全自动生化分析仪测定血清高、低密度脂蛋白胆固醇分析性能验证

孙云芝，唐　欧，许安春

(成都市中医药大学附属医院检验科，四川成都 610072)



全自动生化分析仪测定血清高、低密度脂蛋白胆固醇分析性能验证

孙云芝，唐欧，许安春△

(成都市中医药大学附属医院检验科，四川成都 610072)

摘要:目的对在AU5400全自动生化分析仪上检测高/低密度脂蛋白胆固醇(H/LDL-C)的分析性能进行验证。方法参考《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》及国内外有关性能评价的文件和报道,结合临床工作实际,对全自动生化分析仪测定血清H/LDL-C的精密度、正确度、分析测量范围和生物参考区间4项分析性能进行验证和评价。结果H/LDL-C测定在2个不同浓度水平的重复标准差和期间标准差都小于厂家规定的不精密度要求;采用室间质评样本作为参考物质,HDL-C的参考物质偏移值小于参考物质赋值的不确定度，验证厂家声称可靠；LDL-C的参考物质偏移值大于参考物质赋值的不确定度，则将此偏移的验证区间与参考物质的赋值比较，得出参考物质赋值在此验证区间内，表明此差异无统计学意义也认可厂家声称可靠；HDL-C分析测量范围为0.245～2.605 mmol/L,LDL-C的分析测量范围为1.04～12.85 mmol/L，略宽于厂家声明的线性范围；生物参考区间验证结果均在设定的范围之内。结论贝克曼库尔特全自动生化分析仪测定H/LDL-C的分析性能与厂家声明基本一致,符合临床的要求,可以应用于临床。

关键词:全自动生化分析仪；高密度脂蛋白胆固醇；低密度脂蛋白胆固醇；性能验证；精密度；正确度

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)主要由肝脏合成，由载脂蛋白、磷脂、胆固醇及少量脂肪酸组成，是逆向转运的胆固醇酯，可有效降低患动脉粥样硬化及冠状动脉心脏病的危险[1]。HDL-C降低可作为冠心病的危险指标；血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测作为反映缺血性心血管病发病危险的指标已在临床被广泛应用[2]，许多前瞻性研究和临床试验也发现LDL是冠心病发病风险的最主要影响因素[2-3]。《中国成人血脂异常防治指南》明确规定不同危险因素存在情况下LDL-C的控制目标。目前，H/LDL-C检测已经广泛应用于临床。为此，笔者参考《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》及国内外有关性能评价的文件和报道,结合临床工作实际,对全自动生化分析仪测定血清H/LDL-C的精密度、正确度、分析测量范围和生物参考区间4项分析性能进行验证和评价。

1材料与方法

1.1样本来源选取门诊和住院部标本，要求空腹至少8 h后采血，3 500 r/min离心10 min，取血清检测。

1.2仪器与试剂检测仪器为贝克曼-库尔特AU5400全自动生化分析仪。试剂包括，(1)北京中生北控HDL-C检测试剂；(2)北京中生北控HDL-C检测试剂；(3)北京中生北控配套校准品；(4)RANDOX质控血清水平2、水平3。

1.3方法

1.3.1精密度验证精密度验证进行5天，每天一个批次,每个批次选取高、低两个浓度水平的混合血清进行测量。每个批次测量前按照厂家要求进行校准，测量前后均进行室内质控标本测量，如出现室内质控失控，则舍去此批数据，另加一个批次。每个批次对各浓度样本分别重复测量3次。按照公式[4]分别计算重复标准差(Sr)，期间标准差(S1)，厂家声称值σr和σ1，并判断是否小于厂家规定的性能标准。

1.3.3分析测量范围验证按照参考文献[5-7]，在厂家声称的线性范围内选取5～7个浓度样本，尽量覆盖整个线性范围。准备高、低值浓度样本，分别命名样本6(H)和样本1(L)，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H关系配置，形成系列浓度梯度。测量前按照厂家要求进行校准，测量前后均进行室内质控标本测量，如出现室内质控失控，则舍去此次数据，重新测量。每个浓度水平至少测定2次。按照公式计算线性回归方程和相关系数r2,若r2>0.995，则表明厂家声称的线性测量范围是可接受的。

1.3.4生物参考区间验证参考CLSI C28-A2文件[8]，选取健康体检者20例，年龄19～80岁，平均42岁。男女各一半。按照标准操作程序进行检测，对结果进行统计并与设定的参考区间进行比较，若20份标本的检测结果均在设定的参考区间内或不超过2 份标本超出，则验证通过。否则，进行参考区间确立实验。

1.4统计学处理应用SPSS17.0统计软件进行数据分析。分析测量范围的验证中截距a与0的比较用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1精密度验证HDL-C和LDL-C的Sr<σr，表明厂家声称的重复精密度可靠，HDL-C和LDL-C的Sl<σl，表明厂家声称的期间精密度可靠。见表1。

