非小细胞肺癌组织中转录因子Oct4、Sox2的表达变化及意义

项保利，钱海红，李琛，苏菁，冯平(河北北方学院附属第一医院，河北张家口 075000)



非小细胞肺癌组织中转录因子Oct4、Sox2的表达变化及意义

项保利，钱海红，李琛，苏菁，冯平(河北北方学院附属第一医院，河北张家口 075000)

摘要：目的观察非小细胞肺癌组织中转录因子Sox2和Oct4的表达变化，并探讨其意义。方法 选取非小细胞肺癌患者45例和肺部良性病变患者30例，采用免疫组化法和RT-PCR 法检测Sox2、Oct4蛋白在两种不同组织中的表达，分析非小细胞肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白表达与临床病理参数的关系。结果Sox2、Oct4在30例肺部良性病变组织中表达均为阴性。45例非小细胞肺癌组织中Sox2蛋白阳性24例，阳性表达率为51.1%；Oct4蛋白阳性33例，阳性表达率为73.3%。Sox2、Oct4蛋白水平随分化程度的增高而降低，随TNM分期的增高而升高，差异有统计学意义(P均<0.05)。Sox2与Oct4在肺癌组织中的表达无相关性(P>0.05)。Sox2、Oct4均阳性表达者远处转移发生率明显高于阴性表达者(P<0.05)。结论 非小细胞肺癌组织中Sox2与Oct4表达升高，并与肿瘤分期、分化程度密切相关；二者可能参与了非小细胞肺癌的发生发展。

关键词：非小细胞肺癌；转录因子；Sox2蛋白；Oct4蛋白

目前肺癌的主要诊断方法有CT、超声、内镜及血清肿瘤标记物检查[1,2]，但始终无法将检查的便利性、高效性与敏感性兼得。肿瘤干细胞是肿瘤细胞中的一个细胞亚群，数量较少，但有高度的自我更新能力与增殖能力，具有形成肿瘤的潜在可能，多种恶性肿瘤皆由一种肿瘤干细胞诱导产生[3]。Sox2、Oct4是有代表性的干细胞转录因子，在干细胞生长与发育过程中发挥重要调控作用，二者突变和异常表达与诸多体内肿瘤有关[4]。2011年1月～2013年7月，我们采用RT-PCR法对肺部良性病变及非小细胞肺癌患者组织中的Sox2、Oct4表达情况进行分析，探讨其与非小细胞肺癌发生发展的关系。

1资料与方法

1.1临床资料非小细胞肺癌患者45例，男31例、女14例，年龄37～74(59.41±6.39)岁。依据2004年制定的WHO肺癌分类标准对患者进行分型及分期，45例患者中鳞癌23例，腺癌22例；低分化18例，中-高分化27例;TNM分期Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ期12例，Ⅳ期5例。另取30例性别、年龄与非小细胞肺癌患者匹配的肺部良性病变患者作为对照组，其中炎性病变21例，肺结核9例。

1.2Sox2、Oct4蛋白表达检测手术切除组织标本一部分用甲醛固定、石蜡包埋用于免疫组化检测。另一部分保存于-80 ℃冰箱中用于RT-PCR检测。①Sox2、Oct4蛋白定性表达检测：采用免疫组化法。严格按试剂盒说明书操作，一抗试剂由Santa Cruz公司提供。光镜下观察，如细胞核内发现有黄色、棕黄色或褐色颗粒为阳性反应。每张切片上选取5个高倍视野，每个视野计数细胞100个细胞。阳性细胞数>10%为Sox2、Oct4蛋白阳性表达，<10%为阴性表达。②Sox2、Oct4蛋白定量检测：采用RT-PCR法。按TRIzol说明书提取RNA，逆转录合成cDNA。反应体系为10 μL，包括10×反转录缓冲液1 μL，10 mmol/L dNTP合物1 μL，25 mmol/L MgCl22 μL，样本RNA酶抑制剂0.25 μL，去RNA酶，水加至总体积为10 μL。反应条件为55 ℃ 30 min，95 ℃ 5 min，5 ℃ 5 min。PCR产物扩增反应体系包括5×PCR缓冲液10 μL，DNA聚合酶0.25 μL，目的基因上、下游引物各0.5 μL。共扩增循环35次，72 ℃延伸10 min。取扩增产物10 μL 于15 g/L琼脂糖凝胶中电泳，溴化乙锭染色后采用凝胶成像仪透射检测结果。

