂说明书进行操作。

1.2.3支原体和衣原体检测采用荧光定量PCR方法检测解脲支原体和衣原体。

1.2.4清洁度检测滴加生理盐水，取阴道分泌物直接涂片进行阴道清洁度的检测，阴道清洁度的判断标准遵循第5版《临床检验操作规程》。

1.2.5菌群密集度、菌群多样性和优势菌检测将阴道分泌物接种到血平板上，培养24～48 h，确定优势菌进行鉴定。

2结果

2.1输卵管性不孕患者微生物质谱鉴定不同民族患者生殖道微生物菌群存在差异(图1)。在汉族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱峰集中于100～200质荷比，哈萨克族族卵管性不孕患者生殖道微生物质谱峰集中于150～250质荷比，回族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱峰在100质荷比处出现明显的高峰，维吾尔族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱峰在200质荷比处出现明显高峰，蒙古族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱峰集在0～50质荷比之间，出现2个明显高峰(图1)。

2.2输卵管不孕患者生殖道支原体阳性率比较汉族、哈萨克族、回族、维吾尔族和蒙古族输卵管性不孕患者生殖道支原体阳性率差异具有统计学意义，其中哈萨克族阳性率最高(P<0.05)，见表1。

表1　输卵管性不孕患者生殖道支原体阳性率比较/例(%)

2.3输卵管性不孕患者生殖道衣原体阳性率比较输卵管性不孕患者中只有汉族、哈萨克族和维吾尔族衣原体检出阳性，汉族、哈萨克族和维吾尔族衣原体阳性率差异无统计学意义，见表2。

2.4输卵管性不孕患者阴道清洁度比较汉族、哈萨克族、回族、维吾尔族和蒙古族输卵管性不孕患者阴道清洁度差异有统计学意义(P<0.05)，维吾尔族和蒙古族和哈萨克族患者阴道清洁度Ⅲ和Ⅳ的比例明显高于汉族和回族，其中蒙古族不孕症患者阴道清洁度Ⅲ和Ⅳ的比例最高，见表3。

2.5输卵管性不孕患者阴道分泌物细菌学鉴定不同民族输卵管性不孕患者阴道分泌物细菌学检查，乳酸杆菌、大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌的检出率不同，其中哈萨克族、维吾尔族和蒙古族乳酸杆菌检出率明显低于汉族和回族(P<0.05)，维吾尔族和蒙古族患者大肠埃希菌和凝固酶阴性葡萄球菌检出率明显高于其他民族(P<0.05)，见表4。

表2　输卵管性不孕患者生殖道衣原体阳性率比较/例(%)

表3　输卵管性不孕患者阴道清洁度比较/例(%)

表4　不同民族阴道分泌物细菌学检查/例(%)

A： 汉族输卵管性不孕患者； B： 哈萨克族输卵管性不孕患者； C: 回族输卵管性不孕患者； D： 维吾尔族输卵管性不孕患者； E： 蒙古族族输卵管性不孕患者

图1不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物质谱

3讨论

近年来，由于环境和生活习惯的改变，导致了人们生殖能力不断下降，不孕症患者不断增加，我国不孕症发病率为7%～10%[8],而在女性不孕尤其是继发不孕的病因中，输卵管因素占重要地位，约占25%～40%[9]。因此，输卵管性不孕的研究尤为重要。

本研究采用质谱分析发现不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物存在明显差异。已有研究表明，怀孕和非怀孕女性生殖道微生物间在有明显差异[10-11]。Hummele 等[12]发现HIV感染可以导致女性生殖道微生物构成比例改变。本研究发现不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物菌群存在明显差异。

输卵管炎症是造成不孕的重要原因，而在输卵管性不孕患者中有很大比例患有支原体感染[13]。女性支原体感染后，一方面因分解尿素破坏作为天然屏障的弱酸性环境，促使其他病原微生物易于定植、感染而不利于精子成活及可使黏膜细胞坏死,输卵管纤毛运动停滞；另一方面由于孕期激素水平的增加使支原体毒性增强, 诱发免疫性的损伤,破坏母体的自身免疫耐受机制，损伤子宫内膜的代谢和生理功能，干扰和破坏胚胎的发育，最终促进组织胚胎丢失，造成流产及不孕，美国等西方国家已将支原体的检查作为不明原因不孕不育症的必查项目[11]。本研究结果显示，不同民族输卵管性不孕患者支原体感染率存在差异，哈萨克族输卵管性不孕患者支原体阳性率明显高于其他民族，可能和哈萨克族大多居住在牧区具有一定关系。