表1　　H/LDL-C精密度验证结果

表2　　HDL-C和LDL-C的正确度验证

2.3分析测量范围验证以实测值为Y轴，预期值为X轴，将结果点在Y-X图上，计算线性性回归方程Y=bX+a。可以得出线性回归方程为Y=0.997 4X+0.008 2，r2=0.999。相关系数r2>0.975,直线回归方程b在0.97～1.03之间，常数小于±(C1+C6)×0.05/2,数据组呈线性关系。HDL的分析测量范围为0.245～2.605 mmol/L，与厂商提供的可报告范围基本一致。以实测值为Y轴，预期值为X轴，将结果点在Y-X图上，计算线性性回归方程Y=bX+a。可以得到线性回归方程为Y=1.004X-0.191 7，r2=0.999 4。r2>0.975，b在0.97～1.03之间，常数在±(C1+C6)×0.05/2范围内,数据组呈线性关系。LDL的分析测量范围为1.04～12.85 mmol/L，与厂商提供的可报告范围基本一致。见表3、4。

表3　　HDL-C分析测量范围验证

表4　　LDL-C分析测量范围验证

2.4生物参考区间验证20份表面健康人血清HDL-C检测浓度范围在1.14～2.16 mmol/L之间，LDL-C检测浓度范围在1.92～3.07 mmol/L之间，均在厂家声明的生物参考区间之内。

3讨论

根据《医疗机构临床实验室管理办法》的要求，临床实验室所用的检验方法、仪器等应保证检验结果的准确可靠，临床实验室应对所选购的商品定量试剂盒进行检查，以保证所选用的试剂盒达到临床实验室要求的临床性能、分析性能、经济性能等各方面的要求。LDL-C检测的参考方法是超速离心法，需要特殊的仪器，操作时间长，临床很难开展[9]。HDL-C检测的参考方法是超速离心结合肝素-锰沉淀法[1]。本检测系统试剂的检测原理是直接法-表面活性剂清除法。本实验对贝克曼库尔特AU5400全自动生化分析仪测定H/LDL-C的主要分析性能进行评价，包括不精密度、不准确度、分析测量范围、生物参考区间来了解该系统的性能。

在本检测系统，5个批次的高、低值混合血清的重复标准差和期间标准差均小于厂家规定的分析性能；正确度的验证，可以采用患者样本与其他检验方法/试剂盒进行正确度验证，也可以采用参考物质进行。本试验使用的是卫生部临检中心2015年第一次脂类室间质评第201514号样本作为参考物质进行验证，计算得出HDL-C的参考物质偏移值小于参考物质赋值的不确定度，则验证厂家声称可靠；LDL-C的参考物质偏移值大于参考物质赋值的不确定度，则将此偏移的验证区间与参考物质的赋值比较，得出参考物质赋值在此验证区间内，表明此差异无统计学意义也认可厂家声称可靠。对于线性测量范围的验证，HDL-C检测系统的分析测量范围为0.245～2.605 mmol/L，略宽于厂家提供的线性范围0.20～2.59 mmol/L，LDL-C检测系统的分析测量范围为1.04～12.85 mmol/L，略宽于厂家提供的线性范围0.30～10.34 mmol/L。20份健康人血清浓度均在设定的参考区间范围内，可以认为现用参考区间适用于本实验室。

综上，本文参考试剂厂家、CLSI文件以及国内关于定量检测分析系统性能评价的相关报道，评价了在AU5400全自动生化分析仪上检测H/LDL-C的性能，基本与厂家申明的性能一致，该检测系统能够用于临床。

参考文献

[1]尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].4版.北京：人民卫生出版社，2015：320-326.

[2]Castelli WP，Garrison RJ，Wilson PW，et al．Incidence of coronary heart disease and lipoprotein levels：the Framingham study[J]．JAMA，1986，256(20):2835-2838．

[3]Expert Panel on Detection,Evaluation,and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults.Executive summary of the third report of the national cholesterol education program(NCEP) expert panel on detection,evaluation,And treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel Ⅲ)[J]．JAMA，2001，285(19):2486-2497．

[4]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.WS/T 420-2013 临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证[S].北京：中国标准出版社，2013.

[5]王治国.临床检验方法确认与性能验证[M].北京:人民卫生出版社，2009:153-159.

[6]冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M].2版.上海：上海科学文献技术出版社，2008:111-138.

[7]张秀明，庄俊华，郑松柏，等.临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法[J].中华检验医学杂志，2007，30(11):1293.

[8]Clinical and Laboratory Standards Institute.C28-A2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2000.

[9]王蓓丽，孙林，潘柏申.低密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究进展[J].检验医学，2013,28(11)：975-980.

(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.044

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)08-1117-03

△通讯作者，E-mail：31922465@qq.com。

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