2 结果

2.1Sox2、Oct4蛋白在肺癌组织与肺部良性病变组织中的表达比较Sox2、Oct4蛋白在30例肺部良性病变组织中表达均为阴性。45例非小细胞肺癌患者Sox2蛋白阳性24例，阳性表达率为51.1%；Oct4蛋白阳性33例，阳性表达率为73.3%。Sox2、Oct4蛋白在肺癌组织与肺部良性病变组织中的表达差异有统计学意义(P均<0.05)。Oct4阳性33例中Sox2阳性15例，阴性18例；Oct4阴性12例中Sox2阳性9例，阴性3例；Sox2与Oct4在肺癌组织中的表达无相关性(P>0.05)。

2.2不同临床病理参数非小细胞肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白表达比较Sox2、Oct4蛋白表达随分化程度的增高而降低，随TNM分期的增高而升高，差异有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1　　　　不同临床病理参数非小细胞肺癌组织中Sox2、

2.3Sox2、Oct4蛋白表达与远处转移的关系对45例非小细胞肺癌患者术后随访2年，45例患者中Sox2、Oct4蛋白均为阳性者15例，其中发生远处转移12例；Sox2、Oct4蛋白均为阴性者12例，发生远处转移1例。Sox2、Oct4蛋白表达均阳性者远处转移发生率明显高于均阴性者(P<0.05)。

3讨论

近年来肿瘤干细胞理论研究表明，肿瘤中存在这样一小亚群细胞，为肿瘤的“启动细胞”，他们具有高度的自我更新和增殖能力，同时还可抵抗治疗，可视为肿瘤难治、复发的根源[5，6]。研究发现，转录因子Sox2、Oct4在维持和调节肿瘤干细胞的自我更新能力、侵袭力方面起重要作用。在对肿瘤干细胞进行Sox2及Oct4基因敲除后，这些细胞由此便失去了自我更新与增殖形成肿瘤的能力，最终导致凋亡[7]。

癌症可视为一种慢性炎症性疾病，慢性炎症可通过可溶性介质改变细胞生长的微环境，促进癌症的发生与发展。研究表明，合并有慢性肺部疾病的患者其肺癌发病率明显升高。其机制为非特异性炎症的长期刺激，上皮细胞异常增生，从而诱发癌变[8]。本研究结果显示，Sox2、Oct4在30例肺部良性病变组织中表达均阴性；在45例非小细胞肺癌中，Sox2、Oct4阳性表达率分别为51.1%、73.3%。提示其在肺癌发生发展中有重要调控作用。本研究结果显示，Sox2与Oct4在肺癌组织中的表达无相关性。但之前已有研究证明在胚胎干细胞中Sox2过高表达会导致Oct4表达下降[9]。基于肿瘤干细胞与胚胎干细胞间存在的诸多相似性，因此我们认为在非小细胞肺癌中，Sox2与Oct4表达是相互拮抗的，一方高表达往往伴随另一方低表达。本研究对肺癌患者随访结果显示，Sox2、Oct4不同表达状态者间远处转移发生率存在统计学差异，两项指标均阳性表达者发生远处转移概率较高，且转移发生时间早，Sox2、Oct4高表达可视为肺癌的不良预后因素。

肿瘤的发生、发展、复发及转移是多种细胞、基因参与其中的复杂过程，肿瘤干细胞理论成为当前肿瘤领域的前沿内容，为肿瘤的诊断与治疗提供了新的靶向性[10]。Sox2与Oct4在肺癌组织中呈高水平表达，并与肿瘤分期、分化程度密切相关，二者可能参与了非小细胞肺癌的发生、发展。

参考文献：

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(收稿日期：2015-12-09)

中图分类号：R734.2

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)13-0081-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.032