本研究结果显示不同民族输卵管性不孕患者中衣原体感染在没有明显差异。已有研究发现，衣原体也是导致不孕的病原体之一，其致病机理可能为沙眼衣原体感染抑制了宿主细胞代谢溶酶体释放导致细胞被溶解破坏，也可能与代谢产物的细胞毒性作用引起的过敏反应和自身免疫有关[14-15]。本研究中衣原体感染率明显低于支原体感染，表明衣原体感染可能不是导致新疆地区输卵管性不孕的主要病原体。

本研究发现新疆地区输卵管性不孕患者阴道清洁度存在明显的差异。阴道Ⅲ、Ⅳ清洁度表明阴道炎症，本研究中蒙古族和维吾尔族的阴道清洁度Ⅲ、Ⅳ的比例要高于汉族，这和文献[16-17]的研究结果一致。新疆地区少数民族较多，相对于汉族，少数民族女性结婚较早，早婚、早育、密产、多产现象普遍，维吾尔族离婚率在新疆各民族中较高[18-19],这在无形中增加了其下生殖道感染的可能性。同时很大部分少数民族不孕患者文化程度较低，对于生殖健康的知识了解得很少，这些都导致了少数民族不孕患者阴道清洁度很低。本研究发现，不同民族输卵管不孕患者阴道菌群优势菌存在明显差异，维吾尔族和蒙古族的乳酸杆菌优势菌检出率较低，汉族的乳酸杆菌优势菌检出率最高，这和阴道清洁度的分布一致。

综上所述，新疆地区不同民族输卵管性不孕患者生殖道微生物菌群和支原体检出率均存在明显差异，不同民族输卵管性不孕患者生殖道清洁度也明显不同。本研究为用优势益生菌调整阴道微环境治疗不孕患者提供了依据，也为不孕患者微生态干预治疗提供了新的途径。

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(本文编辑周芳)

Comparative analysis of distribution of genital tract flora in different ethnic patients with tubal infertility in Xinjiang

ZHU Yuejie1, ZHANG Fengbo2， HU Bo1， ZHAO Jing1， WANG Peng1， LI Shaoyu3，LA Xiaolin1， CHEN Yan5

(1SchoolofPublicHealth,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi, 830011;2DepartmentofClinicalLaboratory,3DepartmentofReproductiveFertilityCenter,theFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054;4DepartmentofClinicallaboratory,theTumorAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China;5MedicineSchoolofJiaxingUniversity,Jiaxing314000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the characteristics of the microbial distribution in the genital tract of patients with tubal infertility. Methods558 tubal infertility patients from the First Affiliated Hospital of Xingjiang Medical University were selected. Vaginal Microorganism were analyzed by mass spectra. Vaginal mycoplasma and Chlamydia were detected by real-time PCR. Vaginal fluid was used for bacterial culture and Vaginal cleanliness test. ResultsThere was significant difference in vaginal microecosystem between different ethnic patients with tubal infertility. The most of peak appeared at 100-200 m/z in mass spectrogram. The mycoplasma positive rate of Kazak was 56.52%, which was the highest in the five ethnics (P<0.05). There were significant differences in genital tract cleaning degree among different ethnic groups (P<0.05). Reproductive tract advantage bacterium growth difference had statistical significance among the different ethnics (P<0.05). Lactic acid bacteria positive rates of Han and Hui were much higher than that of Kazak, Uygur and Mongolian. The positive rates of Escherichia coli and Coagulase negative Staphylococcus epidermidis in Kazak, Uygur and Mongolian were much higher than that in Han and Hui. ConclusionThe difference of microbial distribution in patients with tubal infertility may be related to different ethnic groups. There might be some relationship between the distribution and patients with tubal infertility.

Keywords:Chronic tubal inflammatory infertility; microecosystem; mycoplasma urealytium

[收稿日期：2015-12-10]

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.05.020

中图分类号：R711

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)05-0607-04

作者简介：朱玥洁(1987-)，女 ，在读硕士，技师，研究方向：生殖免疫。通信作者：陈艳，女，教授，博士，研究方向：分子免疫，E-mail: 765219598@qq.com。

基金项目：国家自然科学基金(81560322)； 新疆维吾尔自治区自然科学基金(2013211B57)